(整理)黃酮提取工藝設(shè)計(jì)思路

1、精品文檔精品文檔精品文檔黃酮提取工藝設(shè)計(jì)思路1、黃酮類化合物含量測定的原理在中性或弱堿性及亞硝酸鈉存在條件下，黃酮類化合物與鋁鹽生成螯合物，加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色。黃酮類化合物能與金屬離子絡(luò)合產(chǎn)生有色反應(yīng)，于波長510nm附近有吸收，可用分光光度法進(jìn)行測定。實(shí)驗(yàn)采用在堿性條件下，亞硝酸鹽存在時，硝酸鋁與黃酮形成紅色絡(luò)合物，在波長510nm附近有吸收可進(jìn)行比色分析。在中性或弱堿性及硝酸鈉存在條件下，黃酮類化合物與鋁鹽生成鰲合物，加入氫氧化鈉溶液后顯紅橙色，硝酸鈉還原黃酮，加硝酸鋁絡(luò)合，加氫氧化鈉使黃酮類化合物開環(huán)，生成2，-OH查耳酮而顯色。利用黃酮類化合物中的3羥基、4羥基、5羥基、4羰基

2、或鄰二位酚羥基，與A13進(jìn)行絡(luò)合反應(yīng)，在堿性條件下生成紅色絡(luò)合物的原理測定其含量2、測定波長的確定取樣品溶液和標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL,加70%的乙醇至5mL,然后加入5%的NaNO2溶液1mL,室溫放置6min,再加入10%的A1(NO3)31mL,混勻，室溫放置6min,加入4%的NaOH10mL,用水稀釋至25mL,混勻，放置15min,在分光光度計(jì)上掃描波長從400nm600nm之間的吸收度，結(jié)果在510nm波長處有最大吸收值。配合物在KmaX=354nm及Kmax2=510nm有兩個吸收峰，經(jīng)實(shí)驗(yàn)后得出Kmax354nm波長處得到的工作曲線線性關(guān)系及精密度數(shù)據(jù)均不佳，故本實(shí)驗(yàn)選取Kmax2=5

3、10nm為測定波長。3、標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制精確稱取105C干燥恒重蘆丁對照品50mg,加乙醇適量，使之充分溶解，用乙醇定容到100mL,搖勻，制得蘆丁溶液。精確量取蘆丁溶液20mL,置于50mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，即得對照品溶液。每1mL溶液含蘆丁對照品02mg?；蚓芊Q取干燥至恒重的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品10mg,置50mL容量瓶中，加無水乙醇20mL,輕搖使充分溶解,定容，搖勻，得02mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液。精確稱取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品5mg,用70%乙醇溶解，于50mL容量瓶中定容，即得每1mL溶液含蘆丁對照品01mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液。稱取約20mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品于稱量瓶中置105C烘箱下烘干至恒重，干燥器中

4、冷卻，精確稱精品文檔精品文檔取10mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，用70%乙醇定容至100ml為標(biāo)準(zhǔn)液。4、樣品溶液的測定方法4.1、標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確量取對照品溶液00、10、20、30、40、50、6.0mL,分別置于25mL容量瓶中。分別加水至6mL，加5%亞硝酸鈉溶液10mL,混勻，放置6min;加10%硝酸鋁溶液10mL,搖勻，放置6min;加1%氫氧化鈉溶液100mL,再加水至刻度，搖勻，放置15min。用分光光度法在510nm波長處分別測定其吸光度。以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，用最小二乘法對直線進(jìn)行回歸計(jì)算，令回歸方程為：y=ax+b，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸線方程:Y=1132143X+000

5、343（r=09998）,在840gg/mL的范圍內(nèi)，濃度與吸收度有良好的線性關(guān)系。分別取00、10、20、30、40、50mL的01mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液于6支比色管中，分別加入03mL5%亞硝酸鈉，放置6min，加03mL10%硝酸鋁后放置6min,，再加10mol/LNaOH40mL，加70%乙醇定容至10mL,搖勻，放置12min得測定液。以空白溶液作參比,在后510nm處測吸光度，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)液濃度與吸光度（D）的回歸方程D=bC+k。精確吸取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0、10、20、30、40、50ml分別置于6支具塞試管中，各補(bǔ)70%乙醇至50ml，加5%亞硝酸鈉溶液03ml,搖勻，放置6min后，

