金銀花對發(fā)熱新西蘭兔解熱作用機制的研究

1、金銀花對發(fā)熱新西蘭兔解熱作用機制的研究謝新華蔣紹祖鄒曉琴周琴溫二生薛進華【摘要】目的探究金銀花解熱作用的中樞機制,為其在臨床應(yīng)用提供實行根據(jù)。要領(lǐng)用白細(xì)胞介素-1IL-1復(fù)制新西蘭兔發(fā)熱模子,在不雅察金銀花解熱作用的底子上,應(yīng)用免疫組化技能檢測靜脈注射金銀花對IL-1作用下新西蘭兔視前區(qū)-下丘腦前部(preptianterirhypthalaus,PAH)構(gòu)造中前線腺素受體EP3E-typeprstaglandinreeptrEP3表達的影響。效果金銀花靜脈注射后對正常新西蘭兔結(jié)腸溫度沒有顯著影響,與生理鹽水組比擬,最大要溫上升高度(T)及1h體溫反響指數(shù)(TRI1)兩組間無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.

2、05)；IL-1組在靜脈注射IL-1后,結(jié)腸溫度漸漸升高,T及TRI1與生理鹽水組比力,有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.01)；而金銀花+IL-1組結(jié)腸溫度上升峰值顯著低于IL-1組,兩組T及TRI1有明顯性差異(P0.05)。新西蘭兔PAHEP3在生理狀態(tài)下僅有少量表達；靜脈注射IL-1誘導(dǎo)實行動物發(fā)熱時,EP3表達顯著加強(P0.01)；而金銀花能淘汰IL-1引起的EP3表達(P0.05)。結(jié)論金銀花對IL-1性發(fā)熱新西蘭兔的解熱作用機制大概與其按捺視前區(qū)-下丘腦前部EP3的表達有關(guān)?！娟P(guān)鍵詞】金銀花解熱視前區(qū)下丘腦前部前線腺素受體EP3金銀花是我國中醫(yī)藥寶庫中的寶貝,其身分龐大，含多種揮發(fā)油、綠原酸

3、類化合物、三萜皂苷類化合物、黃酮類化合物。具有廣譜抗菌、抗病毒、抗腫瘤、加強免疫及解熱抗炎、利膽、保肝、落脂、抗生養(yǎng)、止血、抗?jié)兊榷喾N藥理作用1。以金銀花為主的多種復(fù)方制劑如銀翹散、銀黃注射液、銀黃解毒片等對多種熏染所致的發(fā)熱有較好的療效。我們以往的實行也表白2，金銀花對IL-1引起的發(fā)熱有顯著的解熱作用，并用電生理要領(lǐng)對此中樞解熱機制作了開端研究。本實行從分子生物學(xué)角度進一步探究此中樞解熱機制,為其在臨床解熱中的應(yīng)用提供更多的實行根據(jù)。1東西與要領(lǐng)1.1裝備及試劑ST-1型數(shù)字溫度計上海醫(yī)用儀表廠,電熱恒溫造就箱上海躍進醫(yī)療東西一廠,1900型恒冷箱切片機德國徠卡公司,DRA2正立電動熒光

4、顯微鏡德國徠卡公司,LEiaQin彩色圖像闡發(fā)體系德國徠卡公司,IL-1美國Siga公司。金銀花注射液。免疫組化試劑盒武漢博士德生物工程。1.2動物及分組康健新西蘭兔24只,牝牡不限，體重1.52.0kg，隨機分成4組，每組6只。生理鹽水(NS)比擬組：每只動物靜脈注射NS1l；金銀花組：每只動物靜脈注射金銀花注射液1l；IL-1組：每只動物靜脈注射IL-1100ng用無熱原NS稀釋至1l；金銀花+IL-1組：靜脈注射金銀花注射液1l/只,30in后再靜脈注射IL-1劑量同IL-1組。1.3發(fā)熱動物模子的制備利用ST-1型數(shù)字溫度計丈量結(jié)腸溫度。實行前3d將兔置于實行情況中模擬操縱以順應(yīng)實行條

