植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)PPT

1、 徐 芬 芬植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心1植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則 1、認(rèn)真預(yù)習(xí)實(shí)驗(yàn)。明確目的，掌握原理，列出步驟，提出問(wèn)題。 2、認(rèn)真操作，仔細(xì)觀察，從實(shí)記錄。 3、正確操作儀器，不亂開(kāi)儀器。 4、注意安全和清潔衛(wèi)生（包括值日）。 5、正確處理廢物。 上 饒 師 范 學(xué) 院生命科學(xué)系生物實(shí)驗(yàn)示范中心2實(shí)驗(yàn)報(bào)告要求 實(shí)驗(yàn)原理：簡(jiǎn)明扼要； 材料：用什么？ 方法：實(shí)際操作過(guò)程； 數(shù)據(jù)計(jì)算：原始數(shù)據(jù)，計(jì)算公式，結(jié)果。 討論和分析：針對(duì)自己的結(jié)果進(jìn)行。 實(shí)驗(yàn)報(bào)告在下一次實(shí)驗(yàn)時(shí)上交，但實(shí)驗(yàn)原始數(shù)據(jù)須經(jīng)指導(dǎo)老師審核后才可離開(kāi)。上 饒 師 范 學(xué) 院生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心3植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)課

2、上：1、預(yù)習(xí)報(bào)告 2、認(rèn)真實(shí)驗(yàn)，操作規(guī)范，實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合要求 3、不遲到，不早退，積極參與衛(wèi)生清掃上 饒 師 范 學(xué) 院生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心4課下：實(shí)驗(yàn)報(bào)告評(píng)分標(biāo)準(zhǔn) 1、卷面清潔，字跡工整 10分2、語(yǔ)句通暢，簡(jiǎn)明扼要，邏輯性強(qiáng)，表達(dá)準(zhǔn)確無(wú)概念錯(cuò)誤 20分3、預(yù)習(xí)報(bào)告、實(shí)驗(yàn)原始記錄、實(shí)驗(yàn)報(bào)告齊全 15分4、實(shí)驗(yàn)報(bào)告格式規(guī)范，重點(diǎn)突出 15分5、實(shí)驗(yàn)原始記錄要如實(shí)認(rèn)真記錄實(shí)際操作、察及測(cè)定結(jié)果 20分6、對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的討論要充分有據(jù)，論點(diǎn)要正確，與該實(shí)驗(yàn)無(wú)關(guān)的內(nèi)容不要寫(xiě)入報(bào)告中 20分7、抄襲別人報(bào)告者 0分生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院5本學(xué)期實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與安排 1、質(zhì)

3、壁分離法測(cè)定植物組織的滲透勢(shì) 2、植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量的測(cè)定 3、葉綠素a、b含量的測(cè)定 4、赤霉素對(duì)水稻-淀粉酶的誘導(dǎo)形成 5、植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定 6、 種子活力的快速測(cè)定 氯化三苯基四氮唑(TTC)法 及紅墨水法 7 、丙二醛含量的測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院6實(shí)驗(yàn)一 質(zhì)壁分離法測(cè)定植物組織的滲透勢(shì)生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院7一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理?shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察植物組織在不同濃度溶液中細(xì)胞質(zhì)壁分離的產(chǎn)生過(guò)程及其用于測(cè)定植物組織滲透勢(shì)的測(cè)定實(shí)驗(yàn)原理 原生質(zhì)層（細(xì)胞膜、原生質(zhì)、液泡膜）具有選擇透過(guò)性，近似于半透膜，一個(gè)成熟的植物細(xì)胞就是一個(gè)完整的

