全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2015年修訂版)

1、-全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2015年修訂版) 附件1 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修訂版） 中國疾病預(yù)防控制中心 二一五年十二月 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 National Guideline for Detection of HIV/AIDS （2015年修訂版） 中國疾病預(yù)防控制中心 二一五年十二月 I 前 言 艾滋病在我國的流行已數(shù)十年，隨著感染者和臨床病人的不斷增加、感染人群的變化，艾滋病檢測工作量逐漸加大，對監(jiān)測和檢測的需求也不斷增加，承擔(dān)艾滋病檢測的實(shí)驗(yàn)室已遍及全國各級醫(yī)療、疾病預(yù)防控制

2、、采供血、婦幼保健機(jī)構(gòu)，出入境檢驗(yàn)檢疫、軍隊(duì)等各個(gè)系統(tǒng)。為了盡早發(fā)現(xiàn)HIV感染者和艾滋病病人，及早提供咨詢、治療，同時(shí)為適應(yīng)基層艾滋病檢測工作需求，在新的形勢下，根據(jù)關(guān)于艾滋病抗病毒治療管理工作的意見、中國預(yù)防與控制艾滋病中長期規(guī)劃（19982010年）、中國遏制與防治艾滋病十二五行動(dòng)計(jì)劃的通知（國辦發(fā)20124號(hào)）、“四免一關(guān)懷”等國家艾滋病防治重要方針政策和十三五防治工作重點(diǎn)，在廣泛征求各省、市疾病預(yù)防控制機(jī)構(gòu)和醫(yī)療機(jī)構(gòu)意見的基礎(chǔ)上，在中華人民共和國衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)艾滋病專家及省級專家的參與下，中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心對全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2009年版）進(jìn)行修改、

3、增補(bǔ)和完善，制定出全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范（2015年版）（以下簡稱規(guī)范），使其既能滿足目前艾滋病檢測工作的實(shí)際需求，又能體現(xiàn)檢測技術(shù)的發(fā)展。 本次規(guī)范修訂工作立足于我國目前檢測狀況，結(jié)合發(fā)達(dá)國家使用的指南，主要對以下幾個(gè)方面內(nèi)容進(jìn)行了修改、增補(bǔ)和完善：（1）完善了不同的檢測策略，并將其整合為獨(dú)立的一章；（2）增加了HIV-1新 II 發(fā)感染檢測一章；（3）新增補(bǔ)充試驗(yàn)概念,其內(nèi)容包括抗體確證試驗(yàn)（WB，RIBA/LIA等）和核酸試驗(yàn)（定性和定量試驗(yàn)）；（4）增加了第4代試劑（抗原抗體聯(lián)合檢測試劑）的檢測流程 ；(5)增加核酸檢測流程；(6)完善了檢測報(bào)告。將抗體篩查和復(fù)檢報(bào)告整合為 HIV抗體

4、篩查檢測報(bào)告，增加HIV-1核酸檢測報(bào)告和嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測報(bào)告，取消了流行病檢測HIV抗體檢測報(bào)告單、艾滋病病毒抗體檢測數(shù)和陽性人數(shù)統(tǒng)計(jì)報(bào)表、艾滋病職業(yè)暴露個(gè)案登記表和艾滋病防治工作人員職業(yè)暴露事故匯總表；（7） 取消實(shí)驗(yàn)室生物安全一章和艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量管理一章。 所有附表的檢測報(bào)告僅供使用實(shí)驗(yàn)室參考。 本規(guī)范由中國疾病預(yù)防控制中心批準(zhǔn),下發(fā)至全國艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室及有關(guān)單位。本規(guī)范將為國家、相關(guān)部委下發(fā)的艾滋病防治工作各項(xiàng)政策法規(guī)的有效實(shí)施提供強(qiáng)有力的技術(shù)支持，并具體指導(dǎo)艾滋病實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員開展日常工作。 本規(guī)范起草單位：中國疾病預(yù)防控制中心性病艾滋病預(yù)防控制中心。 本規(guī)范參加編

5、寫單位：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院、上海市疾病預(yù)防控制中心、中國醫(yī)科大學(xué)、北京出入境檢驗(yàn)檢疫局、云南省疾病預(yù)防控制中心、四川省疾病預(yù)防控制中心、浙江省疾病預(yù)防控制中心、河南省疾病預(yù)防控制中心、北京市紅十字血液中心、衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心、江蘇省疾病預(yù)防控制中心、陜西省疾病預(yù)防控制中心、安徽省疾病預(yù)防控制中心、首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院、北京市疾病預(yù)防 III 控制中心。 本規(guī)范編寫組人員：蔣巖、汪寧、李敬云、鐘平、尚紅、邵一鳴、肖瑤、朱紅、邢文革、姚均、潘品良、邱茂鋒、馬艷玲、梁姝、郭志宏、王哲、葛紅衛(wèi)、王盈、李金明、徐曉琴、常文輝、吳建軍、張福杰、吳昊、蘇雪麗、廖玲潔。 本規(guī)范參加編寫主要國