6、加10%硝酸鋁溶液03ml,搖勻，放置6min后，再加4%氫氧化鈉溶液40ml，加水04ml,搖勻，放置15min后，在510nm處測吸光度-濃度值，所得吸光度-濃度曲線見圖，回歸方程如下:A=127210C-0.02903，相關(guān)系數(shù)r=0.9998。42、樣品處理取采回的新鮮蘆蒿葉，洗凈，參考相關(guān)文獻(xiàn)，在105C烘至約八成干，剪成約1cm長度，用粉碎機(jī)粉碎，再在105C烘至恒重。采用Soxhlet提取法，以無水乙醚為脫脂劑,于43C水浴中脫脂至充分除去樣品中脂類和脂溶性色素。取出樣品濾紙包，先置通風(fēng)處晾干，再將濾紙包置烘箱中130C烘干，放入干燥器中冷卻備用。43、樣品處理方法濕熱法：將鮮葉

7、置于高壓反應(yīng)釜加壓蒸30min，另取鮮葉常壓蒸30min。將陰干葉置于高壓反應(yīng)釜加壓蒸15min，另取陰干葉常壓蒸15min。氧化法：（1）H2O2法：將鮮葉、陰干葉分別用用2倍量H2O2浸泡10min（H2O2濃度1%、溫度50C）、10min（2%、40C）、30min（05%、30C）、30min（2%、50C）、60min（05%、40C）、60min（1%、30C）（2）KMnO4法：將鮮葉、陰干葉分別用用2倍量KMnO4浸泡10min（KMnO4濃度1%、溫度50C）、10min（2%、40C）、30min精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔（05%、30C）、30min（2%

8、、50C）、60min（05%、40C）、60min（1%、30C）。4.3、樣品溶液的測定431、分光光度法精確量取樣品溶液50mL,置于25mL容量瓶中，按照21中方法進(jìn)行操作，在510nm波長處測定吸光度A1；再精確量取樣品溶液5.0mL,置于25mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，在510nm波長處測定吸光度A2。取2次吸光度的差值，由回歸線方程計(jì)算樣品中黃酮類化合物的提取率。432、HPLC法取上述樣品總黃酮提取液濃縮物，用甲醇溶解，進(jìn)樣前用045pm濾膜過濾。高效液相色譜儀：LC-9A（日本SHMADZU）；色譜柱：DimaTechnologies（C18迪馬公司），規(guī)格：250mmx

9、46mm；柱溫為室溫；流速1mL/min；檢測器：SPD-10A；檢測波長254nm；進(jìn)樣量20pL；流動相：80%甲醇。在進(jìn)柱之前，流動相要經(jīng)過045pm的有機(jī)膜過濾，并超聲脫氣30min。5、溶劑選擇分別稱取樣品1g，以提取溫度90C，提取時間2h，分別利用甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、氯仿、石油醚為溶劑，料液比l:50（g/mL）為提取條件進(jìn)行常壓回流提取，以此結(jié)果進(jìn)行比較。6、線性范圍、回歸方程和檢出限總黃酮的線性范圍在1040pg/ml之間，所得回歸方程為y=00033x0.0109,相關(guān)系數(shù)為09995，檢出限為10pg/mlo7、顯色劑穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)精確量取標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品提取液10mL

10、,同標(biāo)準(zhǔn)曲線和樣品測定的操作，分別于配制后每隔5min測定其吸光度考察反應(yīng)體系的穩(wěn)定性。結(jié)果顯示其RSD值為05097%,說明樣品溶液在1h內(nèi)穩(wěn)定。8、加標(biāo)回收率實(shí)驗(yàn)取已測得黃酮類化合物提取率的樣品溶液20mL,加入02mg/mL的蘆丁對照液10mL,按實(shí)驗(yàn)方法測定，計(jì)算回收率。加樣回收率為9912%,RSD值為2135%o表明，該方法對黃花菜中黃酮類化合物提取率測量的準(zhǔn)確度較高?；厥章?（混合后測得的總黃酮含量-樣品中總黃酮含量”蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品加入量X100%o分別取02g含總黃酮的樣品于兩支15ml具塞比色管中，各加入4ml乙醇，其中1管加入O100mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品作為加標(biāo)測定管，另1管作為本底