4、滲透裝置：當(dāng)外界溶液濃度大于細(xì)胞液濃度時(shí)(高滲溶液），細(xì)胞失水，發(fā)生質(zhì)壁分離；當(dāng)外界溶液濃度小于細(xì)胞液濃度時(shí)（低滲溶液），細(xì)胞吸水；當(dāng)植物組織細(xì)胞內(nèi)的汁液與其周圍的某種溶液處于滲透平衡狀態(tài)，當(dāng)外界溶液濃度等于細(xì)胞液濃度時(shí)（等滲溶液），植物細(xì)胞內(nèi)的壓力勢(shì)為零時(shí)，細(xì)胞汁液的滲透勢(shì)就等于該溶液的滲透勢(shì)。細(xì)胞水勢(shì)等于細(xì)胞液的滲透勢(shì)等于外界溶液滲透勢(shì)。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院8 質(zhì)壁分離及質(zhì)壁分離復(fù)原 將植物組織置于對(duì)其無(wú)毒害的一系列不同濃度的溶液里處理一定時(shí)間，然后鏡檢發(fā)生質(zhì)壁分離的情況，細(xì)胞的等滲濃度將界于剛剛引起初始質(zhì)壁分離的濃度和不能引起質(zhì)壁分離的濃度之間。代入公式即

5、可計(jì)算滲透勢(shì)。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院9二、材料、器材與試劑1 實(shí)驗(yàn)材料 洋蔥表皮2 實(shí)驗(yàn)儀器 顯微鏡，載玻片，蓋玻片，鑷子，刀片，培養(yǎng)皿，記號(hào)筆，滴管。3 實(shí)驗(yàn)試劑 分別配制0.50、0.45、0.4、0.35、0.30、0.25、0.20、0.15、0.10mol/L的蔗糖溶液，貯9個(gè)試劑瓶中。稱34.23g蔗糖用蒸餾水配成100ml，其濃度為1mol/L(母液)。再配制成下列各種濃度： 0.50mol/L：吸母液25ml+水25ml 0.45mol/L：吸母液22.5ml+水27.5ml 0.40mol/L：吸母液20.0ml+水30.0ml 0.35mol/

6、L：吸母液17.5ml+水32.5ml 0.30mol/L：吸母液15.0ml+水35.0ml 0.25mol/L：吸母液12.5ml+水37.5ml0.20mol/L：吸母液10.0ml+水40.0ml0.15mol/L：吸母液7.5ml+水42.5ml0.10mol/L：吸母液5.0ml+水45.0ml生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院10三、實(shí) 驗(yàn) 步 驟1. 取6套干凈清潔的小培養(yǎng)皿，用記號(hào)筆編號(hào)，將配制好的不同濃度的蔗糖溶液按順序倒入各個(gè)培養(yǎng)皿中使成一薄層，蓋好皿蓋。2.選用有色素的洋蔥鱗片的外表皮迅速分別投入各種濃度的蔗糖溶液中，每個(gè)培養(yǎng)皿中放材料3個(gè)左右，使其完

7、全浸沒(méi)，浸泡20分鐘左右。3. 到時(shí)后，取出表皮，放在載玻片上，滴一滴相同濃度的蔗糖，蓋上蓋玻片，在顯微鏡下觀察質(zhì)壁分離的細(xì)胞數(shù)如果所有的細(xì)胞都產(chǎn)生質(zhì)壁分離現(xiàn)象，則取低濃度溶液中的制片做同樣的觀察，并記錄質(zhì)壁分離的相對(duì)程度。上 饒 師 范 學(xué) 院生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心114. 在實(shí)驗(yàn)中確定一個(gè)引起半數(shù)以上細(xì)胞原生質(zhì)剛剛從細(xì)胞壁角隅上分離的最低濃度，和不引起質(zhì)壁分離的最高濃度。5. 在找到上述濃度極限時(shí)，用新的溶液和新鮮的葉片重復(fù)進(jìn)行幾次，直到有把握為止。在此條件下，細(xì)胞的滲透勢(shì)與兩個(gè)極限溶液濃度之平均值的滲透勢(shì)相等。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院126計(jì)算求得C1