6、際機(jī)構(gòu)：世界衛(wèi)生組織（Po-lin CHAN、張嵐）。美國疾病預(yù)防控制中心GAP項(xiàng)目（ Colin Shepard、郝玲、齊明山）。 本規(guī)范編寫工作聯(lián)系人：肖瑤。 本規(guī)范自發(fā)布之日起實(shí)施，同時(shí)終止全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范(2009年版)。 本規(guī)范適用于全國艾滋病檢測實(shí)驗(yàn)室。 本規(guī)范解釋權(quán)屬于中國疾病預(yù)防控制中心。 致謝：感謝蓋茨基金會(huì)在規(guī)范修訂過程中給予技術(shù)和人力等方面的支持。 IV 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 目 錄 第一章 樣品的采集和處理 . 6 1 范圍 . 6 2 規(guī)范性文件引用 . 6 3 樣品種類及相應(yīng)的用途 . 7 4 操作步驟 . 7 4.1 采樣前準(zhǔn)備. 7 4.2 樣品的采集和

7、處理. 8 4.3 樣品的保存. 10 4.4 樣品的運(yùn)送. 11 4.5 樣品的接收. 12 第二章 HIV抗體檢測 . 13 1 范圍 . 13 2 規(guī)范性文件引用 . 13 3 HIV抗體檢測實(shí)驗(yàn)室要求 . 13 4 HIV抗體檢測的目的和要點(diǎn) . 14 4.1 HIV抗體檢測的目的. 14 4.2 HIV抗體檢測的要點(diǎn). 14 5 常規(guī)HIV抗體檢測方法 . 15 5.1 試劑和樣品. 15 5.2 方法. 15 6 結(jié)果報(bào)告 . 17 6.1 篩查報(bào)告. 17 6.2 WB及 RIBA/LIA報(bào)告. 18 7 質(zhì)量控制 . 18 7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制. 18 7

8、.2 快速法抗體檢測質(zhì)控. 22 第三章 HIV-1新發(fā)感染檢測 . 24 1 范圍 . 24 2 規(guī)范性文件引用 . 24 3 新發(fā)感染檢測實(shí)驗(yàn)室要求 . 24 4 目的 . 24 1 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 5 新發(fā)感染檢測方法 . 25 5.1 方法學(xué)原理. 25 5.2 方法. 25 5.3 樣品的入選標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn). 26 5.4 結(jié)果處理和解釋. 27 5.5 數(shù)據(jù)分析. 28 6質(zhì)量控制 . 30 6.1 人員培訓(xùn). 30 6.2 樣品質(zhì)控. 30 6.3 試劑質(zhì)控. 31 6.4 實(shí)驗(yàn)過程質(zhì)控. 31 第四章 HIV-1抗原檢測 . 32 1 范圍 . 32 2 規(guī)范性文件引用

9、 . 32 3 HIV1P24抗原檢測的意義 . 32 4 實(shí)驗(yàn)室要求 . 32 5 檢測方法及程序 . 33 5.1 試劑. 33 5.2 樣品. 33 5.3 定性檢測. 33 5.4 定量檢測. 35 5.5 結(jié)果報(bào)告和解釋. 35 6 質(zhì)量控制 . 36 6.1 定性檢測. 36 6.2 定量檢測. 37 第五章 HIV核酸檢測 . 38 1 范圍 . 38 2 規(guī)范性文件引用 . 38 3 核酸檢測的意義 . 39 3.1 HIV-1感染診斷. 39 3.2 治療效果監(jiān)測. 40 3.3 病程監(jiān)控及預(yù)測. 40 3.4 耐藥性監(jiān)測. 40 4 HIV核酸檢測實(shí)驗(yàn)室要求 . 41 2

10、全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.1 實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)及工作基本原則. 41 4.2 實(shí)驗(yàn)室人員和要求. 41 4.3 實(shí)驗(yàn)室生物安全. 41 5 HIV-1核酸檢測方法及程序 . 41 5.1 HIV-1核酸定性檢測. 41 5.2 HIV核酸定量檢測. 43 5.3 集合核酸定性檢測 . 45 5.4 HIV核酸即時(shí)檢測 . 47 6 質(zhì)量保證和質(zhì)量控制 . 47 6.1 實(shí)驗(yàn)室分區(qū)和環(huán)境. 47 6.2 儀器設(shè)備質(zhì)量控制. 48 6.3 檢測過程質(zhì)量控制. 48 6.4 外部質(zhì)量控制. 48 第六章 艾滋病病毒感染實(shí)驗(yàn)室檢測策略 . 49 1 范圍 . 49 2 規(guī)范性文件引用 . 49 3 疫情

