DB32-T 3762.18-2021新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范 第18部分：規(guī)?；怂釞z測程序-（高清現(xiàn)行）

1、ICS 13.100C 50DB32江蘇省地方標準DB 32/T 3762.192021新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范 第 18 部分：規(guī)?；怂釞z測程序Technical specifications for SARS-CoV-2 detection Part 18: Large-scale nucleic acid testing process2021- 12 - 09 發(fā)布2022 - 01 - 09 實施江蘇省市場監(jiān)督管理局發(fā) 布DB32/T 3762.182021 PAGE * ROMAN II目次前言II HYPERLINK l _bookmark0 范圍1 HYPERLINK l _

2、bookmark1 規(guī)范性引用文件1 HYPERLINK l _bookmark2 術語和定義1樣本采集2樣本保存與轉運3實驗室檢測4陽性病例報告處置程序5廢棄物處置6前言DB32/T 3762新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范目前分為以下部分：第1部分：生物樣本采集、運輸和保存；第2部分：病毒分離與鑒定；第3部分：核酸熒光PCR檢測程序；第4部分：重組酶介導等溫擴增程序；第5部分：血清IgM和IgG抗體酶聯(lián)免疫吸附檢測程序；第6部分：血清IgM和IgG抗體膠體金免疫層析檢測程序；第7部分：空氣樣本檢測與評估；第8部分：物體表面檢測與評估；第9部分：醫(yī)務人員職業(yè)暴露檢測與評估；第10部分：微量血清中和試

3、驗；第11部分：全基因組高通量測序；第12部分：藥物體外抗病毒效果測定；第13部分：疊氮溴化丙錠-熒光PCR檢測程序；第14部分：N亞基因組熒光PCR檢測程序；第15部分：血清/血漿IgM和IgG抗體磁微?；瘜W發(fā)光法檢測程序；第16部分：核酸數(shù)字PCR法；第17部分：核酸檢測用假病毒陽性質控品；第18部分：規(guī)?；怂釞z測程序。本文件為DB32/T 3762 的第18部分。本文件按照GB/T 1.1-2020標準化工作導則 第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則的規(guī)定起草。本文件由江蘇省衛(wèi)生健康委員會提出。本文件由江蘇省衛(wèi)生標準化技術委員會歸口。本文件起草單位：江蘇省疾病預防控制中心、鼓樓區(qū)疾病預

4、防控制中心、揚州市疾病預防控制中心。 本文件主要起草人：吳斌、朱立國、楊斌、趙康辰、吳昀、劉文俊、王寅、吳濤、朱小娟、溫恬、黃超、喬喬、葛以躍、崔侖標。DB32/T 3762.182021 PAGE 7新型冠狀病毒檢測技術規(guī)范 第 18 部分：規(guī)?；怂釞z測程序范圍本文件規(guī)定了新型冠狀病毒規(guī)?；怂釞z測程序。本文件適用于規(guī)?；滦凸跔畈《緦嶒炇液怂釞z測過程中的人員配備、環(huán)境與設施、設備與耗材、 試劑與材料、檢測流程及生物安全防護要求。規(guī)范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件， 僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新

5、版本（包括所有的修改版）適用于本文件。GB 19489實驗室生物安全通用要求醫(yī)療機構臨床基因擴增管理辦法 原中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則 原中華人民共和國衛(wèi)生部醫(yī)學檢驗實驗室基本標準（試行） 原中華人民共和國衛(wèi)生計生委醫(yī)學檢驗實驗室管理規(guī)范（試行） 原中華人民共和國衛(wèi)生計生委新型冠狀病毒實驗室生物安全指南 中華人民共和國衛(wèi)生健康委全員新型冠狀病毒核酸檢測組織實施指南 國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制綜合組醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（第二版）國務院應對新型冠狀病毒肺炎疫情聯(lián)防聯(lián)控機制醫(yī)療救治組感染性物質運輸規(guī)章指導 WHO術語和定義以下術語和定義