8、按下式計(jì)算滲透勢(shì)按 =-iRTC1計(jì)算水勢(shì)值。C等滲溶液的質(zhì)量摩爾濃度，單位是mol/kg；R氣體常數(shù)（0.008314MPa/L/mol/K）T絕對(duì)溫度i解離系數(shù)（蔗糖1，CaCl22.60）生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院13【思考題】 用質(zhì)壁分離法測(cè)定植物細(xì)胞滲透勢(shì)與用小液流法測(cè)定植物組織水勢(shì)都是以外液的濃度算出的溶質(zhì)勢(shì)為根據(jù)，他們之間的區(qū)別何在。 生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院14實(shí)驗(yàn)二 植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量的測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院15一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理?shí)驗(yàn)?zāi)康?硝態(tài)氮是植物最主要的氮源。植物體內(nèi)硝態(tài)氮含量往往能

9、反映土壤中硝態(tài)氮供應(yīng)情況，因此可作為土壤肥氮肥的指標(biāo)。測(cè)定植物體內(nèi)的硝態(tài)氮含量，不僅能夠反映出植物的氮素營(yíng)養(yǎng)情況，而且對(duì)鑒定蔬菜和植物為原料的加工制品的品質(zhì)也有重要的意義。實(shí)驗(yàn)原理 在濃酸條件下，NO3-與水楊酸反應(yīng)，生成硝基水楊酸，硝基水楊酸在堿性條件下（PH12）呈黃色，在一定范圍內(nèi)，其顏色深淺與含量成正比，可直接比色測(cè)定。 上 饒 師 范 學(xué) 院生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心16二、材料、設(shè)備儀器及試劑（一）材料 白菜葉片（二）儀器設(shè)備及試劑1 實(shí)驗(yàn)儀器 722型分光光度計(jì)、電子天平。2 實(shí)驗(yàn)試劑 （1）500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液精確稱取烘至恒重的KNO3 0.7221克溶于無(wú)離水中，

10、定容至200ml。（2）5%水楊酸一硫酸溶液 稱取5克水楊酸溶于100ml，濃硫酸中（密度為1.84），攪拌溶解后，貯于棕色瓶中。置冰箱保存一周有效。（3）8%氫氧化納溶液 稱取10克氫氧化納溶于1升無(wú)離子水中即可。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院17三、實(shí)驗(yàn)步驟1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作（1）吸取500ppmNO3-標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml. 2ml. 3ml. 4ml. 6ml. 8ml. 10ml. 12ml分別放入501ml容量瓶中，用無(wú)離子定至刻度，使之成10、20、30、40、60、80、100、120ppm的系列標(biāo)準(zhǔn)溶液。（2）吸收上述系列標(biāo)準(zhǔn)溶液0.11ml，分別放入刻度試

11、管中，以0.11ml無(wú)離子水代替標(biāo)準(zhǔn)溶液作空白，再分別加入0.4ml水楊酸一硫酸溶液，搖勻，在室溫下放置20分鐘后再加入8%NaOH溶液9. 51ml搖勻冷卻至室溫，顯色液總體積為101ml。（3）以空白作參比，在410nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度。以NO3-N濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。上 饒 師 范 學(xué) 院生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心18三、實(shí)驗(yàn)步驟 2. 樣品中硝酸鹽的測(cè)定（1）樣品液的制備，取一定量的植物材料剪碎混勻后，精確稱取2-3克分別放入三支刻度試管中，加入10ml無(wú)離子水，用玻璃塞封口，置入沸水浴中提取30分鐘，到時(shí)間后取出，用自來(lái)水冷卻，將是取液過(guò)濾到25ml容量瓶

12、中，并反復(fù)沖洗殘?jiān)畹亩ㄈ葜量潭?。?）樣口液的測(cè)定 吸取樣品0.1 ml分別于三支刻度試管中，然后加入5%水楊酸一硫酸溶液0.4 ml，混勻后置室溫下20分鐘，再慢慢加入9. 5 ml 8%NaOH溶液，待冷卻至室溫后，以空白作參比，在410nm波長(zhǎng)下測(cè)期吸光度。在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得或用回歸方程計(jì)算出NO3-N濃度，再用下公式計(jì)算其含量。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院19四、結(jié)果計(jì)算四氮唑還原強(qiáng)度：根重（g）時(shí)間(h)mg/g(根鮮重)/h=四氮唑還原量（mg）生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院20實(shí)驗(yàn)三 葉綠素a、b含量的測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)