11、管，再按最佳試驗(yàn)條件進(jìn)行樣品處理,用標(biāo)準(zhǔn)曲線法進(jìn)行計(jì)算，重復(fù)試驗(yàn)3次，計(jì)算回收率。由表8可知，該方法的回收率為95%104%，證明該方法的準(zhǔn)確度較好。取5個10mL比色管，在已知黃酮含量的蓖麻葉和蓖麻花提取液中分別加入02mg/mL蘆丁對照品溶液100mL、200mL、300mL、4.00mL500mL樣液，分別測定黃酮含量，根據(jù)所得的總黃酮含量減去加入的標(biāo)量，再除以樣品所含的總黃酮量即可計(jì)算出回收率?；厥章?=樣品加標(biāo)準(zhǔn)樣測得總黃酮含量樣品中總黃酮含量/加入標(biāo)準(zhǔn)液總蘆丁的含1x100%序號樣品測定值(mg/ml)加標(biāo)量/mg加標(biāo)后測定值mg/ml回收率/%平均回收率/%RSD/%10.200

12、020.200030.200040.200050.20009、精密度實(shí)驗(yàn)取5份同一樣品溶液各50mL,置于25mL容量瓶中，按實(shí)驗(yàn)方法測定，計(jì)算其平均含量和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。其RSD值平均為0.162%,測定結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差很小，說明儀器的精密度較高,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可靠。在正交試驗(yàn)得出的最佳條件下，樣品用超聲波提取后測定總黃酮提取量，重復(fù)試驗(yàn)5次，計(jì)算保健食品總黃酮提取量為(53700092)mg，RSD為1.717%，證明該方法的精密度較好。按微波提取法同時制備5份試樣液，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方法對試樣液中總黃酮含量進(jìn)行平行測定。精密稱取車前草供試品3份，每份測試3次,結(jié)果見表2，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為320%(m=

13、3)。精密移取蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液1mL,共5份，分別置于10mL試管中，按1332節(jié)操作，計(jì)算吸光度的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。10、重現(xiàn)性試驗(yàn)。取同一批大白口蘑樣品6份，在最佳條件下進(jìn)行萃取，分別測定各自的總黃酮含量，結(jié)果表明，其相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.24%。在同一實(shí)驗(yàn)室、不同時間對樣品葉中總黃酮含量進(jìn)行5次重復(fù)測定。11、金屬離子的干擾實(shí)驗(yàn)銀杏葉提取物作為生物活性物質(zhì),許多金屬離子對它的測定都有一定影響。本實(shí)驗(yàn)選取常見的Zn2+、Fe3+進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)表明Zn2+對反應(yīng)無影響，加入1mL100LgomLFe3+溶液，掃描發(fā)現(xiàn)在波長510nm無吸收峰，由此可知Fe3+對實(shí)驗(yàn)測定影響很大。本實(shí)驗(yàn)選擇EDTA

14、做掩蔽劑。12、黃酮類化合物的定性檢測12.1、三氯化鋁反應(yīng)取8支試管，分別加入少許經(jīng)上述各提取方法所得的樣品，用95%乙醇完全溶解，每只試管中再加1%三氯化鋁乙醇溶液12mL,觀察顏色變化情況。在三氯化鋁反應(yīng)中，原來的黃色加深，并有黃色或黃綠色熒光，原因是與鋁離子產(chǎn)生了螯合物而呈現(xiàn)出鮮黃色。濾紙上無明顯顏色變化,紫外燈下顯鮮黃色熒光,可能不含4-羥基黃酮醇和7,4-二羥基黃酮醇等黃酮類化合物。黃色或黃綠色：有黃酮類化合物。12.2、鹽酸-鎂粉還原反應(yīng)將經(jīng)上述各提取方法所得的樣品分別溶于盛有95%乙醇的試管中,待完全溶解后加少許鎂粉,再加數(shù)滴濃鹽酸，觀察顏色變化情況。在鹽酸-鎂粉還原反應(yīng)中，溶