6、適用于本文件。3.1規(guī)?；怂釞z測程序 large-scale nucleic acid testing process規(guī)模化核酸檢測是指應用熒光定量PCR技術每日檢測1萬管（單管為1萬人份、5混1為5萬人份，10混1為10萬人份）所需要的檢測程序。3.2熒光定量聚合酶鏈式反應 fluorescence quantitative polymerase chain reaction一種新型定量試驗技術，通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應過程，結合相應的軟件對產(chǎn)物進行分析，計算待測樣本模板的初始濃度，用于鑒別病原 微生物。3.3網(wǎng)格化管理模式 grid

7、 management mode網(wǎng)格化管理是一種行政管理改革，依托統(tǒng)一的城市管理以及數(shù)字化的平臺，將城市管理轄區(qū)按照一 定的標準劃分成為單元網(wǎng)格。通過加強對單元網(wǎng)格的部件和事件巡查，建立一種監(jiān)督和處置互相分離的 形式。3.4胍鹽 guanidine salt異硫氰酸胍或鹽酸胍等，可用于病毒的滅活。樣本采集采樣點設置采樣點布局應綜合當?shù)厝丝跀?shù)量、地緣交通、核酸檢測機構分布等情況，科學規(guī)劃。各地可按照社區(qū)、街道、鄉(xiāng)鎮(zhèn)、農(nóng)村、城郊實際人口數(shù)量，參照 2000 2500 人設 1 個采樣點的標準，明確采樣點位置。在固定檢測點的基礎上，采取網(wǎng)格化管理模式，以社區(qū)采樣為主，通過進學校、進企業(yè)、進單 位等形

8、式細化完善布局，方便市民采樣、提高采樣效率。60 歲以上老年人、孕婦、殘障等弱勢群體應設置綠色通道獨立采樣。采樣點應當在（4 6）小時內完成規(guī)范建設和啟用。人員準備采樣點需采用手工登記信息時，采樣工作人員、服務保障人員、待檢人員配備比為“1:4:100”，即每 100 個待檢人員，需要配備 1 組采樣工作人員、4 個服務保障人員。在采樣點采用信息化掃碼方式登記信息時，采樣工作人員、服務保障人員、待檢人員人員配比為“1:3:130”。采樣工作人員應當為醫(yī)生或護士，熟悉樣本種類和采集方法，熟練掌握樣本采集操作流程及注 意事項，做好樣本信息的記錄，確保樣本質量符合要求、樣本及相關信息可追溯。每個采樣

9、單元應當配備（1 2）名采樣人員。原則上每（2 4）小時輪崗休息 1 次。服務保障人員可為社區(qū)工作人員或志愿者等，負責前期采集人員信息錄入，引導人員分組、分時段有序采樣，避免人員聚集，嚴格落實“1 米線”間隔要求，嚴控人員密度。合理設置等待采樣區(qū)域或人員通道，加強現(xiàn)場秩序維護，采樣區(qū)域中每個采樣單元每次進入人員不超過 10 人。空間準備采樣點應為獨立空間，具備通風條件，應劃分清潔區(qū)和污染區(qū)，配備手衛(wèi)生設施或裝置。采樣點應設立清晰的指引標識，并明確采樣流程和注意事項。應設立獨立的等候區(qū)域，保證人員單向流動。物資準備采集管要求管帽和管體應當為聚丙烯材質，螺旋口可密封，松緊適度，蓋內有墊圈、耐冷凍。

10、4.4.1.2 管體透明，可視度好。試管外徑（14.8 0.2）mm（100.5 0.4）mm, 管帽外（15.8 0.15）mm,高度（12.5 0.5）mm。容量企業(yè)定標 10 mL，內含 3 mL(單采和 5 合 1 混采)或 6 mL（10 合 1 混采）保存液。應首選含胍鹽（異硫氰酸胍或鹽酸胍等）或其他有效病毒滅活劑的保存液。保存液應當帶有易于觀察、辨識的顏色（如粉紅色），并保持一定的流動性，方便取樣。采集拭子要求宜選用聚酯、尼龍等非棉質、非藻酸鈣材質的拭子，且柄部為非木質材料。折斷點位于距拭子頭頂端 3 cm 左右，易于折斷。采樣人員防護裝備要求按照關于印發(fā)醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸

11、檢測工作手冊（試行第二版）的通知（聯(lián)防聯(lián)控機制 醫(yī)療發(fā)2020313 號）執(zhí)行。采集方法按照關于印發(fā)醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）的通知（聯(lián)防聯(lián)控機制 醫(yī)療發(fā)2020313 號）執(zhí)行。信息采集要求樣本采集前，采樣人員應當對受檢者身份信息進行核對。信息采集系統(tǒng)和手工信息采集應至少包括以下受檢者信息、采樣信息和信息反饋。受檢者信息應至少包括受檢者（患者）姓名、證件類型、證件號碼、居住地址、聯(lián)系電話。采樣信息應至少包括采樣點名稱、樣本編號，采集日期、時間、部位、類型、數(shù)量等。信息反饋應至少包括對接檢測單位和疫情信息上報單位的信息，方便盡快反饋疑似陽性樣本的 受檢者信息。樣本保存與

12、轉運樣本應低溫 2 8 保存，如不具備低溫保存條件，在采樣點放置時間不超過 4 小時。樣本采集后應在 4 小時內按批轉運，6 小時內上機檢測。如果需要長途運輸樣本，應采用干冰等制冷方式進行保存。非滅活樣本應按照 WHO 感染性物質運輸規(guī)章指導中 UN 2814 的 A 類感染性物質以 PI 602 進行規(guī)范包裝，滅活樣本應按照 UN 3373 的 B 類感染性物質以 PI650 進行規(guī)范包裝。樣本轉運箱封閉前， 須使用 75 %酒精或 0.2 %含氯消毒劑消毒容器表面。樣本如需送往外省（區(qū)、市）檢測的，應當由省級衛(wèi)生健康行政部門向國家衛(wèi)生健康委提出申請， 根據(jù)回復意見實施。承擔轉運任務的車輛應

13、辦理病原微生物菌（毒）種準運證書。車輛承擔轉運任務期間，不得用于 其他用途，轉運時應做好生物安全防護，保證專人專車對樣本進行轉運。指揮中心應當準確掌握采樣情況和檢測能力，精準匹配采檢量，應配備足夠的車輛和專業(yè)人員， 并協(xié)調公安、交通運輸?shù)炔块T根據(jù)實際需要做好運輸安全保障工作。實驗室檢測環(huán)境與設施應按照新型冠狀病毒實驗室生物安全指南的要求，未經(jīng)培養(yǎng)的感染性材料在采用可靠的方 法滅活前進行核酸提取及臨床樣本的滅活等操作，應在生物安全二級實驗室（BSL-2）進行，同時采用 生物安全三級實驗室（BSL-3）的個人防護；感染性材料或活病毒在采用可靠的方法滅活后進行的核酸 檢測操作應在 BSL-2 進行。

14、大批量樣本不能在生物安全柜內滅活的，可選擇通風、寬敞、相對偏僻且方便樣本轉運車輛通 行到達的場所接收樣本并滅活處理及編號。核酸擴增應在基因擴增實驗室進行,臨床檢測機構基因擴增實驗室應滿足 GB 19489、醫(yī)療機構臨床基因擴增管理辦法、醫(yī)療機構臨床基因擴增檢驗實驗室工作導則相關要求, 獨立設置的醫(yī)學檢驗實驗室還應當符合醫(yī)學檢驗實驗室基本標準（試行）醫(yī)學檢驗實驗室管理規(guī)范（試行） 等要求?；驍U增實驗室應至少有試劑準備區(qū)（大于 20 平方米）、樣本制備區(qū)（大于 40 平方米）和擴增及產(chǎn)物分析區(qū)（大于 40 平方米）等三個在物理上處于完全分隔狀態(tài)的工作區(qū)域。人員準備工作人員應包括檢測人員和相關輔助