13、中心上 饒 師 范 學(xué) 院21一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒃?實(shí)驗(yàn)?zāi)康?在未經(jīng)分離的葉綠體色素溶液中測(cè)定葉綠素a和b的方法及其計(jì)算。實(shí)驗(yàn)原理如果混合液中的兩個(gè)組分，它們的光譜吸收峰雖然有明顯的差異，但吸收曲線彼此有重疊，在這種情況下要分別測(cè)定兩個(gè)組分，可根據(jù)朗伯-比爾（Lambert-Beer）定律，通過(guò)代數(shù)方法，計(jì)算一種組分由于另一種組分存在時(shí)對(duì)光密度的影響，最后分別得到兩種組分的含量。根據(jù)葉綠素a和b的吸收光譜曲線，葉綠素a的最大吸收峰在663nm，葉綠素b的最大吸收峰在645nm, 吸收曲線彼此又有重疊。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院22生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師

14、 范 學(xué) 院23生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院24根據(jù)朗伯-比爾定律，最大吸收光譜峰不同的兩個(gè)組分的混合液，它們的濃度C與光密度OD之間有如下關(guān)系： OD1=Caka1+Cbkb1 (1) OD2=Caka2+ Cbkb2 (2) 式中，ka1、 ka2 、kb1、 kb2分別為組分a、b在濃度1g/L時(shí)，對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)為1、2時(shí)的光密度OD值，即比吸收系數(shù)。波長(zhǎng)/nm葉綠素a葉綠素b66382.049.2764516.7545.60將表中數(shù)值代入（1）、（2）式，并解方程可得：Ca=0.00127OD663-0.00269OD645 (3) Cb =0.0229OD645-0

15、.00468OD663 (4)將單位改為mg/L，于是總?cè)~綠素濃度為CT= Ca +Cb=8.02 OD663+20.21 OD645 (5)生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院251 實(shí)驗(yàn)儀器 高級(jí)型分光光度計(jì)，離心機(jī)，天平，剪刀，研缽，漏斗，移液管等。2 實(shí)驗(yàn)試劑 丙酮，碳酸鈣，石英砂。3 實(shí)驗(yàn)材料 大葉黃楊葉片。二、實(shí)驗(yàn)材料、儀器與設(shè)備生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院26 稱取新鮮葉片0.5g加純丙酮5ml研磨成勻漿再加80%丙酮5ml，并轉(zhuǎn)入離心管充分洗滌研缽離心定容至20 ml取上述提取液1ml，加80%丙酮4ml稀釋后轉(zhuǎn)入比色杯中，以80%丙酮為

16、對(duì)照，測(cè)定光密度計(jì)算各種濃度（Ca 、Cb）。三、實(shí)驗(yàn)步驟生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院27四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算將測(cè)定得到的吸光值代入下面的式子： Ca=13.95A6656.88A649 Cb=24.96A6497.32A665 Cr=18.08 A649+6.63 A665 （Ca、Cb：mg/L）葉綠素的含量（mg/g）= 葉綠素的濃度提取液體積稀釋倍數(shù)/樣品鮮重生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院281 由于植物葉子中含有水分，故先用純丙酮進(jìn)行提取，以使色素提取液中丙酮的最終濃度近似80%。2 由于葉綠素a、葉綠素b的吸收峰很陡，儀器波長(zhǎng)稍有偏差，就會(huì)

17、使結(jié)果產(chǎn)生很大的誤差。五、注意事項(xiàng)生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院29六、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1、為什么提取色素時(shí)先用純丙酮提取，再用80%丙酮提?。?、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算出該種植物的葉綠素a、b的比值。3、根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算出該植物每克鮮重葉片中葉綠素的含量（單位用mgg-1FW表示）生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院30實(shí)驗(yàn)四赤霉素對(duì)水稻-淀粉酶的誘導(dǎo)形成生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院31一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理?shí)驗(yàn)?zāi)康?通過(guò)實(shí)驗(yàn)深入了解赤霉素在種子萌發(fā)過(guò)程中的調(diào)控作用。2掌握測(cè)定-淀粉酶活的一種簡(jiǎn)便方法實(shí)驗(yàn)原理 淀粉性種子在萌動(dòng)過(guò)程中，胚釋

