2015主管臨床醫(yī)學(xué)檢驗血液學(xué)講義

1、血紅蛋白異常所致的貧血及其實驗一、血紅蛋白的結(jié)構(gòu)與功能血紅素：血紅素是 Hb、肌紅蛋白、多種酶（如過氧化氫酶）和多種細胞色素的輔基，其主要在骨髓內(nèi)的幼紅細胞和肝細胞線粒體。與臨床有關(guān)的是尿卟啉、糞卟啉和原卟啉，當卟啉代謝血紅素不全，并可能產(chǎn)生卟啉病。珠蛋白：人類的珠蛋白肽鏈有 、 鏈；這些肽鏈按四級結(jié)構(gòu)形成 Hb。的場所時，3.生理性血紅蛋白：幾種正常生理性血紅蛋白在時期和出生后有明顯的不同。新生兒期內(nèi) HbF（22）仍高，以后 24 月漸下降，1 歲左右接近成人水平。成人血紅蛋白 HbA（22）出生后逐漸增多，占 95%97%，HbA2（22）出生后占 1.2%3.5%。4.血紅蛋白的功能：

2、02 和 CO2。二、血紅蛋白異常的檢驗及其應(yīng)用1.血紅蛋白電泳（1）原理：根據(jù)不同的血紅蛋有不同的電荷，等電點不同，在一定的緩沖液中，緩沖液的大于 Hb 的等電點時其帶負電荷，電泳時在電場中向陽極泳動，反之，Hb 帶正電荷向陰極泳動。經(jīng)一定電壓和時間的電泳，不同的血紅蛋白所帶電荷不同、相對分子質(zhì)量不同，其泳動方向和速度不同，可分離出各自的區(qū)帶，同時對電泳出的各區(qū)帶進行電泳掃描，可進行各種血紅蛋白的定量分析。2）參考值1） 8.6TEB 緩沖液醋酸膜電泳：正常血紅蛋白電泳區(qū)帶：HbA95%、HbF2%、HbA2 為 1.0%3.1%。8.6TEB 緩沖液適合于檢出 HbA、HbA2、HbS、H

3、bC，但 HbF 不易與 HbA 分開，HbH 與 HbBarts 不能分開和顯示，應(yīng)再選擇其他緩沖液進行電泳分離。2） 6.5TEB 緩沖液醋酸膜電泳：主要用于 HbH 和 HbBarts 的檢出。HbH 等電點為 5.6，在則在點樣點不動，而其余的血紅蛋白都向陰極移動。3）臨床意義6.5TEB 緩沖液中電泳時泳向陽極，HbBarts1）通過與正常人的血紅蛋白電泳圖譜進行比較，可發(fā)現(xiàn)異常血紅蛋白區(qū)帶。如 HbH、HbE、HbBarts、HbS、HbD 和 HbC 等異常血紅蛋白異常。2）HbA2 增多，見于 珠蛋白性貧血，為雜合子的重要指標。HbE 病時也在 HbA2區(qū)帶位置處增加，但含量很

4、大（在 10%以上）。HbA2 輕度增加亦可見于肝病、腫瘤和某些血液病。2.抗堿血紅蛋白測定（1）原理：又稱堿變性試驗。血紅蛋白（HbF）具有抗堿和抗酸作用。其抗堿作用比 HbA 更強。將待檢的溶血液與一定量的 NaOH 溶液混合，作用 1 分鐘后加入半飽和硫酸銨中止堿變性反應(yīng)。HbF 抗堿變性作用強，沒有變性存在于上清液中，HbA 變性沉淀，取上清液于 540nm 處測定吸光度，檢測出 HbF 的濃度。此試驗也稱為堿變性試驗，其檢測的是抗堿血紅蛋白，除 HbF 外，HbBarts 和部分 HbH 也具有抗堿能力，需通過電泳鑒別。參考值：新生兒40%，2 歲以后至（2）臨床意義：于 2.5%。

5、珠蛋白生成性貧血 HbF 增續(xù)性血紅蛋白癥 HbF 高至 100%。某些疾病時 HbF 相對增加，包括惡性疾病有放射療法后骨髓化、骨髓轉(zhuǎn)移、急性或慢性白血病、漿細胞瘤；非惡性疾病有再生性貧血、純紅細胞再障、PNH、未治療惡性貧血、卟啉病等。3.異丙醇沉淀試驗（1）原理：不穩(wěn)定血紅蛋白較正常血紅蛋白更容易裂解，在異丙醇這種能降低血紅蛋白分子的氫鍵的非極性溶劑中，不穩(wěn)定血紅蛋白更快地沉淀。通過觀察血紅蛋白液在異丙醇中的沉淀現(xiàn)象對不穩(wěn)定血紅蛋白進行篩檢。結(jié)果：正常人血紅蛋白液為（2）臨床意義：（30 分鐘內(nèi)不沉淀）。不穩(wěn)定血紅蛋白（包括 HbH）于 5 分鐘時出現(xiàn)沉淀，20min 內(nèi)沉淀逐漸增加，甚

