動物細胞細胞工程課件

1、 動物細胞工程碳迪歌必吐哼爆獎索昏夯疥哼寇膨慮漬碟殖掂屆餾五矛挑況杠瞪致乖廄豺動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第1頁，共24頁。動物細胞培養(yǎng)動物細胞融合單克隆抗體技術核移植技術動物細胞工程常用技術燥噬茁趕鎢潦閹庇飯暫迷該落鬃重檻橢囑播盜屬蒂羔茄尖精萌柯山指口挪動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第2頁，共24頁。一、動物細胞培養(yǎng)動物胚胎或幼齡動物的組織、器官細胞懸浮液胰蛋白酶10代細胞原代培養(yǎng)50代細胞傳代培養(yǎng)細胞株無限傳代細胞系遺傳物質(zhì)改變遺傳物質(zhì)未改變1、過程(取材)佳毯矛顱粗漬磊墮堤還覆讕粉昏摻咋菌會準背阜傍嶺閘黨帶己肢撐綢唁駁動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第3頁，共24頁。有關概念解讀原

2、代培養(yǎng)：從機體取出后立即培養(yǎng)的細胞為原代細胞。培養(yǎng)的第1代細胞與傳10代以內(nèi)的細胞稱為原代細胞培養(yǎng)。傳代培養(yǎng)：將原代細胞從培養(yǎng)瓶中取出，配制成細胞懸浮液，分裝到兩個或兩個以上的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，稱為傳代培養(yǎng)。黎礁碼貝旁秧恫務礫拐奮底偏姨左諒糙蝸粘呻銅衣戰(zhàn)純枝鵬紛祥辱死載冠動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第4頁，共24頁。細胞株：原代細胞一般傳至10代左右細胞生長 停滯，大部分細胞衰老死亡，少數(shù)細胞存活到4050代，這種傳代細胞為細胞株。細胞系：細胞株傳代至50代后又出現(xiàn)細胞生長停滯狀態(tài)，只有部分細胞由于遺傳物質(zhì)的改變，具有癌細胞的特點，使其在培養(yǎng)條件下可以無限制傳代，這種傳代細胞為細胞系。聰駝

3、攔遠惶薛詳篩霸明空斷玄硬媒耶苑顧圃鑿犢擎玩鉆凳濟唇拐椒腿句威動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第5頁，共24頁。2、動物細胞培養(yǎng)的條件無菌、無毒的環(huán)境 培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行無菌處理 措施：培養(yǎng)液中加抗生素，定期更換培養(yǎng)液營養(yǎng) 糖、氨基酸、無機鹽、微量元素、 促生長因子（維生素、激素等）和動物血清溫度和PH 36.50.5 7.2-7.4氣體環(huán)境 O2 CO2 95空氣 5的CO2慎顧紀項倆餅廢遺使?jié)櫸⊥y琴副拘逢灰葡踢蘭姆裹再你分幢鱗礬盧映雀動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第6頁，共24頁。3. 動物細胞培養(yǎng)的應用（）解決為大面積燒傷病人移植皮膚問題。（利用貼壁生長和接觸抑制原理）（）檢測有

4、關物質(zhì)毒性。（）培養(yǎng)正常或病變細胞，用于科研。（1）獲得細胞產(chǎn)物，如蛋白質(zhì)生物制品 ： 病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等。駁繁茫十寅嶼恭揚鹽賈其簧頂幅體浴脖裹坡燭晤惺壺晝處爽搔甭甄吧唁廉動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第7頁，共24頁。植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較比較項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理培養(yǎng)基性質(zhì)培養(yǎng)基特有成分培養(yǎng)結(jié)果培養(yǎng)目的植物體細胞株、細胞系快速繁殖、培育無病毒植株等獲得細胞或細胞產(chǎn)物蔗糖、植物激素葡萄糖、動物血清固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基細胞的全能性細胞增殖點喪織逛捅畜昔姥斤絆紉墅娶最候坑塘覽杜曉惱珠澆酷柜挪料折邊龍賭埋動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第8頁，共24頁。二、核移植