18、放出來(lái)的赤霉素能誘導(dǎo)糊粉層細(xì)胞中-淀粉酶基因的表達(dá)，引起-淀粉酶生物合成，并分泌到胚乳中催化淀粉水解為糖。外源赤霉素能代替胚的分泌作用，誘導(dǎo)-淀粉酶的形成。-淀粉酶也能將淀粉水解成還原糖，但-淀粉酶不耐熱，在高溫下易鈍化。將酶液在高溫下維持一段時(shí)間，鈍化-淀粉酶，可準(zhǔn)確測(cè)定-淀粉酶的活性。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院32二、實(shí)驗(yàn)材料、儀器、試劑1 實(shí)驗(yàn)材料：水稻種子 2 實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備：分光光度計(jì)、恒溫箱、 水浴鍋、 移液管、 燒杯、 試管、青霉素小瓶、鑷子、刀片。 3 實(shí)驗(yàn)試劑：2mol/LNaOH溶液、1%淀粉溶液、20mg/L赤霉素溶液、0.1mol/L(PH5.6

19、)檸檬酸緩沖液、2，3，5-二硝基水楊酸（DNS）試劑生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院33三、實(shí)驗(yàn)步驟1.水稻種子的選擇和預(yù)處理 選取大小一致、健康的水稻種子，一份放入盛有適量的20mg/LGA溶液中，另一份放入盛有適量清水的培養(yǎng)皿中處理24h,取出后用清水沖洗，置于培養(yǎng)箱中再陪養(yǎng)1d，處理與培養(yǎng)溫度均為30 。2.酶的提取 取對(duì)照和GA3處理培養(yǎng)的種子2g磨成勻漿到入50ml容量瓶中用蒸餾水定容至刻度混勻放置15-20min（每2min震蕩一次）離心（4000r/min,15min） 生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院343.-淀粉酶活性的測(cè)定 取試管4

20、只編號(hào)（清水試驗(yàn)；清水調(diào)零；GA3試驗(yàn)；GA3調(diào)零）每管中各加入酶液1ml70恒溫水浴加熱12min各加入1ml檸檬酸緩沖液將試驗(yàn)管置于40恒溫水浴15min再迅速加入預(yù)熱的淀粉溶液2ml40恒溫水浴5min加入NaOH溶液0.5ml終止反應(yīng)；調(diào)零管中加入2mol/LNaOH溶液0.5ml混勻加入預(yù)熱的淀粉溶液2ml.4.樣品的測(cè)定 取以上各管中的溶液1ml于15ml刻度試管中加入DNS試劑1ml混勻沸水煮沸5min迅速冷卻定容至12ml520nm波長(zhǎng)測(cè)定OD值。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院35四、結(jié)果計(jì)算-淀粉酶活性=（OD520稀釋倍數(shù)）/樣品鮮重/反應(yīng)時(shí)間生命科學(xué)

21、系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院36實(shí)驗(yàn)五 植物呼吸強(qiáng)度的測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院37一、原理 利用NaOH溶液滴定呼吸過(guò)程中釋放的CO2，實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用草酸溶液滴定殘留的NaOH，從空白和樣品兩者消耗草酸溶液之差，即可計(jì)算出呼吸過(guò)程中釋放的CO2的量。C6H12O6+6O26CO2+6H2O2NaOH+CO2Na2CO3+H2O2NaOH+C2H2O4(草酸) Na2C2O4(草酸鈉)+2H2O生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院38二、材料、儀器設(shè)備及試劑1.實(shí)驗(yàn)儀器錐形瓶，秒表，酸式滴定管，移液管，尼龍網(wǎng)袋2個(gè)。2.實(shí)驗(yàn)試劑1/