15、人員。應配備檢測人員（24 25）人（按三班倒，每班 8 人，檢測能力 1 萬管/ 24 小時計算）。檢測人員應具有臨床基因擴增實驗室崗位培訓證書，職稱不限，有 2 年以上病原體核酸擴增檢測經(jīng)驗，并有新冠核酸檢測經(jīng)驗，身體健康，并按照醫(yī)療機構新冠病毒核酸檢測工作手冊（試行第二 版）相關要求執(zhí)行保障人員 15 人，應包括樣本接收、滅活及整理樣本人員，清潔及醫(yī)療廢物處理人員，醫(yī)院聯(lián)絡人和政府聯(lián)絡人。檢測設備應配備 96 孔核酸提取儀器（4 6）臺， 96 孔 PCR 擴增儀器（10 12）臺， A2 型雙人生物安全柜 3 個及配套使用的八通道移液器、板式離心機、渦旋混勻儀。核酸提取試劑應與核酸提取

16、儀配套使用，選用擴增檢測試劑盒指定的擴增儀。所有設備應經(jīng)過必要的檢定/校準，建立儀器設備使用、維護、檢定校準的程序文件，并按照程 序文件嚴格執(zhí)行。試劑與耗材應按照混采或單采準備相應數(shù)量的試劑。除常規(guī)檢測試劑外，還應當準備有（1 2）種靈敏度更高的與常規(guī)檢測的擴增靶點不同的其他試劑用于結果復核。試劑要與檢測儀器相匹配。推薦選用包含針對新冠病毒開放讀碼框 1ab （open reading frame 1ab，ORF1ab ）和核殼蛋白（nucleocapsid protein，N）基因區(qū)域的試劑。擴增試劑盒應選用國家藥品監(jiān)督管理局批準有注冊文號的試劑盒。建議選擇檢測限低、靈敏度高的檢測試劑盒（檢

17、測限 500 拷貝/mL）。所有試劑應當嚴格按照要求條件妥善保存，并在有效期內使用。配備相應數(shù)量的耗材，如 PCR 擴增板、加長型吸頭、試管架等。防護用品醫(yī)用防護口罩（頭戴式）、外科口罩、隔離衣、防護服，無粉乳膠手套，鞋套，面屏或護目鏡， 帽子、洗手液等，按每人每天一套配置（2 3）天用量。應按人員體型配置不同型號防護用品。實驗室檢測程序實驗室接收樣本后，應立即進行檢測。檢測方法按照關于印發(fā)醫(yī)療機構新型冠狀病毒核酸檢測工作手冊（試行第二版）的通知（聯(lián) 防聯(lián)控機制醫(yī)療發(fā)2020313 號）執(zhí)行。檢測過程宜增加分揀排序步驟，記錄批次與板次，方便結果回溯。陰性樣本應至少留存 3 天。檢測結果上報程序

18、實驗室檢測的性能驗證、室內質控、室間質評等按照醫(yī)療機構新冠病毒核酸檢測工作手冊（試 行 第二版）（聯(lián)防聯(lián)控機制醫(yī)療發(fā)2020313 號）相關要求執(zhí)行。新冠病毒核酸定性檢測報告應當包括檢測結果（檢出/陽性、未檢出/陰性）、方法學及其檢測 限、檢測時間等。依據(jù)所用擴增試劑說明書，判斷檢測結果為未檢出/陰性或者檢出/陽性。檢測結果應當及時上報，重點地區(qū)重點人群 6 小時、其他人群 12 小時，原則上不得超過 24 小時。注：以上按規(guī)?；怂釞z測每日1萬管標準（單管為 1 萬人份、5 混 1 為 5 萬人份，10 混 1 為 10 萬人份）所需的檢測能力，在此基礎上可增加 20% 人員、設備配置作為檢