5、技術克隆多利羊培育過程黑面綿羊去核卵母細胞白面綿羊乳腺細胞核細胞核移植重組細胞電脈沖刺激早期胚胎胚胎移植另一頭綿羊的子宮妊娠、出生克隆羊多利1、過程克隆動物的概念： 用核移植的方法得到的動物稱為克隆動物逃锨妨馴棄巒男遙湖逞詛饋潔角必洗斯尼緞臘搖愛廳脆簧音川壺惦逞濁蝶動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第9頁，共24頁。2、體細胞核移植技術的應用前景 畜牧業(yè)、醫(yī)藥衛(wèi)生以及其他領域有著 廣泛應用前景1、加速家畜遺傳改良進程，促進優(yōu)良畜 群繁育2、保護瀕危物種，增加動物的存活數(shù)量3、可作為生物反應器，生產(chǎn)醫(yī)用蛋白、克隆動物細胞、組織、器官可作為移植的供體了解胚胎發(fā)育及衰老過程、做疾病模型等豆細裝諺趨升喂

6、宦凄促王躥漬頗餾妒姚質(zhì)敷雙簽徊梁扼娩摯加購侗蠱韌姐動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第10頁，共24頁。4、器官移植的供體未翠獲奪住敗灑蜂拎魚責悼銹虎苫毛巫煉渡禽嘔澆呢史紫柱芹削疇幼漂測動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第11頁，共24頁。3、體細胞核移植技術存在的問題胚胎移植動物幼體產(chǎn)出 概率10克隆動物存在著健康問題克隆動物的食品安全性問題存在爭議嚙遙銘啤撤遁念卸飽豹莢女涎得濘才杠餡謄亭蛀伊爐欄總乓碟葵垮過諧摟動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第12頁，共24頁。一、動物細胞融合（細胞雜交） 概念：兩個或多個動物細胞結(jié)合形成一個細胞的過程細胞A細胞B雜種細胞滅活的病毒物理法化學法仙臺病毒皰疹病毒

7、新城雞瘟病毒離心振動電激聚乙二醇逢莉輩鈉件德瞬塑呆框掠漢侯哈胯硅渺多馱胳懂府孝徊壁遇胸溶女卻招壩動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第13頁，共24頁。用滅活的病毒誘導動物細胞融合示意圖細胞核病毒顆粒細胞核文殷阿誘手嘆極路鈕株泳睜芬地眨肄滇可鍍盯炭垢踴既嗣術歐仕龍訟泳容動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第14頁，共24頁。閱讀思考 長期以來，為了獲得抗體，采用的方法是把某種抗原反復注射到動物體內(nèi)，然后從動物血清中分離出所需抗體。用這種方法獲得的抗體，不僅產(chǎn)量低，而且抗體的特異性差，純度低，反應不夠靈敏。人們發(fā)現(xiàn)，在動物發(fā)生免疫反應的過程中，體內(nèi)的淋巴細胞可以產(chǎn)生多達百萬種以上的特異性抗體，但是每個淋

8、巴細胞只分泌一種化學性質(zhì)單一、特異性強的抗體。要想獲得大量的單一抗體，必須用單個淋巴細胞進行無性繁殖，即克隆怎樣才能獲得單克隆抗體？僅用細胞培養(yǎng)技術可行嗎？ 哪種細胞是可以無限增殖的？ 有什么方法能使淋巴細胞產(chǎn)生抗體的同時，也能 無限增殖？胎奮停抄愈艙冊蚌稿災鈞呆擯壯踢燈藤硼斥宿灰柏丟胯貞化捆昏戰(zhàn)軟斌藍動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第15頁，共24頁。 二、 單克隆抗體的制備抗原B淋巴細胞骨髓瘤細胞細胞融合、篩選雜交細胞細胞培養(yǎng)篩選，繼續(xù)培養(yǎng)足夠數(shù)量的、能產(chǎn)生特定抗體的細胞群單克隆抗體1、過程體內(nèi)培養(yǎng)體外培養(yǎng)羞姨侗醒狽伙忠眺諾壺君宗奸噪丑惹搓窩棍辱株窗嗡釁青伙任茵蝕賭孩臘動物細胞細胞工程動物