15、液呈現(xiàn)出橙黃色或紫紅色，這是由于黃酮類化合物被還原生成花色苷元及其二聚物。試液呈現(xiàn)紅色,可能含黃酮、黃酮醇、二氫黃酮、二氫黃酮醇等黃酮類化合物。取樣品液5mL，加入少許鎂粉振搖，滴加數(shù)滴濃鹽酸，微熱2min。并作空白對照實(shí)驗(yàn)（在樣品液中僅加入濃鹽酸進(jìn)行觀察）?？捎^察到在用粗提取液進(jìn)行預(yù)試時,加入濃鹽酸后升起的泡沫顏色呈紫紅色,溶液顯橙紅色,表明樣品液中有黃酮類物質(zhì)存在。橙紅色：黃酮類化合物。取自制的黃酮樣品少許置于試管中，加5%vol的乙醇2mL,在水浴中加熱溶解，滴加2滴濃HC1,再加鎂粉約50mg,即產(chǎn)生劇烈的反應(yīng)。反應(yīng)過程中溶液顏色逐漸由黃色變?yōu)槌燃t色。此現(xiàn)象表明被測物為黃酮類物質(zhì)。12

16、.3、四氫硼鈉反應(yīng)取8支試管,分別加入少許經(jīng)上述各種方法提取所得到的樣品,用95%乙醇完全溶解后加數(shù)滴四氫硼鈉,觀察顏色變化情況。在四氫硼鈉反應(yīng)中,溶液由淺黃色變?yōu)榧t色或紫紅色,此反應(yīng)是二氫黃酮類化合物的專屬反應(yīng)。12.4、與堿反應(yīng)試液變黃色，可能含二氫黃酮、黃酮醇等黃酮類化合物。棕黃色，空氣氧化變褐色：有黃酮醇類或查耳酮。4%氫氧化鈉反應(yīng)，棕色，有黃酮類化合物。12.5、鋁鹽反應(yīng)取樣品提取液5mL,加入03mL5%NaNO2,充分混勻，混勻后靜置5min,加入03mL10%Al（NO3）3，混勻后靜置6min,加入2mL1mol/LNaOH,混勻，靜止10min?？捎^察到有磚紅色的顏色產(chǎn)生，

17、表明提取液中有黃酮類物質(zhì)。黃色：有黃酮類化合物。126、濃氨水反應(yīng)提取物乙醇溶液點(diǎn)在濾紙上,置于濃氨水上方30s,紫外燈下觀察,顯黃色熒光斑點(diǎn)。棕黃色,有黃酮類化合物。127、1%三氯化鐵反應(yīng)藍(lán)色：黃酮類化合物。128、1%醋酸鉛反應(yīng)黃色沉淀：黃酮類化合物。129、濃硫酸反應(yīng)橙色：黃酮類化合物。1210、熔點(diǎn)測定取提取的蓮子心黃酮樣品，經(jīng)多次重結(jié)晶提純，測其熔點(diǎn)230C2305C。1211、紅外光譜圖的比較取精制的黃酮樣品和黃酮（蘆?。φ掌?，溴化鉀壓片法繪制紅外光譜圖。測試條件掃描范圍4000cm-1400cm-1；分辨率4cm-1，掃描次數(shù)3213、總黃酮提取量即得率和提取率計(jì)算131、總

18、黃酮提取量即得率計(jì)算Y=CxV1x（V2/V3）/m式中，Y為黃酮含量（mgg）,C為測定液黃酮濃度（mgmL）,V1為測量時定容的體積（mL），V2為提取液體積（mL）,V3為測量時取液體積（mL）,m為提取時原料質(zhì)量（g）?？傸S酮得率X（%）=nxCxV/mx100%式中：n為提取液稀釋倍數(shù)；C為提取液中總黃酮濃度，mg/mL；V為提取液體積，mL；m為果渣的重量，mg；X總黃酮得率。精品文檔精品文檔P=CxVxn/WxV1X103x100式中:P總黃酮類物質(zhì)含量,g/100g;C從回歸方程計(jì)算得樣品中黃酮類物質(zhì)質(zhì)量，mg;n稀釋倍數(shù);V濃縮液的體積,mL;V1測定體積,mL;W投料量,g