6、至成絮狀或粗顆粒狀。血液中含有較多 HbF、HbH、HbE 時也可出現(xiàn)陽性結(jié)果。4.紅細胞包涵體試驗（1）原理：將煌焦油藍液與新鮮血液一起孵育，不穩(wěn)定血紅蛋白易變性沉淀形成包涵體。結(jié)果：。（2）臨床意義不穩(wěn)定血紅蛋白病、HbH 病呈陽性。 5.HbA2 測定原理：同血紅蛋白電泳。參考值：1.2%3.5%。臨床意義：同血紅蛋白電泳。6.珠蛋白肽鏈分析原理：尿素或?qū)β?苯甲酸能破壞血紅蛋白的空間結(jié)構(gòu)，血紅蛋白的珠蛋白可被裂解成肽鏈亞單位，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳可分離出各肽鏈區(qū)帶。參考值：HbA 裂解后有四條帶，可泳出四條帶，分別為 、HbA、HbA2、 帶。臨床意義：若有異常血紅蛋白，則出現(xiàn)異常

7、Hb 和異常肽鏈。肽鏈速率檢測對地中海貧血有參考價值。聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）擴增結(jié)合等位特異寡核苷酸（ASO）探針雜交法（PCR-ASO 法）是目前采用的最常用的-珠蛋白生成性貧血或 -珠蛋白生成性貧血的方法。7.紅細胞鐮變試驗（1）原理：在低氧分壓條件下，HbS 轉(zhuǎn)變?yōu)檫€原狀態(tài)后溶解度降低，從而聚變形，呈鐮刀狀。短棒狀凝膠使紅細胞結(jié)果：，無鐮變細胞。（2）臨床意義：陽性見于細胞貧血（HbS ?。?，HbBarts、HbI 病可見少量細胞。三、血紅蛋白病的實驗1.血紅蛋白病的定義和分類 血紅蛋白病是一組由于生成血紅蛋白的珠蛋白肽鏈（、）的結(jié)構(gòu)異?；螂逆溗俾实母淖?，而引起血紅蛋白功能異常所致的疾病

8、。血紅蛋白病多為遺傳性，如：因控制遺傳的珠蛋白發(fā)生突變所致的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白病；因指導(dǎo)珠蛋白速率的遺傳缺陷所致的珠蛋白生成性貧血或稱海洋性貧血。另外，也可見獲得性血紅蛋白病。通常是由接觸或誤服化學(xué)藥物所致。常見的結(jié)構(gòu)性血紅蛋白病是因的珠蛋白的氨基酸序列改變而引起血紅蛋白功能或理、化性質(zhì)異常的疾病，如：引起血紅蛋白異常聚合的 HbS ??；不穩(wěn)定血紅蛋白癥、高鐵血紅蛋白血癥等。常見的珠蛋白生成性貧血為 或 珠蛋白生成性貧血。也有多種異常導(dǎo)致的血紅蛋白病，如 HbE、Hb Constant Spring、Hb Lepore 等。見下表。血紅蛋白病分類.結(jié)構(gòu)性血紅蛋白病：Hb 氨基酸序列改變，引起物理化

9、學(xué)功能異常異常血紅蛋白 HbS：異常 Hb 聚合作用，O2 親和力改變62.細胞性貧血（HbS ?。?HbA 鏈上第 6 位谷氨酸被纈氨酸替代形成 HbS（Hb 22 谷纈）。HbS 在脫氧狀態(tài)下，互相，形成多聚體。外周血涂片紅細胞：大小不等，嗜多色性紅細胞及嗜堿性點彩紅細胞增多，有核紅細胞、靶形紅 細胞、異形紅細胞、Howell-Jolly 小體均多見。特殊試驗：鐮變試驗陽性，外周血中加還原劑 （2%偏重硫酸鈉 NaHS205），制成濕片后，在鏡下檢查有無鐮變細胞出現(xiàn)。血紅蛋白電泳：顯示 HbS 占 80%以上，HbF 增多 2%15%，HbA2 正常，HbA 減少。3.血紅蛋白 E 病即