5、件，46h/d，第4天正式實行。實行時，實行室溫度保持在231，將新西蘭兔置于特制兔箱中，用涂有白臘油的測溫探頭經(jīng)肛門插入10,并用膠布結(jié)實于尾根部，待體溫不變后,每隔10in記載1次結(jié)腸溫度，取3次的均勻值作為底子體溫。IL-1組從耳緣靜脈注射IL-1，并每隔10in記載體溫1次，共記載70in；NS比擬組從耳緣靜脈注射NS；實行組記載體溫要領(lǐng)雷同。1.4取材和切片記載至70in時，用20%氨基甲酸乙酯舉行麻醉，敏捷分散雙側(cè)頸總動脈和一側(cè)頸外靜脈，此中一側(cè)頸總動脈插管，另一側(cè)頸總動脈結(jié)扎，開放頸外靜脈，快速(2in內(nèi))輸入370.01%肝素生理鹽水100l，再先快后慢灌注44%多聚甲醛200

6、l，維持灌注30in；取兔下丘腦，放入4%多聚甲醛后結(jié)實，按通例白臘切片要領(lǐng)，脫水、透明、包埋、切片，厚度為4，隔2取1，用作EP3免疫組化法查抄。1.5飄浮法免疫組化染色步伐按通例AB要領(lǐng)。切片脫蠟、脫水；奇怪配制的3%雙氧水浸泡10in，以消除內(nèi)源性過氧化物酶；抗原修復(fù)；正常兔血清孵育30in，滴加抗EP3抗體，4留宿；滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37孵育20in；滴加試劑SAB，37孵育30in；DAB顯微鏡下操縱顯色；上述各步之后均用0.01l/LPBS振蕩漂洗3次，每次5in；蘇木素復(fù)染，脫水，透明，封片，顯微鏡下不雅察。陰性比擬以PBS取代一抗，別的步調(diào)雷同。陽性比擬接納自身比擬

7、，用PBS取代一抗和二抗作陰性比擬。1.6圖像闡發(fā)接納LeiaQin彩色圖像闡發(fā)體系，每張切片隨機拔取10個不重疊的視野，計數(shù)每個視野陽性細(xì)胞數(shù)；每個視野隨機選10個細(xì)胞，盤算單個細(xì)胞面積及陽性細(xì)胞總面積來反響PAH、EP3亞型的表達程度。1.7統(tǒng)計學(xué)闡發(fā)全部實行數(shù)據(jù)均以s表現(xiàn)，用SPSS11.0舉行t查驗。2效果2.1金銀花對IL-1性發(fā)熱效應(yīng)的影響效果見表1。從表1可以看出，金銀花組和NS組新西蘭兔體溫沒有顯著變革，兩組比力，T及TRI1均無顯著差異(P0.05)；而IL-1組與NS組比擬，結(jié)腸溫度升高，T及TRI1有明顯性差異(P0.01)；金銀花+IL-1組在事先注射金銀花后，溫度上升

8、峰值顯著低于IL-1組，兩組T及TRI1比力，有明顯性差異(P0.05)。表1各組家兔結(jié)腸溫度影響的比力略與NS組比力，*P0.01；與IL-1組比力，P0.05；n=62.2金銀花對發(fā)熱新西蘭兔視前區(qū)-下丘腦前部PAH前線腺素受體EP3表達的影響效果見表2。從表2可以看出，NS比擬組和金銀花組視前區(qū)-下丘腦前部每個視野EP3陽性神經(jīng)元個數(shù)、單元面積陽性神經(jīng)元及陽性細(xì)胞面積光密度值差異無統(tǒng)計學(xué)意義P0.05；IL-1組新西蘭兔PAH每個視野EP3陽性神經(jīng)元個數(shù)、單元面積陽性神經(jīng)元及陽性細(xì)胞面積光密度值均顯著高于生理鹽水比擬組P0.01；而注射金銀花注射液能按捺IL-1誘導(dǎo)的EP3表達，其PAH