19、。13.2、總黃酮提取率計(jì)算提取率=提取的總黃酮質(zhì)量/原料質(zhì)量x原料中總黃酮含量X100%14、單因素試驗(yàn)14.1、乙醇體積分?jǐn)?shù)的影響取樣品1g左右，分別加入0%、10%、20%、30%、40%、50%60%、70%、80%、90%、100%的乙醇溶液，在100C條件下快速萃取法提取5min,測定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。14.2、不同提取溫度取樣品1g,乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，分別20C、30C、40C、50C、60C、70C、80C、90C、100C于用快速萃取法提取5min，測定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。14.3、不同提取時間取樣品1g，乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，在100C分別快速萃取30mi

20、n、60min、90min、120min、150min、180min，測定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。14.4、不同粒度取樣品1g,乙醇體積分?jǐn)?shù)60%，分別于20目、40目、60目、80目、100目、120目用快速萃取法提取5min，測定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。14.5、提取次數(shù)取樣品1g,乙醇體積分?jǐn)?shù)60%,在100C快速萃取10min，分別萃取1、2、3、4、5次，測定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。14.6、料液比取樣品1g,乙醇體積分?jǐn)?shù)60%,分別于1:10、1:20、1:30、1:40、1:50、1:60、1:70、1:80用快速萃取法提取5min，測定提取液黃酮含量，并計(jì)算得率。1

21、5、超聲波提取總黃酮15.1、乙醇溶液濃度對總黃酮提取的影響精品文檔15.2、超聲溫度對總黃酮提取的影響15.3、超聲時間對總黃酮提取的影響15.4、料液比對總黃酮提取的影響15.5、提取次數(shù)對總黃酮提取的影響15.6、目數(shù)對總黃酮提取的影響15.7、間隙/超聲時間的選擇15.8、浸泡時間選擇16、微波提取總黃酮16.1、乙醇濃度對黃酮提取率的影響16.2、液固比對黃酮提取率的影響16.3、微波功率對黃酮提取率的影響16.4、微波輔助提取時間對黃酮提取率的影響165、0103%的非離子表面活性劑B對黃酮提取率的影響(椰油酰胺甜菜堿(CAB),十二烷基硫酸鈉(K12)，十六烷基三甲氯(溴)化銨(

22、1631)，椰油?；掖及?6501)，三乙醇胺，椰子油醇醚羧酸鈉(CES),椰油酰胺丙基甜菜(CAB-35),十二烷基苯磺酸鈉(LAS)，十二烷基硫酸銨(K12A)、吐溫80(Tween80)、十二烷基三甲基氯化銨(DTAC)166、提取次數(shù)對總黃酮提取量的影響17、超高壓提取總黃酮171、乙醇濃度172、壓力173、料液比174、處理時間175、提取次數(shù)精品文檔精品文檔精品文檔精品文檔18、驗(yàn)證試驗(yàn)根據(jù)篩選得到的最佳提取條件A3B2C3D2，平行提取3次，計(jì)算總黃酮的提取率。結(jié)果見表4。經(jīng)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，根據(jù)最佳的提取條件所得的總黃酮的提取率均大于正交設(shè)計(jì)中總黃酮的提取率，因此本最佳工藝條件合

23、理，同時也表明此工藝具有較好的穩(wěn)定性。19、粗總黃酮的純化19.1、樹脂預(yù)處理用40目篩在水中篩選出大小合適、分布均勻的樹脂,將新的D101/AB-8大孔吸附樹脂用2倍體積的95%乙醇浸泡24h,并不時攪動，使樹脂充分溶脹。將樹脂置于玻璃色譜柱(30mmx500mm)中，用95%乙醇淋洗，檢測流出液，直至淋洗后流出液與水混合(1：5)后不再出現(xiàn)白色混濁，用大量重蒸餾水洗去乙醇至無醇味，用4倍體積5%的HC1溶液浸泡3-4h,用去離子水洗至中性，再加入大約4倍體積的5%的NaOH溶液浸泡3-4h，再用純化水洗至中性，備用。19.2、樹脂的吸附和解吸:將已預(yù)處理的D101大孔吸附樹脂裝入柱中，將按