11、監(jiān)測相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報(bào)告 . 49 3.1 HIV匿名無關(guān)聯(lián)檢測流程. 49 3.2 HIV匿名關(guān)聯(lián)檢測流程. 50 4 臨床診斷相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報(bào)告 . 50 4.1 使用抗體檢測試劑的檢測流程. 50 4.2 使用抗原抗體檢測試劑的檢測流程. 51 4.3 補(bǔ)充試驗(yàn)檢測策略. 53 5 血液篩查相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報(bào)告 . 58 6 嬰兒HIV-1感染早期診斷相關(guān)的檢測策略及結(jié)果報(bào)告 . 61 6.1 核酸檢測策略（RNA/DNA）. 61 6.2 抗體檢測策略及結(jié)果報(bào)告. 63 第七章 HIV-1基因型耐藥檢測 . 65 1 范圍 . 65 2 規(guī)范性文件引用 . 65 3 HI

12、V-1基因型耐藥檢測的意義 . 66 3.1 群體耐藥監(jiān)測. 66 3.2 個(gè)體耐藥檢測. 66 4 HIV-1基因型耐藥檢測實(shí)驗(yàn)室要求 . 67 3 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.1 實(shí)驗(yàn)室功能分區(qū). 67 4.2 實(shí)驗(yàn)室人員和要求. 67 4.3 設(shè)施和設(shè)備. 68 5 HIV-1基因型耐藥檢測方法及程序 . 68 5.1 樣品. 68 5.2 檢測原理. 68 5.3 檢測方法. 68 5.4 耐藥分析. 69 6 質(zhì)量保證與質(zhì)量控制 . 70 6.1 室內(nèi)質(zhì)控. 70 6.2 外部質(zhì)控. 71 第八章 CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測 . 72 1 范圍 . 72 2 規(guī)范性文件引用 .

13、 72 3 CD4+ 和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測的意義 . 73 3.1 HIV感染臨床分期. 73 3.2 HIV感染兒童免疫抑制分級和治療輔助指標(biāo). 73 3.3 疾病進(jìn)展監(jiān)測. 73 3.4 機(jī)會(huì)性感染的風(fēng)險(xiǎn)評估. 73 3.5 抗病毒治療適應(yīng)癥選擇及療效評價(jià). 73 3.6 CD8+T淋巴細(xì)胞為抑制性/細(xì)胞毒性T細(xì)胞. 74 4 CD4+ 和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測實(shí)驗(yàn)室要求 . 74 4.1 人員. 74 4.2 功能分區(qū). 74 4.3 設(shè)施和設(shè)備. 74 5 常規(guī)CD4+ 和CD8+T淋巴細(xì)胞檢測的方法和程序 . 75 5.1 樣品采集、運(yùn)輸和接收. 75 5.2 方法. 76 5.

14、3 試劑. 78 5.4 實(shí)驗(yàn)資料的記錄. 78 5.5 結(jié)果報(bào)告. 78 6 質(zhì)量控制 . 79 第九章 HIV-1的分離培養(yǎng) . 81 1 范圍 . 81 4 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 2 規(guī)范性文件引用 . 81 3 HIV-1分離的意義 . 81 3.1 HIV抗體不確定或HIV-1陽性母親所生嬰兒的鑒別診斷及診斷. 81 3.2 HIV表型耐藥檢測及其他HIV生物學(xué)特征的研究。. 81 3.3 HIV 感染的輔助診斷HIV-1感染窗口期。. 81 4 實(shí)驗(yàn)室要求 . 81 4.1 實(shí)驗(yàn)室. 81 4.2 設(shè)備. 81 4.3 材料. 81 5 HIV-1分離的方法及程序 . 82 5.

