制藥工程本科畢業(yè)論文

1、XXXXXXX本科生畢業(yè)論文XXX年 級：X專 業(yè)：制藥工程班 級：X學(xué) 號：X二OOX年X月開胃清火片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究X X X 指 導(dǎo) 教 師：XXX實(shí) 習(xí) 單 位：XXXXXXXXX 論文提交日期：200X年X月論文辯論日期：200X年X月辯論組組長： 辯論組成員： 目錄中文摘要 1英文摘要 1引言 21 實(shí)驗(yàn)儀器與材料 32 薄層鑒別 3 3 4 53 含量測定 5 方法 6色譜條件 6 對照品溶液的制備 6供試品溶液的制備 6 6測定波長確實(shí)定與流動(dòng)相的選擇 6系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的觀察 6陰性對照實(shí)驗(yàn) 7線性關(guān)系考察 7穩(wěn)定性試驗(yàn) 8精密度試驗(yàn) 9重現(xiàn)性試驗(yàn) 9回收率試驗(yàn) 10 樣品的測定

2、 104 小結(jié)與討論 11致 謝 13參 考 文 獻(xiàn) 14摘要方中君藥黃連中的小檗堿進(jìn)行定量。結(jié)果:薄層色譜斑點(diǎn)清晰集中，陰性對照無干擾，專屬性強(qiáng)；含量測定小檗堿線性范圍0.0260.280ug:相關(guān)系數(shù)為0.9997。平均回收率為95.69%.相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.73%n=5.結(jié)論:本質(zhì)量控制方法 可有效地控制開胃清火片的質(zhì)量。關(guān)鍵詞： 小檗堿； 開胃清火片； 高效液相色譜法； 薄層色譜法Abstract：Objective : To establish aperitif-fire film quality control methods. Method: TLC right aperitif

3、 tablets (Coptis, Angelica dahurica, Novel, March 7, Cimicifuga) of berberine, Angelica dahurica. Identification of a NovelHPLC method, which other drug-Jun Huanglian of berberine quantitatively. . Result 60ug : a correlation coefficient of 0.9998. The average recovery of 93% (n = 5). Conclusion : T

4、he quality control methods can be effective in controlling the fire aperitif-film quality. Key words：Berberine Hydrochloride；Aperitif-fire Tablets ；HPLC ；TLC引 言本方是由經(jīng)方加減而成，由黃連、牡丹皮、白芷、三七、升麻等藥組成。方中黃連苦寒瀉火，清胃腸積熱;牡丹皮性味苦、辛、微寒，清熱涼血，活血化瘓;白芷性味辛、溫，消腫排膿，通竅止痛:三七性味甘、微苦，活血散瘀，消腫定痛;升麻性味辛、微甘、微寒，清熱解毒，兼為陽明引經(jīng)之藥。全方共奏清熱解毒

5、、消腫止痛的成效。用于陽明經(jīng)熱，胃火上炎所致的牙齦腫痛，牽引頭痛，面頰發(fā)熱，唇舌頰腮腫痛;或牙宣出血，牙眼繃中潰爛;口氣熱臭，口瘡等病癥。現(xiàn)代研究說明,黃連化學(xué)成分主要有小檗堿(berberine)藥根堿(jatrorrhizine) 、巴馬亭(palmatine)、黃連堿(coptisine)等及二十幾種無機(jī)元素1。其中小檗堿為主要藥效成分2。黃連有抗炎作用，其甲醇提取物對大鼠多種實(shí)驗(yàn)性腳爪浮腫及肉芽腫有抗炎作用，效果近似保泰松，小檗堿無論口服還是皮下注射.都有抗急性炎癥作用；同時(shí)小檗堿小劑量能增強(qiáng)家兔網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬功能。此外還有抗真菌、抗病毒、鎮(zhèn)靜、抗?jié)冏饔玫?。牡丹皮化學(xué)成分主要有酚類