24、最佳工藝提取的黃酮粗提液回收乙醇，調(diào)至濃度為05mg/mL上柱，以05mL/min流速吸附后用3倍柱床體積純化水洗至流出液無色,再用4倍量70%的乙醇解吸,得解吸液。193、產(chǎn)品的處理解吸液真空干燥至恒重,稱定質(zhì)量。按方法測定吸光度,根據(jù)回歸方程計(jì)算解吸液中總黃酮含量。按下式計(jì)算黃酮的純度：黃酮的純度()=W/W0 x100%。式中,W為解吸液中黃酮的含量(g),W0為解吸液干燥后的質(zhì)量(g)o大孔吸附樹脂對臘梅花總黃酮的吸附率的測定：稱取預(yù)處理好的樹脂20g于具塞磨口三角瓶中，準(zhǔn)確加入臘梅花黃酮類水溶液30ml,在室溫下置于振蕩器上振蕩24h,充分吸附后，測定濾液中剩余黃酮的濃度，按照下式計(jì)

25、算吸附率：吸附率()=(C1-C2)/C1X100式中,C1為吸附前濃度(mg/L);C2為吸附后剩余液的濃度(mg/L)。大孔吸附樹脂對臘梅花總黃酮的脫附率的測定：取上述得到的飽和樹脂,準(zhǔn)確加入50ml95%的乙醇，在室溫下置于振蕩器上振蕩24h，充分解脫后，測定濾液中黃酮的濃度，按照下式計(jì)算脫附率:脫附量=C3V1/m脫附率(%)=脫附量/吸附量X100式中,C3為解脫后溶液的濃度(mg/L);V1為解脫劑的體積(L);m為樹脂的質(zhì)量(g)。20、抗氧化活性試驗(yàn)20.1、清除羥自由基能力的測定在15mL試管中依次加入FeSO4,H2O2，搖勻，然后加入水楊酸，搖勻，于37C水浴中加熱15m

26、in,取出，510nm處測定吸光度A1,在加入一定濃度的樣品溶液1mL,搖勻，水浴繼續(xù)加熱15min后取出，510nm處測定吸光度A2。通過計(jì)算精制前后產(chǎn)品的自由基清除效果來對比精制的效果。清除率=(A1-A2)/A1x100%20.2、清除超氧陰離子自由基能力的測定PBS緩沖溶液的配制：取氯化鈉80g,氯化鉀02g,磷酸氫二鈉144g,磷酸二氫鉀0.24g溶解在800mL蒸餾水中，調(diào)整pH值至8.2，最后定容至1000mL。測定方法：在10mL容量瓶中加入5mLPBS緩沖液(pH=82),1mL的黃酮溶液,在45C恒溫水浴中放置20min后，加入1mL的25C預(yù)熱鄰苯三酚溶液(45mmol/

27、L)，迅速混勻，每隔60s在510nm處測定溶液的吸光度，并與空白溶液相比較，根據(jù)公式即可計(jì)算出被測物抑制O2-的累積作用能力。抑制率=(AA對照-AA樣品)/AA對照x100%203、清除自由基效能力的測定一DPPH法配置5種不同濃度的黃酮溶液,分別吸取樣液20mL,加入DPPH溶液(2x10-4mg/mL)20mL,搖勻、靜置30min,以70%乙醇為對照，在510nm處測定試液的吸光度A1。同時取待測樣液20mL與70%乙醇20mL進(jìn)行混合，以70%乙醇為對照，在510nm處測定試液的吸光度A2。最后，將DPPH溶液20mL與70%乙醇20mL混合，以70%乙醇為對照，在510nm處測定試液的吸光度A3。每組測定3次，求取平均值，按下述公式計(jì)算樣品的抑制率。抑制率=1-(A1-A2)/A3x100%精確稱取00394g的DPPH.,加入50mL的無水乙醇，充分振蕩，此時濃度為2mmol/L,吸取1mLDPPH溶液用無水乙醇定容到10mL,放入冰箱中待用。取02mmol/LDPPH.溶液25mL，用無水乙醇定容于10mL容量瓶中，室溫下置于30min,測定其在479nm處的吸光度A。取2mL經(jīng)純化后的蠶沙類黃酮提取液和02mmol/L的DPPH。