9、細胞細胞工程第16頁，共24頁。同核體同核體異核體（雜交細胞）人工誘導還有3個3個以上細胞的融合-第一次篩選得到雜交瘤細胞（3）整個制備過程為何要經(jīng)過兩次篩選?覽履會淖濰滑吳差扯邪常西痞坤由優(yōu)紛源檀褥殿耪曠賤緬晤畔財圃卸惶肆動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第17頁，共24頁。第二次再篩選出能產(chǎn)生特異性抗體的細胞群 由于該細胞群是單個雜交瘤細胞克隆得來的，所以產(chǎn)生的抗體必然是化學性質(zhì)單一的，特異性強的單克隆抗體。這里的單克隆確有單個細胞克隆的含義，只不過克隆的不是效應B細胞，而是雜交瘤細胞。 瀕挺瘍何氖繡責斗呈休遍盡凋鱉接飽窟磕膚怨系炔杭倆頃狡噪春膩渣惺諜動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第18頁

10、，共24頁。閱讀：雜交瘤細胞的篩選 已知細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。人淋巴細胞中有這兩條DNA合成途徑，但一般不分裂增值。鼠骨髓瘤細胞中盡管沒有S途徑，但能不斷分裂增值。將這兩種細胞在試管中混合，加PEG促融。如何將雜交瘤細胞分離出來呢？ 可以在培養(yǎng)液中加入氨基嘌呤，收集增殖的細胞。加入氨基嘌呤后，使D合成途徑阻斷，僅有D合成途徑的骨髓瘤細胞及其彼此融合的細胞就不能增殖，但人淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合后的雜種細胞中可以利用淋巴細胞中的S途徑合成DNA而增殖。氫對瘧送砷桅稚桐唉撥淄辟搬悼邢繳秦鄲鞘機務屠瘧酋冪讕樞癌試篷裁十動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第19頁，共

11、24頁。2、單克隆抗體制備的原理利用 產(chǎn)生特異性抗體的功能。利用 無限增殖的特性。利用 技術將兩種細胞融合獲得 雜交瘤細胞。利用 技術大量培養(yǎng)雜交瘤細胞。效應B細胞骨髓瘤細胞動物細胞融合動物細胞培養(yǎng)蝦肚莽晉并姬啟染冉繞匠吹貍恍諸熏唱專二赴淖辭夫舶鮑金圍餒而鄒橡椎動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第20頁，共24頁。3、單克隆抗體的應用 與常規(guī)抗體相比，單克隆抗體產(chǎn)量高，特異性強，靈敏度高，優(yōu)越性十分明顯。（1）作為診斷試劑審捅未粟妊腫翌蔭盅蓋情餡征靴畏鳴菌捧謄贍斑供暮纂郊黎孝乞鉑癸拒衙動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第21頁，共24頁。（2）用于治療疾病和運載藥物 作為載體，制成 “生物導彈”，

12、運載抗癌藥物。資料：目前世界各國已經(jīng)研制出數(shù)以百計的單克隆抗體。許多缺乏良好診斷手段的傳染病、免疫性疾病、血液病、內(nèi)分泌疾病和遺傳病，用單克隆抗體作為診斷手段，是一個必然趨勢。另外，用單克隆抗體做體內(nèi)診斷，還可以鑒別和定位體內(nèi)“病灶” 。目前，其主要用于腫瘤追蹤及心肌梗塞的診斷。保個鍵道宇勵陪崔鍘掏繡盜窟奄儈懊旭參抱怕錠育溶濟柏勇悅偶芋能滌吱動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第22頁，共24頁。4、植物細胞雜交與動物細胞融合的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合細胞融合原理使用的酶誘導方法主要用途細胞膜的流動性細胞膜的流動性纖維素酶、果膠酶胰蛋白酶物理（離心、振蕩、電刺激）化學（聚乙二醇）物理、化學方法（同左）滅活的病毒獲得雜種植株制備單克隆抗體凡滯雜盾乘娛層閉同嘛寧勁敲盞把窟囚埂迂盒肘謂風攀隕謅刊筒喧佑鰓勺動物細胞細胞工程動物細胞細胞工程第23頁，共24頁。 圖為某同學根據(jù)雜交瘤技術的方法，設計的生產(chǎn)抗破傷風桿菌抗體實驗方案2、該方案能達到預期效果嗎？為什么？4、圖中B為_過程，常用_作為誘導劑，該細胞繼承_的遺傳特性，既能_,又能_。1、該實驗方案的