19、測能力儲備。陽性病例報告處置程序單采檢測樣本結果陽性報告處置程序檢測樣本結果為陽性的，檢測機構應當立即上報所在地縣級衛(wèi)生健康行政部門，并由法定報告 機構在 2 小時內將相關信息進行傳染病網(wǎng)絡直報。衛(wèi)生健康行政部門應當?shù)谝粫r間派出負壓救護車將陽性病例轉運至定點醫(yī)院進行隔離治療，組 織開展流調、環(huán)境消殺和密接追蹤?；觳蓹z測樣本結果陽性報告處置程序混采檢測結果為陽性、灰區(qū)或單個靶標陽性的，由檢測機構立即上報所在地縣級衛(wèi)生健康行政部門，衛(wèi)生健康行政部門應當根據(jù)混采數(shù)量第一時間派出相應數(shù)量應急采樣隊（如 5 混 1 同時派出 5 支應急采樣隊， 10 混 1 同時派出 10 支應急采樣隊），同時對樣本涉

20、及人員進行復采，并通知疾控部門對該采樣管所涉人員暫時單獨隔離。復核單管核酸檢測如均為陰性，則按照陰性結果回報，暫時隔離人員即解除隔離。如復核檢測結果陽性，鎖定陽性人員，其余人員解除隔離。同時，衛(wèi)生健康行政部門應當在第一時間派出負壓救護車將陽性病例轉運至定點醫(yī)院進行隔離治療，組織開展流調、環(huán)境消殺和密接追蹤。應急保障措施各區(qū)縣應成立至少 10 支應急采樣隊，對混采陽性結果及時進行復采復檢。應急采樣隊應當由采樣人員、信息采集人員、司機組成，并配備車輛。公安、社區(qū)（村委）等相關人員應當配合應急采樣人員入戶采樣，采用鼻咽拭子方式，所采樣 本送原檢測機構檢測。廢棄物處置基本要求新冠病毒樣本采集場所和開展

21、核酸檢測的實驗室應當制定醫(yī)療廢物處置流程。所有的危險性醫(yī)療廢 物必須按照統(tǒng)一規(guī)格化的容器和標示方式，完整且合規(guī)地標示廢物內容。應當由經(jīng)過適當培訓的人員使 用適當?shù)膫€人防護裝備和設備處理危險性醫(yī)療廢物。醫(yī)療廢物的處理措施在采樣場所，應設置醫(yī)療廢棄物收集裝置，做到及時清運，對場地定時消毒，杜絕環(huán)境污染。由各街道（鄉(xiāng)鎮(zhèn)）組織人員，按每個采樣場所（3 5）人配備，負責采樣場所的終末消毒和醫(yī)療廢棄物轉運。實驗室廢液、固體廢物的處理按照醫(yī)療機構新冠病毒核酸檢測工作手冊（試行 第二版）相關要求執(zhí)行。樣本檢測完成后，檢測結果為陽性時，需將生物安全柜和實驗核心區(qū)的醫(yī)療廢物在產(chǎn)生地點進行高壓蒸汽滅菌，然后按照感染性廢物收集處理；如檢測結果為陰性，確認檢測結果無誤后可立即將陰性樣本檢測產(chǎn)生的醫(yī)療廢物進行規(guī)范包裝，按照醫(yī)療廢物處理流程進行處置，可不再進行高壓蒸汽滅菌?；驍U增檢測結束后，擴增后反應管不要開蓋，直接放于垃圾袋中，封好袋口，不再進行高壓 蒸汽滅菌處理，按一般醫(yī)療廢物轉移出實驗室處理。實驗室每次高壓均需采用化學法進行消毒效果驗證并保存消毒和驗證記錄。根據(jù)生物風險評估， 可以每月或每季按照操作要求進行一次高壓滅菌效果的生物監(jiān)測。醫(yī)療廢物清運核酸檢測機構（實驗室）可以自主選擇具有相應資質的醫(yī)療廢物收集處置單位承擔醫(yī)療廢物的清運、