6、，如牡丹酚(paeonol),牡丹酚苷(paeononide)等，牡丹酚原苷(paeonolide)等;含萜類、苷類，如芍藥苷(paeoniflorin). 羥基芍藥昔(oxypaeoniflorin)、苯甲酰芍藥苷(benzoylpaeoniflorin)等；此外尚含鞣質(zhì)、揮發(fā)油、皂苷、無機(jī)元素Se, Mo等3。牡丹皮有解熱作用，牡丹酚200mg/kg腹腔注射有明顯解熱作用。白芷主要化學(xué)成分有香豆素類(coumarins)，主要為氧化前胡素(oxypeucedanin)、歐前胡素(imperatorin)、異歐前胡素(isoimperatorin)等，此外尚含有揮發(fā)油、谷甾醇、微量元素鈣、銅

7、、鐵、鋅、鎂、鈉等?，F(xiàn)代藥理研究證明:白芷有解熱、鎮(zhèn)痛與抗炎作用，15g/kg灌胃有明顯解熱作用，其效優(yōu)于0.1g/kg的阿司匹林。8g/Kg灌胃對小鼠痛閾也有顯著提高，作用與氨基比林8mg/kg類似。4g/kg灌胃對二甲苯所致小鼠耳部炎癥也有顯著抑制作用.白芷有抗菌作用，對多種細(xì)菌有抑制作用。此外還有抗炎、解痙等作用。升麻化學(xué)成分主要有酚酸、異阿魏酸(isoferulic acid)、阿魏酸(ferulic acid)、多種三萜烯、升麻醇木糖苷(cimigenol xyloside)、升麻苷(cimiside)、升麻素(cinifugin)等。現(xiàn)代藥理研究證明:升麻有解熱作用，異阿魏酸1 2

8、g/Kg灌胃，解熱作用顯著.升麻有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用，多種成分表現(xiàn)出此作用。升麻有抗炎作用，對角叉菜膠空氣囊炎癥肉芽組織的重量和滲出液量有明顯抑制作用。升麻有抗菌作用，煎劑對多種細(xì)菌有抑制作用。此外還有抗真菌作用。三七化學(xué)成分主要有三萜皂苷類，目前己別離鑒別了20多種單體皂普，其中三七皂苷(notoginsenoside)為主要有效成分之一;還含三七素(dencichine)、黃酮、揮發(fā)油、氨基酸、植物甾醇、槲皮素、糖類、無機(jī)鹽、微量元素等。三七有抗炎作用，對角叉菜膠所致的炎癥模型有顯著對抗效應(yīng)，總皂昔類成分(PNS)為有效成分。方中各藥的化學(xué)成分及藥理作用為該方療效的發(fā)揮提供了一定的物質(zhì)和藥效學(xué)

9、根底。本文研究開胃清火片的質(zhì)量控制方法，首先進(jìn)行黃連、牡丹皮、白芷的薄層鑒別，再采用高效液相色譜法測定君藥-黃連中鹽酸小檗堿的含量，通過控制鹽酸小檗堿含量來控制制劑的質(zhì)量。1 實(shí)驗(yàn)儀器與材料儀器：Waters 600 型高效液相色譜儀(美國); Waters 2487雙波長紫外檢測器。浙江大學(xué)智達(dá)N2000色譜工作站。電子分析天平梅特勒-托利多,十萬分之一；試劑: 乙腈為色譜純，甲醇乙醇乙醚醋酸乙酯等其它試劑均為分析純。試藥:研究所用藥材市售，經(jīng)鑒定為?中國藥典?二00五版一部規(guī)定品種。對照品及對照藥材均購于中國藥品生物制品檢定所。110713-2002032 薄層鑒別取本品10片，研細(xì)，稱取

10、1g加甲醇50ml，回流提取15 min,濾過，補(bǔ)足甲醇作為供試品溶液。取黃連對照藥材50mg，同法處理制成對照藥材溶液。另取陰性樣品1g，同法處理制成黃連陰性樣品溶液。取鹽酸小檗堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法?中國藥典?2005年版一部附錄VIB試驗(yàn)。吸取上述溶液各5l ，分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水(6: 3: 1.5: 1.5: 0.3)為展開劑，濃氨水飽和15min，上行展開，展距10cm，取出，晾干，于365nm熒光下檢視。結(jié)果見圖1。由圖1可見，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的