22、44mol/L草酸溶液，0.2M NaOH溶液，1%酚酞。3.實(shí)驗(yàn)材料萌發(fā)的水稻種子（48h）。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院39三、實(shí)驗(yàn)步驟 1. 稱取萌發(fā)的水稻種子10g，裝入尼龍小袋內(nèi)，把小袋系到錐形瓶塞的小鉤上。2. 用移液管吸取20ml NaOH加入錐形瓶中，塞緊瓶塞并立即計(jì)時(shí)。3. 實(shí)驗(yàn)進(jìn)行30分鐘，其間每隔數(shù)分鐘輕輕搖瓶?jī)?nèi)的堿液數(shù)次。4. 打開(kāi)錐形瓶塞，滴入酚酞2滴，立即用草酸滴定，滴定至紅色突然消失，記下滴定樣品消耗草酸的用量。5. 另稱取萌發(fā)的水稻種子10g，用沸水煮5-10分鐘，作同樣測(cè)定，以此為對(duì)照。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué)

23、院40四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果用對(duì)照煮過(guò)的種子消耗草酸的量v0 ml減去萌發(fā)樣品消耗草酸的量v1 ml，按每秒消耗1ml草酸相當(dāng)于1mgCO2來(lái)計(jì)算種子在呼吸時(shí)放出的CO2mg數(shù)。呼吸強(qiáng)度（mgCO2g-1FWs-1）=1 mgCO2(v0- v1) W-1t-1式中，W為樣品的質(zhì)量（克），t為呼吸持續(xù)的時(shí)間（秒）生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院41五、實(shí)驗(yàn)作業(yè)1. 影響呼吸強(qiáng)度的因素有哪些？2. 為什么用草酸滴定而不用鹽酸或硫酸滴定？3. 根據(jù)你的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，計(jì)算出水稻種子的呼吸強(qiáng)度（單位用mgCO2g-1FWh-1表示）生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院42實(shí)驗(yàn)六

24、種子活力的快速測(cè)定氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院43一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒃韺?shí)驗(yàn)?zāi)康?熟悉氯化三苯基四氮唑(TTC)法及紅墨水法測(cè)定種子活力的方法及其計(jì)算?！緦?shí)驗(yàn)原理】 凡有生活力的種胚在呼吸作用過(guò)程中都有氧化還原反應(yīng)，而無(wú)生活力的種胚則無(wú)此反應(yīng)。當(dāng)TTC溶液滲入種胚的活細(xì)胞內(nèi)，并作為氫受體被脫氫輔酶(NADH2或NADPH2)還原時(shí)，可產(chǎn)生紅色的三苯基甲(TT)，胚便染成紅色。當(dāng)種胚生活力下降時(shí)，呼吸作用明顯減弱，脫氫酶的活性亦大大下降，胚的顏色變化不明顯，故可由染色的程度推知種子的生活力強(qiáng)弱。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范

25、 學(xué) 院44二、材料、儀器設(shè)備及試劑1 儀器 培養(yǎng)皿2套；鑷子1把；單面刀片1片；墊板(切種子用)1塊；燒杯1個(gè)；棕色試劑瓶；解剖針1把；搪瓷盤(pán)1個(gè)；PH試紙。2 試劑 TTC溶液的配制：取3g TTC溶于1L蒸餾水或冷開(kāi)水中，配制成0.1的TTC溶液。藥液PH應(yīng)在6.57.5，以PH試紙?jiān)囍?如不易溶解，可先加少量酒精，使其溶解后再加水)。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院45三、實(shí)驗(yàn)步驟1將水稻新種子、陳種子或死種子，用溫水(30)浸泡26H，使種子充分吸脹。2隨機(jī)取種子2份，每份200粒，沿種胚中央準(zhǔn)確切開(kāi)，取每粒種子的一半備用。3把切好的種子分別放在培養(yǎng)皿中，加TTC

