液相色譜儀基本操作培訓(xùn)

1、精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)專心-專注-專業(yè)精選優(yōu)質(zhì)文檔-傾情為你奉上專心-專注-專業(yè)液相色譜儀基本操作培訓(xùn)一、HPLC常規(guī)分析操作步驟及規(guī)程嚴(yán)格過濾色譜純流動相，根據(jù)需要選擇不同的濾膜對抽濾后的流動性進行超聲脫氣20-30min首先進行液相色譜儀使用登記，更換需要使用的色譜柱。打開儀器泵系統(tǒng)的電源開關(guān)，儀器啟動自檢完成后，打開色譜工作站，進行參數(shù)設(shè)置。松開排氣旋鈕，進行排氣處理。調(diào)節(jié)流速，初次使用新的流動相，可以需要先關(guān)注壓力，根據(jù)壓力的情況調(diào)節(jié)合適的流速基線穩(wěn)定后即可進樣分析，分析樣品時對樣品的前處理非常重要分分析實驗結(jié)束后，先關(guān)檢測器氘燈，根據(jù)流動

2、相的成分和所分析樣品的溶解性，用相應(yīng)的沖洗液沖洗液路。如果流動相成分中含鹽，必須用含甲醇10左右的甲醇水溶液充分沖洗系統(tǒng)（沖洗時間不少于40分鐘），再用相應(yīng)的色譜柱保護液（反相色譜柱用乙腈或甲醇，正相色譜柱用正己烷或正庚烷）沖洗色譜柱約20-30分鐘沖洗完畢后，停止泵系統(tǒng)，關(guān)閉電源。卸下色譜柱，封口保存10）檢查系統(tǒng)處于停止?fàn)顟B(tài)，電源斷開后方可離開。二、使用注意事項：1、液路系統(tǒng)1）試劑首先必須是色譜級的2）脫氣：由于流動相中含有微量的空氣，經(jīng)泵的壓力左右，會在流通池里產(chǎn)生氣泡，這對分析產(chǎn)生一定的影響，如噪音增大，甚至于掩蓋信號峰，因此，流動相在使用前必須經(jīng)超聲脫氣20min以上3）過濾：由于

3、流動相里面有微小的顆粒雜質(zhì)，如不經(jīng)過過濾，會使單向閥堵塞，從而產(chǎn)生壓力波動。同時樣品溶液注入液相色譜儀之前也要采用0.45um的濾膜過濾，這一點很多操作人員不太注意，等到產(chǎn)生壓力波動又不知道什么原因產(chǎn)生的。4）在線過濾器必須埋于液面以下。5）液路中的軟管保持平整，避免受擠壓。6）泵運行過程中，不可進行液路的連接和拆卸。7）泵運行中的系統(tǒng)壓力一般不可超過250kg。如果壓力過高，會引起進樣閥泄露，嚴(yán)重時會引起泵的毀壞。8）進行液路的連接和拆卸（排氣、更換色譜柱、液路管等）時，必須先停泵，等壓力降至10附近才可進行更換。9）泵的關(guān)閉：儀器斷開電源前，必須先停泵，等壓力降至10左右才能關(guān)閉電源開關(guān)。

4、10）泵系統(tǒng)的停置：如果儀器使用了水性緩沖劑（尤其是腐蝕性強的鹵化物鹽類）時，泵停置前應(yīng)用大量的水性溶劑沖洗，然后用有機溶劑沖洗。否則腐蝕鹽在系統(tǒng)內(nèi)保持不動，會嚴(yán)重的減少不銹鋼元件的壽命。11）系統(tǒng)所有管路、連接部件、密封部件及泵頭，在更換之后都必須按一定程序進行清洗（丙酮-無水乙醇-二次蒸餾水順次沖洗）后再用氮氣吹干。12）泵頭單向閥的清洗：長期使用過程中單向閥容易被污染，將單向閥取下，放入丙酮或異丙醇中超聲處理半小時即可，超聲時要讓單向閥保持豎直狀態(tài)。13）泵頭的清洗：位于泵頭后部的兩根四氟液路管為清洗管，若流動相中含有鹽的比例較大時，必須對液路進行清洗，清洗步驟如下：將一根清洗管放入到過