9、每個視野EP3陽性神經(jīng)元個數(shù)、單元面積陽性神經(jīng)元及陽性細(xì)胞面積光密度值均顯著低于IL-1組P0.05。表2各組新西蘭兔PAHEP3的表達程度略與NS組比力，*P0.01；與IL-1組比力，P0.053討論IL-1是公認(rèn)的內(nèi)生致熱源之一，動物實行中常用來復(fù)制發(fā)熱模子。如今以為IL-1引起發(fā)熱的機制之一是IL-1與終板血管器的血管內(nèi)皮細(xì)胞及其四周的巨噬細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞胞膜上的IL-1受體結(jié)合，促進靶細(xì)胞內(nèi)PGE2合成，天生的PGE2以旁排泄情勢誘導(dǎo)下丘腦溫度敏感神經(jīng)元細(xì)胞膜上的PGE2受體并與之結(jié)合3，進而引起后續(xù)的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)；PGE2受體有4種亞型：EP1，EP2，EP3，EP44。藥理學(xué)研究

10、資料表現(xiàn)EP1和EP3大概介導(dǎo)了PGE2依靠性發(fā)熱；而利用基因敲除小鼠闡發(fā)的效果提示EP3更大概是PGE2誘導(dǎo)發(fā)熱的關(guān)鍵受體5。我們以往實行也表白6：IL-1誘導(dǎo)發(fā)熱時，視前區(qū)-下丘腦前部EP3RNA的表達顯著加強。PGE2與其受體結(jié)合后，通過信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路改變體溫調(diào)治中樞體溫調(diào)定點程度7，從而引起機體產(chǎn)熱和散熱變革，使體溫升高。假設(shè)可以或許下調(diào)視前區(qū)-下丘腦前部內(nèi)EP3的表達，那么可按捺IL-1所致的發(fā)熱。金銀花具有清熱解毒作用，以金銀花為主的多種復(fù)方制劑對多種熏染所致的發(fā)熱有較好的療效8,9。我們以往的實行效果也表白2,10，金銀花有顯著的解熱作用，并從中樞電生理的角度闡發(fā)其解熱機制與逆轉(zhuǎn)致

11、熱原引起的溫度敏感神經(jīng)元放電頻率的改變有關(guān)。本實行用免疫組化法進一步從分子程度來研究金銀花的中樞解熱作用機制。效果表白：IL-1引起新西蘭兔發(fā)熱的同時，視前區(qū)-下丘腦前部神經(jīng)元上的前線腺素受體EP3表達顯著增長；而注射金銀花注射液可下調(diào)IL-1誘導(dǎo)的EP3表達。因此我們以為，金銀花起解熱作用的另一機制大概與其按捺PAH神經(jīng)元EP3的表達有關(guān)?！緟⒖嘉墨I】1何顯忠,蘭榮德.金銀花的藥理作用與臨床應(yīng)用J.時珍國醫(yī)國藥,2022,15(12):865.2謝新華,董軍,付詠梅，等.金銀花解熱作用及機制的實行研究J.時珍國醫(yī)國藥,2022,18(9):2071.3niaEk,EngblD,SahaS,e

12、tal.Inflaatryrespnse:pathayarsshebldbrainbarrierJ.Nature,2001,410(6827):544.4Takakazuka,Kaeka,liffrdB，etal.ntrastingeffetsfEtypeprstaglandin(EP)reeptragnistsnrebdyteperatureinratsJ.BrainResearh,2022，968:256.5UshikubiF,SegiE,SugitY,etal.IpairedfebrilerespnseinielakingtheprstaglandinEreeptrsubtypeEP3J.Nature,1998,395(6699):281.6唐紅梅,潘銳,謝新華，等.IL-1對兔下丘腦前線腺素受體EP3RNA表達的影響J.廣東醫(yī)學(xué),2022,286：869.7李滄海,周軍,霍海如，等.前線腺素EP3受體沖動劑誘導(dǎo)發(fā)熱及其機制初探J.中國病理生理雜志,2022，20(4):664.8劉華鋼,陳燕軍,林啟云，等.復(fù)方銀黃微型灌腸劑解熱、抑菌作用的研究J.廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2001,18(6):801.9覃筱燕,張淑萍,楊林，等.復(fù)方雙花口服液的解熱、抗炎、抑菌作用的實行研究J.中心民族大學(xué)學(xué)報(天然科學(xué)