11、位置處，顯相同顏色的亮黃色熒光斑點(diǎn)。展開別離效果較好，別離出四個(gè)明顯斑點(diǎn)，斑點(diǎn)圓整，清晰;在與對照品斑點(diǎn)對應(yīng)位置處，陰性無相應(yīng)斑點(diǎn)。 1 2 3 4 5 6圖1 黃連TLC 從左到右依次為1-61-3樣品；4陰性樣品；5藥材；6對照品取本品10片，研細(xì)，稱取樣品1g，加乙醚lOml，密塞，振搖lOmin,過濾，濾液揮干，殘?jiān)颖?m1溶解，作為供試品溶液。稱取牡丹皮藥材1g，同法處理制成陽性藥材溶液。另稱取陰性樣品1g，同法處理即得陰性樣品溶液。取丹皮酚對照品，加丙酮制成每lml含5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法?中國藥典?2005年版一部附錄VIB試驗(yàn)。吸取上述溶液各5l ，分別

12、點(diǎn)于同一以羚甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯(3: 1)為展開劑，上行展開，展距10cm，取出，晾干，噴鹽酸酸性的5%三氯化鐵乙醇溶液，105加熱至斑點(diǎn)顯色清晰，日光下檢視。結(jié)果見圖2。由圖2可見，在供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置處，顯相同顏色的藍(lán)褐色斑點(diǎn)。展開別離效果很好，無干擾，顯現(xiàn)單一斑點(diǎn).在與丹皮酚斑點(diǎn)對應(yīng)位置處，陰性無相應(yīng)斑點(diǎn)。 圖2牡丹皮TLC鑒別1-3樣品；4 陰性樣品；5 藥材；6 對照品取本品10片，研細(xì)，稱取樣品1g，加乙醚lOml,浸1小時(shí)，振搖，過濾，殘?jiān)哟姿嵋阴ml溶解，作為供試品溶液。取白芷對照藥材0. 5g，同法處理即得對照藥材

13、溶液。取陰性樣品1g,同法處理即得陰性樣品溶液。稱取歐前胡素對照品0.5mg，加醋酸乙酯制成每lml含lmg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法?中國藥典?2005年版一部附錄VIB試驗(yàn)。吸取上述溶液各5l ，分別點(diǎn)于同一以羚甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30-600C)-乙醚(3: 2)為展開劑，上行展開，展距15cm，取出，晾干，于365nm熒光下檢視。結(jié)果見圖3。由圖3可見:供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置處，均顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)。展開別離效果較好，在與對照品相應(yīng)位置處，陰性無相應(yīng)斑點(diǎn)。 1 2 3 4 5 6 SHAPE * MERGEFORMAT 圖3 白芷

14、TLC鑒別 1-3樣品；4 陰性樣品；5 藥材；6 對照品 3 含量測定 黃連為方中君藥，其有效成分之一為鹽酸小檗堿。本制劑通過控制鹽酸小檗堿含量來控制制劑的質(zhì)量。小檗堿含量測定的有薄層掃描法45、高效液相色譜法678。本方含量測定照?中國藥典?9二00五年版一部附錄VID高效液相色譜法進(jìn)行。經(jīng)過方法學(xué)考察結(jié)果證明本法具有一定的專屬性準(zhǔn)確性重現(xiàn)性和實(shí)用性，可有效的控制制劑的質(zhì)量變化。方法色譜條件色譜柱為WATERS 600 (4.6 X 150mm)柱；流動(dòng)相:0. 05mo1/1磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)pH值至3)-乙腈(60: 40)；流速:0.8m1/min； 柱溫: 室溫 ；檢測波長:

15、254nm； 靈敏度:1.500AUFS；理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿針?biāo)悖坏玫陀?000。對照品溶液的制備精密稱取鹽酸小檗堿對照品0.5mg，用稀乙醇溶解稀釋，制成每lml含0.025mg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備取本品20片，研細(xì)，精密稱取0.1 g,置具塞錐形瓶中，精密參加稀乙醇50m1,稱定重量，超聲處理30min，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，濾液用微孔濾膜(0.45um)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。測定波長確實(shí)定與流動(dòng)相的選擇取鹽酸小檗堿對照品適量，加甲醇稀釋制成適宜濃度的標(biāo)準(zhǔn)品，在200400nm波長范圍內(nèi)進(jìn)行紫外掃描，得紫外吸收譜圖，從圖中可

16、見鹽酸小檗堿在254nm有最大吸收，綜合考慮選擇254nm為檢測波長。分別選擇0. 05mo1 L-1 L-1磷酸二氫鉀水溶液- 乙腈(70 : 30)作為流動(dòng)相，結(jié)果以0. 05mo1/l磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)pH值至3)-乙腈(60: 40)為最正確，鹽酸小檗堿與相鄰峰基線別離較好。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)的觀察精密稱取鹽酸小檗堿對照品0.5mg，用稀乙醇溶解稀釋，制成每lml含0.025mg的對照品，精密稱取0.1 g制成供試品和陰性空白樣品溶液，照前述色譜條件，各進(jìn)樣lOl，記錄色譜圖。理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于4000，鹽酸小檗堿與其它雜質(zhì)峰別離良好。陰性對照實(shí)驗(yàn)陰性供試品與對照品、

17、對照藥材及樣品比擬，在相應(yīng)位置無吸收峰。對照品、對照藥材、樣品及陰性樣品的高效液相色譜圖見附圖4、附圖5、附圖6、附圖7。 圖4鹽酸小檗堿對照品HPLC色譜圖 圖5黃連藥材HPLC色譜圖 圖6樣品HPLC色譜圖 圖7陰性樣品HPLC色譜圖 線性關(guān)系考察 精密吸取鹽酸小檗堿對照品溶液1, 3, 5, 7, 9, 11 ul進(jìn)樣，記錄峰面積積分值，考察線性關(guān)系，以對照品溶液進(jìn)樣量g 為橫坐標(biāo)，以峰面積積分值(A)為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖8，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程:A = x106 C +(r=0. 9997) 圖8結(jié)果說明，在0. 0260. 280ug范圍內(nèi)，鹽酸小檗堿峰面積積分值(A)與其進(jìn)樣量(C

18、)有良好的線性關(guān)系。詳見表1。表1 線性關(guān)系考察結(jié)果體積 l 1 3 5 7 9 11質(zhì)量 g 0.025 0.075 75峰面積積分 135312.65 416089.27 688782.29 1138012.48 1504986.79 穩(wěn)定性試驗(yàn)精密吸取供試品及對照品溶液2u1，于1h, 2h, 4h，8h，16h，24h進(jìn)樣，記錄每次峰面積積分值，結(jié)果見表2。 表2 鹽酸小檗堿含量測定穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果 測定時(shí)間(h) 對照品峰面積積分值 樣品峰面積積分值 1h 316942 5690132h 318573 5669264h 316709 5678458h 314233 56671816h

19、316071 56572024h 317284 563927均值 316635 566692RSD(%) 0.45% 0.31%穩(wěn)定性考察結(jié)果說明：對照品溶液和供試品溶液在24h小時(shí)內(nèi)測定結(jié)果的RSD分別為0.45%、0.31%，說明供試品溶液的穩(wěn)定性良好。精密度試驗(yàn)精密吸取供試品溶液及鹽酸小檗堿對照品溶液5l，分別注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，依法測定，記錄峰面積積分值，計(jì)算，考察精密度，結(jié)果見表3 表3 鹽酸小檗堿含量測定精密度試驗(yàn)結(jié)果序號 進(jìn)樣量(u 1) 對照品峰面積積分值 樣品峰面積積分值1 5 745810 1422533 2 5 749970 14173153 5 740379