5、濾過的蒸餾水中，蒸餾水瓶放置在高處；用針管吸另一根清洗管當(dāng)有水滴出時將其放在一空瓶中，空瓶放在低處，在實驗過程中一直對泵頭進行清洗直到實驗結(jié)束。泵頭每月要定期沖洗一次，時間為1小時。14）若泵運行時壓力突然上升，說明液路有堵塞的地方，檢驗方法遵循從后往前的原則，逐段拆下后，若壓力下降說明此段堵塞，更換或沖洗即可。15）泵工作時要注意流動相不要被用完，設(shè)置警戒停泵溶劑量，否則空泵運轉(zhuǎn)會加快磨損柱塞桿和密封圈。輸液泵的壓力不要太高，否則會使密封圈變形，降低密封圈使用壽命2、色譜柱1）連接時注意流向的正確性2）新柱在使用前必須仔細(xì)閱讀使用說明書后，按說明書的要求使用。3）色譜柱長時間保存時，需用相應(yīng)

6、的色譜柱保護液進行保護，正相色譜柱一般保存于純正己烷中，反相色譜柱一般保存于純甲醇或乙腈中，柱接頭要擰緊，仿制保護液揮發(fā)失去保護的作用。4）連接色譜柱及其他不銹鋼管時，需細(xì)心，各個接頭需配套，不可用力過猛。否則會出現(xiàn)系統(tǒng)漏液或色譜柱柱效降低的情況。5）流經(jīng)反相色譜柱的流動相發(fā)生改變時，不可從有機溶劑直接全部變?yōu)樗?，反之亦然?）若沖洗色譜柱時間較長，注意流動相的體積和流速的大小，以及廢液瓶的裝量情況。7）色譜柱應(yīng)避免壓力和溫度的急劇變化以及機械震動。在進樣的時候，進樣閥扳手不能轉(zhuǎn)動太慢，更不能停留在中間，如停留在中間，泵內(nèi)壓力劇增，這時再轉(zhuǎn)動到進樣位置時，過高的壓力會損壞色譜柱。如出現(xiàn)機械震動

7、（掉在地上）則會改變填料的充填狀態(tài)。 8）以硅膠為載體的鍵合固定相的使用溫度通常不超過40，為了改善分離度可適當(dāng)提高色譜柱的使用溫度，但不能高于609）流動相的pH值大于8時，可使載體硅膠溶解，當(dāng)pH值小于2時，與硅膠相連的化學(xué)鍵合相易水解脫落。因此選擇色譜柱時應(yīng)注意，當(dāng)色譜系統(tǒng)中需要使用pH值大于8的流動相時，應(yīng)選用耐堿性的填充劑，當(dāng)色譜系統(tǒng)中需要使用pH值小于2的流動相時，應(yīng)選用耐酸性的填充劑?，F(xiàn)在的色譜柱商品有很多種，也開發(fā)了很多耐酸堿的色譜柱，選擇時應(yīng)注意其使用的范圍。10）色譜柱的再生 因為色譜柱是消耗品，隨著使用時間或進樣次數(shù)的增加，會出現(xiàn)色譜峰高降低，峰寬加大或出現(xiàn)肩峰的現(xiàn)象，一

8、般來說可能是柱效下降。（1）、反相柱的再生：依次采用20-30倍的色譜柱體積的用甲醇沖洗，用二氯甲烷沖洗，再用甲醇沖洗。（2）、正相柱的再生：依次以20-30倍色譜柱的體積的正己烷、異丙醇、二氯甲烷、甲醇作為流動相沖洗色譜柱。3、檢測器1）檢測器的氘燈有使用壽命，平衡色譜柱或沖洗液路時可關(guān)閉氘燈。2）氘燈關(guān)閉后再次開啟中間的間隔時間至少為5分鐘。3）檢測器的流通池在分析過程中容易被污染而導(dǎo)致基線無法平衡時，需要對檢測器進行清洗，一般先采用水甲醇（約9010）沖洗30分鐘，然后用流速為2ml/min的30的硝酸沖洗30分鐘，然后用純水沖洗直到流出的水溶液顯中性，然后在用純甲醇沖洗2分鐘即可。三、

9、HPLC系統(tǒng)日常維護保養(yǎng)操作程序（適用于所有液相色譜儀）1、HPLC的日常操作環(huán)境條件：溫度：10302 、 流動相處理2.1 流動相均需色譜純度，水用去離子水。脫氣后的流動相要小心振動盡量不引起氣泡。2.2 流動相使用前需用0.45um的適當(dāng)濾膜進行過濾。2.3 對抽濾后的流動相進行超聲脫氣5分鐘。如果流動相由緩沖液和色譜純有機溶劑混合組成，應(yīng)先將緩沖液過濾，按比例將緩沖液和有機溶劑混勻后再超聲脫氣。2.4 所有過柱子的液體均需嚴(yán)格的過濾。2.5正常情況下，樣品測試前儀器首先用不含鹽的流動相或（50甲醇或50乙睛）沖洗10-20分鐘，然后再進入測試用流動相【如流動相為緩沖試劑，則先要用90%