15、1 樣本. 82 5.2 靶細(xì)胞制備. 82 5.3 建立共培養(yǎng). 82 5.4 監(jiān)測病毒生長. 82 5.5 病毒鑒定。. 82 5.6 判定結(jié)果和解釋. 82 6 質(zhì)量控制 . 83 附表1 HIV抗體篩查檢測報(bào)告 . 84 附表2 HIV抗體確證檢測報(bào)告 . 85 附表3 HIV-1核酸檢測報(bào)告 . 86 附表4 HIV抗體確證檢測報(bào)告（特定條件） . 87 附表5 CD4+T淋巴細(xì)胞檢測報(bào)告 . 88 附表6 HIV-1耐藥基因型檢測報(bào)告 . 89 附表7 嬰兒艾滋病感染早期診斷檢測報(bào)告 . 90 5 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 第一章 樣品的采集和處理 1 范圍 本章規(guī)定了用于人免疫缺陷

16、病毒（HIV）檢測的全血、血清、血漿、細(xì)胞、口腔黏膜滲出液、尿液以及濾紙干血斑（DBS）樣品的采集和處理方法，適用于HIV抗體、抗原、核酸、基因亞型、耐藥檢測、CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)測定及HIV分離培養(yǎng)。 2 規(guī)范性文件引用 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn) WS -293有效版本。 艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細(xì)胞檢測質(zhì)量及保證指南（中國疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。 HIV-1病毒載量測定及質(zhì)量保證指南（中國疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。 HIV-1基因型耐藥檢測及質(zhì)量保證指南，（中國疾病預(yù)防控制中心，2013年版）。 Consolid

17、ated Guidelines on HIV Testing Services. WHO July 2015. 可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定，衛(wèi)生部第45號(hào)令,2006年2月1日。 6 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 3 樣品種類及相應(yīng)的用途 3.1 全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液以及干血斑樣品可用于HIV抗體檢測。 3.2 全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液可用于HIV抗原檢測。 3.3 抗凝全血可用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測定。 3.4 血漿、DBS可用于HIV-1病毒載量、基因型、耐藥檢測。 3.5 淋巴細(xì)胞富集液、外周血單核淋巴細(xì)胞（PBMC）及全血可

18、用于HIV核酸定性與定量、基因型檢測和HIV-1分離培養(yǎng)。 4 操作步驟 4.1 采樣前準(zhǔn)備 根據(jù)檢測項(xiàng)目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按照臨床采血技術(shù)要求操作，遵守生物安全相關(guān)要求。檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間及唯一編碼。采集血液樣本宜選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受檢者坐（臥）于合適的位置，準(zhǔn)備采血用具、皮膚消毒用品、采血管及試管架、硬質(zhì)廢棄物容器等。口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)使用試劑盒提供的專用采樣工具，尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管。 4.1.1 樣

19、品的編碼和記錄 4.1.2 應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP），規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼（編號(hào)），保證其唯一性。 4.1.3 采血前，先對試管或?yàn)V紙進(jìn)行標(biāo)記，核對后編碼。要將標(biāo)簽貼在 7 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 試管的側(cè)面，推薦使用預(yù)先印制好的、專門用于冷凍儲(chǔ)存的耐低溫標(biāo)簽。干血斑濾紙應(yīng)使用具有資質(zhì)的產(chǎn)品。 4.1.4 口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)采集口腔滲出液,不是唾液。 4.1.5 尿液樣本準(zhǔn)備好帶有唯一編碼的采尿管，并保留唯一編碼。 4.1.6 應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時(shí)錄入電腦保存。 4.2 樣品的采集和處理 4.2.1 血液 4.2.1.1 抗凝全

20、血：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，輕輕顛倒混勻68次，備用。 4.2.1.2 末梢全血：消毒局部皮膚（成人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或食指。1歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用。 4.2.1.3 血漿：將采集的抗凝全血15003000r /min離心15分鐘，上層即為血漿，吸出置于合適的容器中，備用。 4.2.1.4 血清：根據(jù)需要，用不含抗凝劑的真空采血管抽取510ml靜脈血，或一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至無抗

21、凝劑的試管中，室溫下自然放置12小時(shí)，待血液凝固、血塊收縮后再用15003000r/min離心15分鐘，吸出血清，置于合適的容器中，備用。 4.2.1.5 淋巴細(xì)胞富集液：將采集的抗凝全血15003000r/min離心15分鐘，吸取血漿層下的淋巴細(xì)胞富集液，置于合適的容器中，備用。 8 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.2.1.6 PBMC：使用淋巴細(xì)胞分離液，進(jìn)行密度梯度離心，吸出PBMC層，置于合適的容器中，備用。 4.2.1.7 抗凝劑的選擇：根據(jù)檢測要求選用適當(dāng)?shù)目鼓齽鏑D4+和CD8+T淋巴細(xì)胞測定可選用EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉；HIV-1病毒分離、核酸定性/定量檢測可選用

