臨床免疫學(xué)與檢驗(yàn)：白細(xì)胞分化抗原的檢測

1、白細(xì)胞分化抗原的檢測回顧白細(xì)胞分化抗原：白細(xì)胞分化成熟為不同的譜系后，以及處于不同分化階段和活化過程中，出現(xiàn)或者消失的細(xì)胞表面標(biāo)記。白細(xì)胞、不同分化階段的紅系和巨核細(xì)胞/血小板譜系，以及非造血細(xì)胞如血管內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、上皮細(xì)胞、神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞等。整合性膜蛋白：一種內(nèi)在蛋白，可部分或者完全穿過細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層，通常只有經(jīng)過去污劑處理才能使其脫離細(xì)胞膜。大部分整合性膜蛋白為跨膜蛋白，包括膜外區(qū)，跨膜區(qū)，和胞質(zhì)區(qū)。整合性膜蛋白分為六型：型：一次跨膜，N端在外，C端在內(nèi)，Ig超家族型：一次跨膜，N端在內(nèi)，C端在外，腫瘤壞死因子超家族型：一條多肽鏈多次跨膜，其中四次和七次跨膜受體超家族常見，如G蛋白

2、偶聯(lián)受體型：由多個跨膜亞單位組成型：多肽鏈以糖基磷脂酰肌醇連接于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙層中，如CD16CD55CD58.型：一條多肽鏈的一端以GPI形式連接于胞質(zhì)，另一端是一次或多次跨膜，如膜橋蛋白。第一節(jié) 白細(xì)胞分化抗原及其功能與T細(xì)胞識別、黏附、活化有關(guān)的CD分子CD3分子Diagram showing T-cell receptor (TCR) surface expression and the interaction with a peptide-presenting major histocompatibility complex (MHC) class I molecule. TCR a

3、lpha/beta heterodimers associate with the chains of the CD3 complex. This association is essential for expression of the TCR on the cell surface. The CD3 chains are also essential for signal transduction. The red dots represent immunoreceptor tyrosine-based activation motifs that can be phosphorylat

4、ed when the TCR recognizes a peptide presented by an MHC molecule. CD4分子IL-16RCD8分子CD2分子又稱淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原2（LFA-2）.配體：CD58CD2增強(qiáng)了T細(xì)胞與APC或靶細(xì)胞之間的黏附，并促進(jìn)T細(xì)胞對抗原的識別和激活。CD58又稱淋巴細(xì)胞功能相關(guān)抗原3.CD58分子有跨膜和GPI連接兩種形式分布于T細(xì)胞、B細(xì)胞、單核細(xì)胞、DC、中性粒細(xì)胞、血小板和紅細(xì)胞，上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞等表達(dá)CD58的APC細(xì)胞或者靶細(xì)胞通過與CD2分子結(jié)合，有利于TCR識別抗原并參與T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。CD40L(CD15

5、4)屬于TNFSF表達(dá)于活化的CD4+T或者部分CD8+T，以及活化的嗜堿性粒細(xì)胞、肥大細(xì)胞、NK細(xì)胞、活化B細(xì)胞等傳遞B細(xì)胞活化的第二信號與Ig類別轉(zhuǎn)換有關(guān)。CD28幾乎所有的CD4+T細(xì)胞和50%CD8+T細(xì)胞傳遞T細(xì)胞活化的第二信號CTLA-4(CD152)為細(xì)胞毒型T細(xì)胞相關(guān)分子靜止的T細(xì)胞不表達(dá)CTLA-4，T細(xì)胞活化后誘導(dǎo)表達(dá)，可以與B7分子結(jié)合，提供抑制性信號，阻止T細(xì)胞活化。用于免疫耐受研究與B細(xì)胞識別、黏附、活化有關(guān)的CD分子Ig/Ig(CD79a/cd79b)介導(dǎo)信號的轉(zhuǎn)導(dǎo)B細(xì)胞的特征（漿細(xì)胞不表達(dá)）CD19B細(xì)胞重要標(biāo)志（除漿細(xì)胞）CD19組成CD19/CD21/CD81

6、信號復(fù)合物，參與B細(xì)胞的激活CD21（CR2）參與B細(xì)胞活化與CD23結(jié)合，若與 膜型CD23結(jié)合，則對IgE產(chǎn)生具有調(diào)節(jié)作用；若與sCD23結(jié)合，則刺激B細(xì)胞增殖。EB病毒受體。CD81又稱增殖抗體靶抗原分布于B細(xì)胞、T細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、DC、NK和嗜酸性粒細(xì)胞組成B細(xì)胞信號復(fù)合體丙型肝炎病毒受體CD40表達(dá)于APC，以及某些上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、淋巴樣并指細(xì)胞、FDC以及活化的單核細(xì)胞。誘導(dǎo)B細(xì)胞活化的第二信號系統(tǒng)CD22屬于唾液酸黏附素家族，可結(jié)合唾液酸表達(dá)于靜止B細(xì)胞，B細(xì)胞活化后可以上調(diào)CD22表達(dá)胞漿區(qū)含有ITIM基序CD80/CD86即B7-1/B7-2，靜止單核細(xì)胞和樹

7、突狀細(xì)胞CD80、CD86，活化T、B和單核細(xì)胞表達(dá)均高。CD80/86與CD28結(jié)合為T細(xì)胞的活化提供重要的協(xié)同刺激信號第二節(jié) CD分子檢測技術(shù)免疫熒光細(xì)胞組織化學(xué)技術(shù)免疫酶細(xì)胞組織化學(xué)技術(shù)細(xì)胞黏附法分子生物學(xué)檢測方法一、免疫熒光細(xì)胞組織化學(xué)技術(shù)免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù) 原理：將免疫細(xì)胞CD分子作為抗原，與抗CD分子的熒光標(biāo)記抗體反應(yīng)，分別通過流式細(xì)胞儀或者熒光顯微鏡對免疫細(xì)胞CD分子進(jìn)行定量或定性檢測免疫熒光組織化學(xué)技術(shù) 將組織進(jìn)行切片，把組織中的CD分子作為抗原物質(zhì)，再與熒光標(biāo)記的抗體反應(yīng)，通過熒光顯微鏡對CD分子進(jìn)行定性分析。二、免疫酶組織化學(xué)技術(shù)辣根過氧化物酶法 將抗CD分子的單克隆抗體用辣根過氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記，然后進(jìn)行抗原抗體特異性結(jié)合反應(yīng)，加入酶作用底物，進(jìn)而形成顯微鏡下可見的終反應(yīng)產(chǎn)物。ABC法（生物素親和素放大系統(tǒng)） 生物素與酶結(jié)合，形成生物素化的HRP，以生物素化HRP與親和素按一定比例混合，形成復(fù)合物。三、分子生物學(xué)檢測方法RT-PCR技術(shù)原位雜交技術(shù) 使用含有特異性序列、經(jīng)過標(biāo)記的核酸單鏈即探針，在適宜條件下與組織細(xì)胞中的互補(bǔ)核酸單鏈即靶核酸雜交，再以放射自顯影或