外泌體捕獲分離

1、外泌體，帶來革命變革的小不點（三）外泌體捕獲分離外泌體天然存在于體液中，在包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁等體液中廣泛分布，而且，所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體；但是，想要研究這個分布廣泛的小不點可不是一件容易的事情，其中，最為困難的就是從體液或者細胞培養(yǎng)基中分離出高純度的外泌體。今天，小優(yōu)專題給您帶來的就是外泌體研究的最關鍵步驟外泌體捕獲與分離這一部分的技術講解與解決方案。外泌體分離的傳統(tǒng)方法為差速超速離心法和密度梯度超速離心法等，差速超速離心法是目前外泌體提取最常用的方法。簡單來說是將細胞培養(yǎng)液或體液等樣本依次在300g、2000g、10000g離心去除細胞碎片和大分子蛋白質(zhì)，最后10

2、0000g離心得到外泌體。此種方法得到的外泌體量多，但是純度不足，電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊，質(zhì)量不好，由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準，也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體。另一種常用的外泌體分離方法為密度梯度離心法，將樣本和梯度材料一起超速離心，樣品中的不同組分沉降到各自的等密度區(qū)，分為連續(xù)和不連續(xù)梯度離心法。用于密度梯度離心法的介質(zhì)要求對細胞無毒，在高濃度時粘度不高且易將pH調(diào)至中性。實驗中常用蔗糖密度梯度離心法，在離心法的基礎上，預先將兩種濃度蔗糖溶液（如2.5M和0.25M）配成連續(xù)梯度體系置于超速離心管中，樣本鋪在蔗糖溶液上，100000g離心16h，外泌體會沉降

3、到等密度區(qū)（1.101.18g/ml）。用此種方法分離到的外泌體純度高，但是前期準備工作繁雜，耗時，產(chǎn)量少。而且，這兩種傳統(tǒng)方法都需要用到超速離心機，設備昂貴，耗時長，一次最多只能做6個樣品，效率低，并且需要大量的樣品才能得到足夠多的外泌體。接下來小優(yōu)就為您帶來優(yōu)寧維為您提供的高效外泌體捕獲與分離技術，幫您遠離枯燥乏味的超速離心，快速高效制備高質(zhì)量的外泌體。話不多說，亮技術，上產(chǎn)品：首先閃亮登場的是簡單的一步法分離外泌體，實驗原理如下圖：*CaIISupmcim牛WestefnblottingELISAASSAYNudekacidseKtractionandanalysisAddExcPure

4、andincubateonicefw1hrpellet5pirntocollectNanoTrackingAnalysis(NTA)Bioflulds一步法分離外泌體原理示意圖該技術的優(yōu)勢有節(jié)省時間，小體積樣本適用（可從100“血漿中分離出足量外泌體），無需超速離心和其他預富集方式，試劑方便儲存于運輸（4C保存）等。除了一步法分離外泌體的技術外，小優(yōu)還為您提供免疫捕獲法，包括免疫微球產(chǎn)品與免疫預制板產(chǎn)品。首先我們來看免疫微球捕獲分離外泌體的技術原理：EwsmeimmunocaptureEicosomelmmunob&ad5elutFonorl$QktlQnImmunobeadsElutionB

5、ufferCellSupernvTanUElutedExosoirnQ忘IncubatesamplewithImmunobeadsPelletBead&/Epsames,iProteinanalysesornucleicscfdeKtractflori*免疫微球分離外泌體原理圖免疫微球捕獲分離外泌體的優(yōu)勢包括實驗操作步驟簡單快速，無需超速離心等其他預富集操作，支持小樣本量，可以篩選特異細胞分泌的外泌體等。免疫預制板捕獲分離外泌體的原理如下圖所示：I-rIYYrrYY/tmn；宀，CaptureofspecifictwosomesubCaptureofoverallExasonnesPlates

6、arepopulation.Plalesarecoaledwithantibodiescoatedwithantibodiesagamstexosome二overexpressedinparticularpathologicalsurfaceantigenshpresentonoverall.condctionsonexosomesurfacewithantibodiesexosomepopulation.againstexosomesurfaceantigens,presentonoverallexosomepopulation.免疫預制板分離外泌體原理圖其優(yōu)勢包括可以長保存（保質(zhì)期2年），支持小樣本量（可低至每孔100“樣品量），無需超速離心等其他預富集操作，可分泌特異細胞分泌的外泌體，可在板上對捕獲的外泌體進行核酸提取操作等。如果您需要從較大量的樣本中提取外泌體，