22、EDTA鈉鹽或鉀鹽或枸櫞酸鈉。 4.2.1.8 樣品采集后處理、保存、運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和條件，因不同的檢測項(xiàng)目而異，應(yīng)參見不同檢測項(xiàng)目要求。 4.2.1.9 采血完成后的穿刺針頭必須丟棄于放置尖銳危險(xiǎn)品容器內(nèi)，妥善處理，防止發(fā)生職業(yè)暴露。 4.2.2 濾紙干血斑 4.2.2.1 根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑。 4.2.2.2 用移液器從樣品管中吸取100L抗凝全血（或血漿），對準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處。 4.2.2.3 根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個(gè)印圈上

23、滴加樣品。 4.2.2.4 于室溫下自然干燥至少4小時(shí)（潮濕氣候下至少干燥24小時(shí)），不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸。 4.2.2.5 血斑充分干燥后，將其放入密封袋中，每張干血斑單獨(dú)保存，避免血斑之間的相互污染，同時(shí)放入干燥劑及濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆谩?4.2.3 尿液和口腔黏膜滲出液 9 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.2.3.1 尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定。尿液樣品可采集隨機(jī)尿，女性經(jīng)期應(yīng)取中段尿。 4.2.3.2 口腔黏膜滲出液：使用試劑盒提供的容器收集樣品。存放時(shí)間和是否凍存以試劑盒說明書為準(zhǔn)?？谇火つB出液應(yīng)采集口腔滲出液,不是唾液。 4.3 樣品的保存 4.

24、3.1 用于抗體和抗原檢測的血清或血漿樣品，短期（1周）內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于28，一周以上應(yīng)存放于-20以下。 4.3.2 用于核酸檢測的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測的可存放于4，3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于-20以下。3個(gè)月以上應(yīng)置于-70以下保存。 4.3.3 口腔黏膜滲出液樣品應(yīng)即刻使用，需要保存應(yīng)以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。 4.3.4 尿液樣品，使用專用采尿管，室溫下可保存2周，一年之內(nèi)存放宜在28。長期保存（一年以上）的樣本凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)。 4.3.5 用于CD4+T淋巴細(xì)胞檢測的全血樣品，室溫保存，時(shí)間不超過24小時(shí)。如果用CD45設(shè)門，樣品保存不超過72小時(shí)。 4.3

25、.6 篩查陽性樣品應(yīng)及時(shí)進(jìn)行補(bǔ)充試驗(yàn)，篩查陰性樣品，可根據(jù)具體需要決定保存時(shí)間，建議至少保存1個(gè)月。特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間。補(bǔ)充試驗(yàn)陽性樣品按照國家生物樣品管理的有關(guān)規(guī)定執(zhí)行。 10 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.4 樣品的運(yùn)送 4.4.1 全血、血漿的運(yùn)送應(yīng)符合生物安全要求，參照可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定(衛(wèi)生部第45號(hào)令,2006年2月1日執(zhí)行)。 4.4.2 血液樣品運(yùn)送時(shí)應(yīng)采用三層容器對樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間。 4.4.2.

26、1 第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類和采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎。 4.4.2.2 第二層容器：容納并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、容器的材料要易于消毒處理。 4.4.2.3 第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時(shí)要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”等字樣，還應(yīng)易于消毒。 4.4.2.4 用于抗體檢測的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送用于CD4+和CD8+T淋巴細(xì)

27、胞測定的樣品應(yīng)在室溫下（1825）運(yùn)送。用于病毒載量檢測的樣品應(yīng)在-20以下運(yùn)輸。DBS和尿液樣品應(yīng)在室溫下（1825）運(yùn)送，可通過郵寄方式運(yùn)送。 4.4.2.5 運(yùn)送樣品必須有記錄。 11 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.5 樣品的接收 4.5.1 樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的工作人員打開，打開包裹時(shí)應(yīng)穿戴防護(hù)衣、戴口罩和防護(hù)眼鏡，在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。 4.5.2 核對樣品與送檢單，檢查樣品管有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對樣品管和盛器消毒，同時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和上一級實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員。 4.5.3 檢查樣品的狀況，記

28、錄血液樣品有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況。記錄干血斑和尿液樣品包裝是否完整，如果污染過重或者不符合接收要求，應(yīng)將樣品安全廢棄。并立即將樣品情況通知送樣人，要求重新采集樣品。 4.5.4 接收樣品時(shí)應(yīng)填寫樣品接收單。 12 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 第二章 HIV抗體檢測 1 范圍 本章規(guī)定了HIV抗體的檢測方法、結(jié)果報(bào)告及質(zhì)量控制。適用于各級各類醫(yī)療、疾病預(yù)防控制、檢驗(yàn)檢疫、采供血及衛(wèi)生保健機(jī)構(gòu)?？勺鳛閷IV感染者診斷和監(jiān)測的實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。 2 規(guī)范性文件引用 艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)（中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，WS293-有效版本）。 Consolidated Gui