26、溶液，以浸沒(méi)種子為度。4放入3035的恒溫箱內(nèi)保溫30Min。也可在20左右的室溫下放置4060Min。5保溫后，傾出藥液，用自來(lái)水沖洗23次，立即觀察種胚著色情況，判斷種子有無(wú)生活力。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院46四、注意事項(xiàng)1TTC溶液最好現(xiàn)用現(xiàn)配，如需貯藏則應(yīng)貯于棕色瓶中，放在陰涼黑暗處，如溶液變紅則不可再用。2染色溫度一般以2535為宜。3判斷有生活力的種子應(yīng)具備的特征：胚發(fā)育良好、完整、整個(gè)胚染成鮮紅色；子葉允許有小部分壞死，但其部位不是胚中軸和子葉連接處；胚根尖雖有小部分壞死，但其他部位完好。4判斷無(wú)生活力的種子應(yīng)具備的特征：胚全部或大部分不染色；胚根不染

27、色部分不限于根尖；子葉不染色或喪失機(jī)能的組織超過(guò)12；胚染成很淡的紫紅色或淡灰紅色；子葉與胚中軸的連接處或在胚根上有壞死的部分；胚根受傷以及發(fā)育不良的未成熟的種子。5對(duì)于不同作物種子生活力的測(cè)定，所需試劑濃度、浸泡時(shí)間、染色時(shí)間不同。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院47紅墨水染色法【實(shí)驗(yàn)原理】 有生活力的種子其胚細(xì)胞的原生質(zhì)具有半透性，具有選擇吸收外界物質(zhì)的能力，某些染料如紅墨水中的酸性大紅G不能進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，胚部不染色。而喪失活力的種子其胚部細(xì)胞原生質(zhì)膜喪失了選擇吸收的能力，染料進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)使胚部染色，所以可根據(jù)種子胚部是否染色來(lái)判斷種子的生活力。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中

28、心上 饒 師 范 學(xué) 院48儀器與試劑儀器 與TTC法相同試劑 紅墨水溶液的配制：取市售紅墨水稀釋20倍(1份紅墨水加19份自來(lái)水)作為染色劑。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院49實(shí)驗(yàn)步驟1.先將待測(cè)種子用水浸泡34H，待充分吸脹后取出一部分種子，在沸水中煮沸35Min，作為死種子。2.取浸好的新種子、陳種子和死種子各50粒，如為小麥和玉米，則用單面刀片沿胚部中線縱切成兩半，其中一半用于測(cè)定。3.將準(zhǔn)備好的種子分別放在培養(yǎng)皿內(nèi)，加入紅墨水溶液，以浸沒(méi)種子為度。生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院504.染色1020Min后傾出溶液，用自來(lái)水反復(fù)沖洗種子，直到

29、所染顏色不再洗出為止。5.對(duì)比觀察沖洗后的新種子、陳種子和死種子胚部著色情況。凡胚部不著色或略帶淺紅色者，即具有生活力的種子，若胚部染成與胚乳相同的紅色，則為死種子。 生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院51思考題 TTC法和紅墨水測(cè)定種子生活力有何不同？生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院52實(shí)驗(yàn)七 丙二醛含量的測(cè)定生命科學(xué)系生物科學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)中心上 饒 師 范 學(xué) 院53一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、原理?shí)驗(yàn)?zāi)康?熟悉葉片中丙二醛（ MDA ）的測(cè)定方法及其計(jì)算。實(shí)驗(yàn)原理 植物器官衰老或在逆境下遭受傷害，往往發(fā)生膜脂過(guò)氧化作用，丙二醛（ MDA ）是膜脂過(guò)氧化作用的最終分解產(chǎn)物，其含量可以反映植物遭受逆境傷害的程度。丙二醛在酸性和高溫條件，可以與硫代巴比妥酸（ TBA ）反應(yīng)生成紅棕色的三甲川（3,5,5三甲基惡唑 2,4- 二酮），在 532nm 處有最大光吸收，在 600nm 處有最小光吸收，該復(fù)合物的吸光系數(shù)為 155，可按公式： A532A600 = 155000CL