10、水（10%流動相相應(yīng)的有機相）沖洗10-20分鐘，直至色譜柱中有機相沖凈為止】。2.6 每次在使用流動相時，必須先觀察流動相內(nèi)是否有異物及渾濁，如有則不能使用。2.7 配好的流動相應(yīng)貼好標(biāo)簽，并做好相應(yīng)的配制記錄，過期的流動相不能使用，對于含有緩沖鹽的流動相一般應(yīng)新鮮配制使用，如果確實需要貯存，可在冰箱內(nèi)冷藏，并在3天內(nèi)使用，使用前必須過濾。2.8 避免使用金屬腐蝕性溶劑。2.9避免使用腐蝕石英及損壞檢測池光學(xué)特性的堿性溶劑。2.10 應(yīng)根據(jù)流動相的使用情況，配制相應(yīng)量的流動相，避免浪費。2.11 儲存流動相的瓶子隨時保持加蓋狀態(tài)，防止灰塵掉入和有機溶劑揮發(fā)，保護實驗人員身體健康。3、 泵的維

11、護保養(yǎng)：3.1 使用流動相盡量要清潔；3.2 進液處的砂芯過濾頭每月應(yīng)定期清洗：先用洗液浸泡，再用水超聲清洗2-3次，再用水煮2-3次，最后用甲醇浸泡處理。3.3 流動相交換時要防止沉淀；流動相交換時應(yīng)逐步過渡到要換的流動相，特別是交換后易產(chǎn)生沉淀的流動相。3.4 避免泵內(nèi)堵塞或有氣泡；每次使用時做排氣泡處理。排氣時，旋開清洗閥1 1/2圈左右，用4mL/min流速排氣泡，旋緊時不得過緊。3.5 泵殼體必須保持清潔，清潔時用一柔軟的擦布沾上少許水或中性去污劑的水溶液輕輕擦拭，不要用過分濕潤的擦布，以免液體流進泵內(nèi)。3.6 當(dāng)壓力不穩(wěn)定波動，運行滲漏測試證實后，需要更換球形輸出閥。3.7 通過過

12、濾芯的壓力大于10bar時，提示過濾芯有污染物或阻塞現(xiàn)象，用純甲醇浸泡過濾芯并于超聲波清洗器進行清洗，如清洗后仍不能正常工作應(yīng)提出申請更換過濾芯。3.8 泵頭低的一端出現(xiàn)滲漏，說明泵密封圈破損，需要更換密封圈。3.9 在儀器正常運行過程中，不得使泵在沒有流動相的情況下空運行。3.10 帶Seal wash的設(shè)備，在使用有鹽流動相時應(yīng)開Seal wash，用10異丙醇水溶液沖洗，沖洗速度為每分鐘23滴。注意沖洗溶液應(yīng)每周更換一次。3.11 島津儀器使用含鹽流動相后，應(yīng)用純化水沖洗泵殼。4、進樣器的維護保養(yǎng)：4.1 每次分析結(jié)束后，要反復(fù)沖洗進樣口及進樣針，防止樣品的交叉污染；4.2 進樣針要使用

13、專用的配套進樣針，使用前后均要處理干凈，避免污染；不得使用氣相色譜儀的尖頭進樣針。4.3 手動進樣器不使用時，將帶注射器的進樣針插上或套上注射器帽，避免灰塵或異物進入。4.4 所有樣品進樣前必須經(jīng)過過濾，不得將未溶解異物或樣品注入進樣器。4.5 若使用自動進樣器，在取樣機械臂活動范圍內(nèi)不應(yīng)有任何的管線或其他阻擋取樣的物品出現(xiàn)。4.6 自動進樣器六通閥上的進出口管線未經(jīng)許可不得隨意拆卸。4.7 樣品檢測完后，應(yīng)清洗自動進樣器進樣針。5、 色譜柱的保養(yǎng)：5.1 柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動。5.2 當(dāng)柱子和色譜儀聯(lián)結(jié)時，閥件或管路一定要清洗干凈；聯(lián)結(jié)時松緊程度要適當(dāng)，避免漏液及過緊損壞

14、聯(lián)結(jié)處，特別是不同類型儀器間色譜柱的連接。5.3 要注意流動相的脫氣，避免使用高粘度的溶劑作為流動相。5.4 壓力不能太大，最好不要超過200Bar。5.5 進樣樣品要提純；嚴(yán)格控制進樣量。5.6 每天分析工作結(jié)束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品。5.7 每天分析測定結(jié)束后，都要用適當(dāng)?shù)娜軇﹣砬逑粗坏檬褂眉兯疀_洗色譜柱；如使用了含鹽的流動相，應(yīng)先用10不含鹽的有機相（有機相為流動相中所含有的有機相）溶液沖洗柱20分鐘，然后用不含鹽的流動相或50甲醇（或乙睛）沖洗柱30分鐘，再用甲醇或乙睛沖洗柱子20分鐘。5.8 若分析柱長期不使用，反向色譜柱應(yīng)用100甲醇保存并兩端封閉嚴(yán)實，平放于規(guī)定的地方。