29、delines on HIV Testing Services. WHO July 2015 Statement from the Surveillance and Survey Working Group and the Laboratory Working Group to the Office of the Global AIDS Coordinator.26 Nov.2006. Guidelines for using HIV testing technologies in surveillance. UNAIDS/WHO.2009. 艾滋病病毒抗體快速檢測技術(shù)手冊（中國疾病預(yù)防控制中

30、心，2011年版。 3 HIV抗體檢測實(shí)驗(yàn)室要求 應(yīng)符合國家對實(shí)驗(yàn)室生物安全的有關(guān)要求。 13 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制按本規(guī)范相關(guān)章節(jié)規(guī)定執(zhí)行。 4 HIV抗體檢測的目的和要點(diǎn) 4.1 HIV抗體檢測的目的 4.1.1 HIV抗體檢測可用于診斷、血液篩查、監(jiān)測等。 4.1.2 以診斷為目的的檢測是為了確定個(gè)體HIV感染狀況，包括臨床檢測、自愿咨詢檢測、根據(jù)特殊需要進(jìn)行的體檢等。 4.1.3 以血液篩查為目的的檢測是為了防止輸血傳播HIV，包括獻(xiàn)血員篩查和原料血漿篩查。 4.1.4 以監(jiān)測為目的的檢測是為了解不同人群HIV感染率及其變化趨勢，包括各類高危人群、重點(diǎn)人群和一般人群

31、。 4.2 HIV抗體檢測的要點(diǎn) 4.2.1 根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略。 4.2.2 嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）。 4.2.3 結(jié)果判定以試劑盒說明書為標(biāo)準(zhǔn)。 4.2.4 篩查試驗(yàn)有反應(yīng)，須作補(bǔ)充試驗(yàn)。 補(bǔ)充試驗(yàn)是通過檢測樣本中是否存在艾滋病病毒抗體、抗原或者核酸而確定艾滋病病毒感染的檢測方法。補(bǔ)充試驗(yàn)包括抗體確證試驗(yàn)（免疫印跡試驗(yàn)，條帶/線性免疫試驗(yàn)，特定條件*下的替代檢測，免疫層析或免疫滲濾試驗(yàn)）和核酸試驗(yàn)（核酸定性和核酸定量試驗(yàn)）。替代檢測包括三種酶聯(lián)免疫試驗(yàn)、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)免疫加快速試驗(yàn)* * 特定條件：高流行地區(qū)（流行率大于5%）、高危人群（如男男同性戀，吸毒人群

32、）、三種試劑均經(jīng)過使用地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室評價(jià)。 4.2.5 篩查試驗(yàn)無反應(yīng)，不應(yīng)做補(bǔ)充試驗(yàn)。 14 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 4.2.6 對篩查及補(bǔ)充試驗(yàn)對象均應(yīng)做好咨詢工作。 5 常規(guī)HIV抗體檢測方法 5.1 試劑和樣品 必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理總局注冊批準(zhǔn)、在有效期內(nèi)的試劑。推薦使用臨床質(zhì)量評估敏感性和特異性高的方法及試劑。 樣品可采用血清、血漿、全血、濾紙干血斑、口腔黏膜滲出液和尿液。 5.2方法 5.2.1 篩查方法 5.2.1.1 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 這類試驗(yàn)可使用血液（包含血清、血漿和濾紙干血斑）、尿液樣品，ELISA多為HIV抗體檢測試劑。HIV抗原抗體聯(lián)合檢測試劑可

33、同時(shí)檢測血液中HIV-1P24抗原和HIV-1/2抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加底物顯色，用酶標(biāo)儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 5.2.1.2 化學(xué)發(fā)光或免疫熒光試驗(yàn)（CIA/IFA） 這類試驗(yàn)采用發(fā)光或熒光底物，可使用血液(包含血清和血漿)、尿液樣品，既可檢測抗體，也可聯(lián)合檢測抗原抗體。HIV抗原/抗體包被于固相載體，加入待檢樣品和酶或熒光標(biāo)記的HIV抗原/抗體，加發(fā)光或熒光底物，用發(fā)光或熒光儀測定結(jié)果。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照必須符合試劑盒規(guī)定。 5.2.1.3 快速檢測（RT）及其它試驗(yàn) 15 全國艾滋病檢測技術(shù)