10、 鏈第 26 位谷氨酸被賴氨酸取代的血紅蛋白病。呈小細胞低色素性貧血，血片中靶形紅細胞明顯增多；網(wǎng)織紅細胞輕度增加；紅細胞滲透脆性減低。血紅蛋白電泳：可見 HbE 明顯增高，有的病例 HbF 也增高。（3）因 HbE 不穩(wěn)定，異丙醇沉淀試驗陽性和熱變性試驗弱陽性；變性珠蛋白小體檢測（煌焦油變性珠蛋白小體生成試驗）陽性。和4.高鐵血紅蛋白血癥（HbM）：也稱高鐵血紅蛋白 M 病，是由于血紅蛋白肽鏈中 87、92、58、63位組氨酸被酪氨酸取代，酪氨酸酚側(cè)鏈上的羥基（OH）與二價鐵離子結(jié)合，形成穩(wěn)定的高鐵血紅蛋白（MetHb）而失去攜氧能力，引起與 HbA 分離較開，溶血液 化后吸收。血液呈紫色，

11、試管內(nèi)通氧不變鮮紅。 7.1 緩沖液血紅蛋白電泳 HbM，部分 HbM 熱變性試驗呈陽性。5.不穩(wěn)定血紅蛋白?。河捎诳刂蒲t蛋白的肽鏈的失，使血紅蛋白分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，易發(fā)生變性和沉淀。（1）血片中紅細胞：大小不均，異形或碎片。突變，維持 Hb 穩(wěn)定性有關(guān)的氨基酸被取代或缺（2）特殊試驗：熱變性試驗、異丙醇試驗及變性珠蛋白小體試驗陽性。但以上試驗易出現(xiàn)假陽性，需做正常對照。6.珠蛋白生成性貧血：原名為地中海貧血或海洋性貧血。本病是由于遺傳的珠蛋白缺失，使血紅蛋白中一種或一種以上珠蛋白鏈缺如或所致的貧血。高親和力：紅細胞增多癥 低親和力：發(fā)紺、假性貧血不穩(wěn)定血紅蛋白血癥：溶血、黃疸HbM：高鐵血紅

12、蛋白血癥、發(fā)紺.珠蛋白鏈 速率缺陷 -珠蛋白生成 性貧血 -珠蛋白生成 性貧血-、-、-珠蛋白生成 性貧血.結(jié)構(gòu)性血紅蛋白?。貉t蛋白結(jié)構(gòu)性異常，伴有珠蛋白生成性貧血表現(xiàn)型：HbE、HbG、Hb Constant Spring、Hb Lepore.遺傳性血紅蛋白持續(xù)癥：至成年持續(xù)性血紅蛋白增多全紅細胞 HbF 增多部分紅細胞 HbF 增多.獲得性血紅蛋白病高鐵血紅蛋白血癥碳氧血紅蛋白血癥硫化血紅蛋白血癥其他 HbF、HbA2、HbH 增高，尚可見于后天獲得性疾病主要臨床疾病性貧血：缺失一個 （/ 或 /）者稱為+珠蛋白生成（1）-珠蛋白生成型，缺失兩個（+/+即/ 或/）稱為0 珠蛋白生成性貧

13、血性貧血+/0 即 /或/）雙重雜合子稱為 HbH 病，缺失四個 （0/0），缺失三個 純合子稱為 Hb Barts 病。型患者平常無癥狀，血象無特殊異常，僅在出生 8 個月時 Hb 電泳發(fā)現(xiàn) HbBarts 輕度增加（小于 2%），后?；颊甙Y狀輕，紅細胞包涵體試驗陽性，鹽水滲透脆性下降，Hb 電泳 HbBarts 增高（3%15%）。血紅蛋白 H ?。℉bH）有輕度至中度貧血，靶形紅細胞增多，MCV 和 MCH 降低。Hb 電泳出現(xiàn) HbH 及 Bart帶，分別高達 5%30%和 5%18%，包涵體試驗、熱不穩(wěn)定試驗和異丙醇試驗均可呈陽性，紅細胞短。期縮HbBart 病 Hb 明顯下降，紅細胞中心淡染，異形、靶形和有核紅細胞增多，血紅蛋白電泳在陽極出現(xiàn)HbBarts 大于 90%，可見少量的 HbH 和 HbPortland，抗堿血紅蛋白增加。（2）-珠蛋白生成性貧血：臨床分為輕型、微型、中間型、重型，也可按純合子和雜合子區(qū)分。輕型僅有輕度小細胞低色素性貧血，靶形紅細胞和網(wǎng)織紅細胞增多，可見嗜堿性點彩。Hb 電泳，HbA2 明顯增高是其特點，HbF 正?；蜉p度增加。重型血象靶形細胞多達 10%35%，網(wǎng)織紅細胞增生，HbF 增高大于30%。骨髓紅系增生過度，細胞內(nèi)外鐵增多，脆性試驗顯著降低。中間型關(guān)于血紅蛋白的描述，錯誤的是A.血紅蛋白是由 4