20、1419613 4 5 745362 14167955 5 748384 1414300均值 745981 1418111RSD(%)精密度考察結(jié)果說明：對照品溶液和供試品溶液連續(xù)測定結(jié)果的RSD分別為0.4901%、0.21 %，說明儀器、方法的精密度良好。重現(xiàn)性試驗(yàn)取同一批樣品(20030302) 5份，按照的方法，分別制備供試品溶液，進(jìn)樣2u1，結(jié)果見表4 表4 鹽酸小檗堿含量測定重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果樣品號 樣品量(g) 峰面積值 鹽酸小檗堿含量(%) 均值 RSD(%) 結(jié)果說明,本法以鹽酸小檗堿含量為指標(biāo)，含量測定結(jié)果的RSD為0.63%,平均含量為2.3147%，說明重現(xiàn)性良好。回收率試

21、驗(yàn)取含量(2. 3347%)的樣品(20030302) 5份，分別添加近等量的鹽酸小聚堿對照品，按照的方法制備供試品溶液，進(jìn)樣2ul，以以下公式計(jì)算回收率結(jié)果見表5. 鹽酸小檗堿測得量 - 樣品中鹽酸小檗堿的量回收率 = 100% 參加的鹽酸小檗堿對照品的量 表5 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果樣品號 樣品中鹽酸 鹽酸小檗堿 鹽酸小檗堿 回收率 均值 RSD%小檗堿的量mg參加量mg測得量mg (%)1 2.0275 2.1013 4.0492 %,平均回收率為95.69% ,說明本法準(zhǔn)確性較好, 方法可行。 樣品的測定分別精密吸取鹽酸小聚堿對照品溶液與供試品溶液適量，照上述色譜條件進(jìn)樣測定，按外標(biāo)法計(jì)算

22、樣品中鹽酸小檗堿的含量。結(jié)果見表6。 表6 開胃片中鹽酸小聚堿含量測定結(jié)果樣品批號 鹽酸小聚堿含量(%) 均值 RSD%20030303 2.321 4 小結(jié)與討論有關(guān)黃連，白芷，牡丹皮的薄層鑒別報(bào)道較多，本品參照?中國藥典?黃連，白芷，牡丹皮項(xiàng)下收載的方法。黃連薄層鑒別中曾采用展開劑醋酸乙酯-丁酮-甲醛-水(10: 6: 1: 1).苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-濃氨試液(12:6：3: 1). 苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水(6: 3: 1.5: 1.5: 0.3)為展開劑，結(jié)果以苯-醋酸乙酯-甲醇-異丙醇-水(6: 3: 1.5: 1.5: 0.3)為展開劑，效果最正確。在黃連、白芷、牡丹

23、皮的薄層鑒別中，分別以對照藥材及化學(xué)對照品鹽酸小檗堿、丹皮酚、歐前胡素作雙重對照，較僅以化學(xué)對照品作單體對照，能夠更加有效地控制制劑中黃連的質(zhì)量。小檗堿含量測定的有薄層掃描法、高效液相色譜法等，開胃清火片中小檗堿含量測定方法為高效液相色譜法。流動(dòng)相的選擇曾分別選擇0. 05mo1L-1 L-1磷酸二氫鉀水溶液(30 : 70) 作為流動(dòng)相，結(jié)果以0. 05mo1/1磷酸二氫鈉溶液(用磷酸調(diào)pH值至3)-乙腈(60: 40)為最正確，鹽酸小檗堿與相鄰峰基線別離較好。以0. 05mo1/1磷酸二氫鈉溶液-乙腈(60: 40)為展開劑有拖尾現(xiàn)象，用磷酸調(diào)節(jié)磷酸二氫鈉溶液pH值至3,那么明顯好轉(zhuǎn)，到達(dá)別離目的。曾對供試品溶液制備條件進(jìn)行了考察，發(fā)現(xiàn)超聲處理高于回流提取。超聲時(shí)間確定為0.5 h。本文TLC鑒別方面，建立了局部藥材的薄層鑒別。在含量測定方面，選擇測定了君藥黃連的有效成分鹽酸小檗堿的含量作為控制制劑質(zhì)量的手段。但是，中藥復(fù)方是多組分綜合治療疾病，因此，在實(shí)際生產(chǎn)中，建立全部藥材的薄層鑒別，含量測定，再選用其他與療效有