34、規(guī)范 這類試驗(yàn)可使用血液、口腔黏膜滲出液，操作簡便快速，適用于應(yīng)急檢測、門診急診檢測、VCT及檢測點(diǎn)等。一般可在1030分鐘內(nèi)得出結(jié)果。 明膠顆粒凝集試驗(yàn)（PA）：是HIV抗體檢測的一種簡便方法。將HIV抗原致敏的明膠顆粒，與待檢樣品作用。當(dāng)待檢樣品含有HIV抗體時(shí)，明膠顆粒與抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，根據(jù)凝集情況判讀結(jié)果。PA試劑有兩種:同時(shí)檢測HIV-1和HIV-2抗體以及分別檢測HIV-1和HIV-2抗體。有效試驗(yàn)的陰性和陽性對照質(zhì)控，需符合試劑盒的規(guī)定。 免疫滲濾試驗(yàn)：斑點(diǎn)ELISA和斑點(diǎn)免疫膠體金（或膠體硒）快速試驗(yàn)：均以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原點(diǎn)狀或線狀固定在膜上，加待檢樣品，利用微孔

35、濾膜的可濾過性，使抗原抗體反應(yīng)。陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色斑點(diǎn)或條帶。反應(yīng)時(shí)間在10分鐘以內(nèi)。有效試驗(yàn)的質(zhì)控點(diǎn)必須顯色。 免疫層析試驗(yàn)：以硝酸纖維膜為載體，HIV抗原線狀固定在膜上，待檢樣品沿著固相載體遷移，陽性結(jié)果在膜上抗原部位顯示出有色條帶。有效試驗(yàn)的質(zhì)控帶必須顯色。反應(yīng)時(shí)間在30分鐘以內(nèi)。 5.2.2 抗體確證試驗(yàn) 5.2.2.1 免疫印跡試驗(yàn)（WB） WB可使用血清、血漿和濾紙干血斑。WB采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。采用聚丙烯酰胺凝膠電泳把分子量大小不等的HIV-1蛋白分離開來，然后再把這些分離的不同蛋白帶轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上（或PVDF膜）。將此膜

36、切割成條狀，每一膜條上均含有經(jīng)電泳分離 16 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 過的HIV抗原。待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋后，加至硝酸纖維素膜上，恒溫震蕩，使其充分接觸反應(yīng)，血清中若含有HIV抗體，就會(huì)與膜條上抗原帶相結(jié)合。加入抗人-IgG酶結(jié)合物和底物后，根據(jù)出現(xiàn)條帶情況, 按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 5.2.2.2條帶/線性免疫試驗(yàn)（RIBA/LIA） RIBA/LIA采用間接法檢測樣品中的抗HIV-1/HIV-2特異性抗體。試劑盒的膜條上包被有HIV-1/HIV-2不同的重組抗原片段，加入待測樣品后，其中的相應(yīng)抗體與抗原發(fā)生特異性的免疫反應(yīng)；隨后加入抗人IgG（堿性磷酸酶

37、標(biāo)記）與HIV特異性IgG抗體相結(jié)合；加入顯色底物后，在堿性磷酸酶的催化下，特異性抗體的結(jié)合部位出現(xiàn)肉眼可見的條帶, 按照試劑盒說明書判定標(biāo)準(zhǔn)，判斷待測樣品為陽性、陰性或不確定。 5.2.2.3 其他方法： 可用于確證的特定條件下的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)，免疫層析和免疫滲濾試驗(yàn)。 6 結(jié)果報(bào)告 6.1 篩查報(bào)告 HIV抗體篩查試驗(yàn)報(bào)告使用附表1（HIV抗體篩查檢測報(bào)告）。篩查試驗(yàn)無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”；有反應(yīng)必須進(jìn)行復(fù)檢，復(fù)檢兩次檢測均無反應(yīng)報(bào)告為“HIV抗體陰性”，復(fù)檢檢測均有反應(yīng)或一個(gè)有反應(yīng)一個(gè)無反應(yīng)需進(jìn)行“補(bǔ)充試驗(yàn)”；報(bào)告為“HIV感染待確定”，不能出具陽性報(bào)

38、告。 17 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 HIV抗體篩查報(bào)告需由一名檢驗(yàn)人員和一名審核者簽字。 6.2 確證報(bào)告 6.2.1 WB及 RIBA/LIA報(bào)告 HIV抗體WB及 RIBA/LIA試驗(yàn)結(jié)果報(bào)告使用附表2（HIV抗體確證檢測報(bào)告）。 （1）符合HIV-1抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-1抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報(bào)告。符合HIV-2抗體陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV-2抗體陽性”，并按規(guī)定做好檢測后咨詢和疫情報(bào)告。 （2）符合HIV抗體陰性判斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體陰性”。如疑似“窗口期”感染，建議進(jìn)一步做HIV核酸檢測或2-4周后隨訪，盡早明確診斷。 （3）符合HIV抗體不確定判