15、嚴(yán)禁色譜柱未經(jīng)沖洗就存放。5.9 應(yīng)注意色譜柱的適用范圍，如pH值等，以及流動相在色譜柱中的流動方向。6、檢測器的維護保養(yǎng)：6.1 紫外燈的保養(yǎng)：在分析前、柱平衡得差不多時，方可打開檢測器；在分析完成后，馬上關(guān)閉檢測器。6.2 啟用新的紫外燈時，應(yīng)將燈的使用時間清零。使用時應(yīng)觀察紫外燈的使用時間，當(dāng)紫外燈達到使用壽命時及時更換。6.3 檢測器不得頻繁開關(guān)電源。6.4 檢測器應(yīng)保持清潔，平時可用軟布蘸取少許水或溫和洗滌劑的水溶液進行清洗。清洗布不要過分潤濕以防止液體流入檢測器內(nèi)。6.5 在檢測過程中如發(fā)現(xiàn)噪聲或漂移超過規(guī)定的應(yīng)用限制或燈不亮?xí)r說明紫外燈出現(xiàn)了故障或已經(jīng)達到了紫外燈的使用期限，應(yīng)申

16、請更換氘燈，更換后應(yīng)進行VWD測試。6.6 如出現(xiàn)滲漏或由于污染使流通池窗口的強度降低,流通池出現(xiàn)背景較高，應(yīng)用相同的有機溶劑如純甲醇低流速長時間沖洗流通池，如仍不能正常工作通知設(shè)備員，上報設(shè)備部申請維修或更換流通池。更換完畢后應(yīng)做密封測試。6.7 DAD檢測器維護：在使用DAD檢測器時，如果不要求進行波長掃描或峰純度檢測，應(yīng)將spectral項下的store 選擇None，不得選擇其他值。進行波長掃描或峰純度檢測時選擇All。7、色譜工作站的維護7.1 方法設(shè)定按液相色譜標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范（SOP）進行，其它參數(shù)不得隨意更改。7.2 數(shù)據(jù)文件不得覆蓋、修改、刪除，各品種檢測數(shù)據(jù)應(yīng)按規(guī)定存放于相應(yīng)目

17、錄下，不得擅自創(chuàng)建、修改或變動目錄。7.3 未經(jīng)培訓(xùn)合格的人員不得使用色譜工作站及色譜儀。8、 系統(tǒng)維護8.1 嚴(yán)格按照操作規(guī)程進行操作；系統(tǒng)不得隨意拆卸，如發(fā)生故障及時報告主管做出妥善處理，并如實在使用記錄上填寫好“檢驗儀器故障及異常情況登記記錄”，不得擅自進行處理。8.2 關(guān)機時，先關(guān)色譜工作站，再關(guān)液相色譜儀。8.3 如實填寫好儀器使用登記。8.4 儀器使用人員應(yīng)對儀器的正常運行負(fù)責(zé)，在使用儀器前及儀器使用過程中應(yīng)確定儀器狀態(tài)，確保在儀器正常狀態(tài)下進行分析事件。8.5 儀器使用結(jié)束后，應(yīng)做好儀器的清潔，并清理好現(xiàn)場，做好維護保養(yǎng)記錄。四、故障排除1、HPLC系統(tǒng)中氣泡對檢測的影響及其解決方法在我們進行液相色譜分析時，有時也會遇到這樣一個問題，系統(tǒng)的流路中存在氣泡，由于氣泡的存在，會造成色譜圖上出現(xiàn)尖銳的噪音峰，嚴(yán)重時會造成分析靈敏度下降；氣泡變大進入流路或色譜柱時會使流動相的流速變慢或不穩(wěn)定，使基線起伏，造成以上現(xiàn)象的主要原因有三項：是流動相溶液中往往因溶解有氧氣或混入了空氣而形成的氣泡；是系統(tǒng)開始工作時未能將流路中的空氣驅(qū)趕干凈造成的；是在進樣時不注意混入了空氣造成的為了避免這類問題的出現(xiàn)，液相色譜實際分析過程中必須重視對流動相進行脫氣處理，流路系統(tǒng)存在氣泡可采用以下幾種方法解決：采用大流量