光學(xué)顯微鏡樣品的相稱觀察方法

1、光學(xué)顯微鏡下樣品的幾種襯度模式體視顯微鏡專題之三（Mi croimage譯）Tina (2010-06-18 18:34:32)（以下內(nèi)容由中國(guó)顯微圖像網(wǎng)譯制，轉(zhuǎn)載請(qǐng)注明?。└叻直媛使鈱W(xué)顯微鏡下，活體以及無色透明的樣品由于缺少襯度，在明場(chǎng)下幾乎看不清。使用全孔徑 的物鏡，無色樣品的圖像非常差，甚至周期性有規(guī)律的結(jié)構(gòu)也不行，如衍射格柵、線性光纖、集成電路、 絲狀藻類、硅藻等。Contrast Modes in Transmitted Optical Microscopy盡管透明樣品通常通過散射和衍射產(chǎn)生相位差影響光線，但由于人眼看不到相位差，所以這些物體在 顯微鏡下仍然看不見。除非給樣品染上有色

2、染料，或者顯微鏡使用者關(guān)了虹彩光闌盡量減少聚光鏡的工作 孔徑。然而，這些極端的措施會(huì)極大地消弱物鏡的分辨率?，F(xiàn)代光學(xué)顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)能夠在大倍數(shù)下產(chǎn)生高分辨率圖像，但如果圖像沒有襯度，這是無用的。 襯度并不是樣品內(nèi)在的特性，但依賴于樣品和光的相互作用以及光學(xué)系統(tǒng)的效率，即需要有個(gè)合適的檢測(cè) 器記錄圖片信息。在顯微鏡光學(xué)系統(tǒng)中控制圖像襯度依賴于幾個(gè)因素：數(shù)值孔徑的設(shè)置、檢測(cè)器的特點(diǎn)、 光學(xué)校正程度、樣品類型、采用的襯度原理。除了特異的增強(qiáng)襯度附件，顯微鏡中還有幾個(gè)設(shè)置可以提高 襯度。光學(xué)系統(tǒng)中最關(guān)鍵的是視場(chǎng)以及聚光鏡數(shù)值孔徑的設(shè)置，同時(shí)也可通過調(diào)節(jié)數(shù)碼相機(jī)來改變襯度， 或者改變數(shù)碼檢測(cè)器的放大倍

3、數(shù)、實(shí)時(shí)處理圖像、給樣品染色等等。圖1有三張圖，展示了一個(gè)透明近乎無色的Zygnema絲狀藻類在三種襯度模式下的圖像：明場(chǎng)、相差 和 DIC。光可以在一系列機(jī)制下與樣品相互作用產(chǎn)生圖像襯度。這些包括來自表面的反射、吸收、折射、偏振、 熒光和衍射。襯度也可以通過改變顯微鏡的光學(xué)部件和照明模式來增強(qiáng)，或通過數(shù)碼技術(shù)或圖像處理圖像， 下面的討論集中顯示樣品和光的不同中作用，并回顧了幾種光學(xué)顯微鏡技術(shù)（表1）。表1展示了不同種 樣品及其不同材質(zhì)在透射和落射顯微鏡下，如何選擇襯度增強(qiáng)技術(shù)。這個(gè)表格可被用來指導(dǎo)如何解決光學(xué) 顯微鏡下某些特定的成像問題。人眼對(duì)樣品中波長(zhǎng)的振幅和波長(zhǎng)本身的變化非常敏感?；谶@

4、個(gè)原因，許多樣品切的很?。?-30微米）， 再被染上化學(xué)染料以產(chǎn)生襯度和區(qū)分樣品中的不同結(jié)構(gòu)。這個(gè)技術(shù)已經(jīng)在生物樣品中用了幾百年了，染料 選擇性的吸收一個(gè)或幾個(gè)波長(zhǎng)，穿過或發(fā)射其他波長(zhǎng)。這些技術(shù)同樣適用于熒光染料，它可用于增強(qiáng)樣品的襯度。在熒光標(biāo)本中，一個(gè)或幾個(gè)可見到近紅外 的波長(zhǎng)被激發(fā)時(shí)，它們常發(fā)射更長(zhǎng)波長(zhǎng)的光，從而在黑色背景下變得清晰可見。光學(xué)顯微鏡的襯度增強(qiáng)技術(shù)（表1）樣品類型成像技術(shù)透身桃光透明樣品細(xì)菌,精子，細(xì)胞在玻璃容器， 原生動(dòng)物、螨、纖維等。相差DIC霍夫曼斜照明光散射物體硅藻、膳食纖維、頭發(fā)，淡水的微生物，放射蟲等。萊茵堡照明 暗場(chǎng)照明相差和DIC光線折射樣本膠狀懸浮劑，粉末

5、及礦物質(zhì)液體相襯分散染色DIC振幅標(biāo)本彩色組織，自然色的標(biāo)本頭發(fā)和纖維昆蟲和海藻明場(chǎng)照明熒光標(biāo)本在組織培養(yǎng)的細(xì)胞熒光染色涂片檢查和傳播熒光照明折射樣本礦物薄片液晶融化-再結(jié)晶的化學(xué)藥品頭發(fā)和纖維骨頭和羽毛偏光照明反身桃光高光反射表面薄膜，鏡子拋光冶金樣品集成電路明場(chǎng)照明 相差、DIC 暗場(chǎng)照明漫反射表面厚膜巖石和礦物頭發(fā)、毛纖維、骨、昆蟲明場(chǎng)照明 相差、DIC 暗場(chǎng)照明振幅的表層特征染成纖維，彌漫性金屬標(biāo)本明場(chǎng)照明暗場(chǎng)照明復(fù)合材料 聚合物折射樣本礦物薄片頭發(fā)和纖維骨頭和羽毛單晶硅定向薄膜偏光照明熒光標(biāo)本染色細(xì)胞，熒光染色部分涂片檢查熒光照明中國(guó)顯微圖像網(wǎng)推薦原文出處： HYPERLINK /ar