39、斷標(biāo)準(zhǔn)，報(bào)告“HIV抗體不確定”，在備注中應(yīng)注明“2-4周后復(fù)檢”或盡快做核酸檢測。 （4） HIV抗體確證檢測報(bào)告應(yīng)在收到樣品后的7個(gè)工作日內(nèi)發(fā)出。 6.2.2 特定條件的用于確證的三種酶聯(lián)免疫、三種快速試驗(yàn)或酶聯(lián)加快速試驗(yàn)報(bào)告。見附表4。 7 質(zhì)量控制 7.1 酶免或發(fā)光法抗體檢測的室內(nèi)質(zhì)量控制 7.1.1 試劑盒內(nèi)部對照 試劑盒內(nèi)部對照質(zhì)控品即為試劑盒內(nèi)提供的陽性和陰性對照。試劑盒內(nèi)部對照用于判斷每次實(shí)驗(yàn)的有效性，不能作為室內(nèi)質(zhì)控品使用。每 18 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 一次檢測臨床樣品時(shí)，必須有試劑盒內(nèi)部對照，而且只能在同批號(hào)的試劑盒中使用。如內(nèi)部對照結(jié)果無效，必須重新試驗(yàn)。 7.1.

40、2 室內(nèi)質(zhì)控品 為非試劑盒組份的外部質(zhì)控品，是為了監(jiān)控檢測的重復(fù)性而設(shè)置的，質(zhì)控品定值必須為弱陽性。外部質(zhì)控品的作用是判斷該批臨床樣品檢測的可信性。因此，每次實(shí)驗(yàn)必須包含室內(nèi)質(zhì)控品，出現(xiàn)失控時(shí)，必須重新試驗(yàn)。室內(nèi)質(zhì)控品可以購買或?qū)嶒?yàn)室自行制備。 質(zhì)控品應(yīng)穩(wěn)定、無菌、且不含有影響試劑反應(yīng)的防腐劑。 7.1.3 Levey-Jennings質(zhì)控圖 7.1.3.1 質(zhì)控圖參數(shù) 外部質(zhì)控品的均值和標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)建立在實(shí)驗(yàn)室常規(guī)使用方法對外部質(zhì)控品重復(fù)測定的基礎(chǔ)上。一般采用在不同批次檢測取得至少20個(gè)數(shù)據(jù)；如果僅做少量批次的檢測，也至少做5個(gè)批次的檢測，每個(gè)批次中不少于4個(gè)質(zhì)控血清測定結(jié)果，以建立一個(gè)臨時(shí)性的

41、均值和標(biāo)準(zhǔn)差，當(dāng)達(dá)到20批次數(shù)據(jù)后，替代臨時(shí)性的均值和標(biāo)準(zhǔn)差。 （1）算術(shù)平均值（x）：代表一組質(zhì)控品測定S/CO值的均值。為了統(tǒng)計(jì)學(xué)上有顯著性意義，應(yīng)該采用至少20次（天）測得的外部對照質(zhì)控品的S/CO值計(jì)算平均值。 （2）標(biāo)準(zhǔn)差（s）：是描述樣品與均數(shù)之間離散程度的一個(gè)指標(biāo)，是與質(zhì)控品S/CO值均值有關(guān)的預(yù)期范圍。一組S/CO值的標(biāo)準(zhǔn)差以s表示。 （3）變異系數(shù)（cv）：是反映各次S/CO值相對于均值離散程度的一個(gè)指標(biāo)，可以用來衡量檢測的重復(fù)性或精密度。 19 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 （4）控制限：由實(shí)驗(yàn)室根據(jù)對外部質(zhì)控品檢測結(jié)果的均值和標(biāo)準(zhǔn)差來確定。例如，按照12S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部

42、質(zhì)控品S/CO均值加減2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差；按照13S質(zhì)控規(guī)則，控制限為外部質(zhì)控品S/CO均值加減3個(gè)標(biāo) 準(zhǔn)差。 7.1.3.2 質(zhì)控規(guī)則 實(shí)驗(yàn)室在報(bào)告結(jié)果之前必須評價(jià)質(zhì)控?cái)?shù)據(jù)，可通過圖形記錄的檢查或由計(jì)算機(jī)審核結(jié)果來決定。目前有許多質(zhì)控規(guī)則，常用的是12S和13S規(guī)則。 （1）告警（12S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+2s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于告警狀態(tài)，應(yīng)予注意，是否可以繼續(xù)檢測需要進(jìn)一步觀察。若將12S做失控標(biāo)準(zhǔn)，有較高的假失控概率，所以一般不采用。 （2）失控（13S）：當(dāng)外部質(zhì)控品的S/CO值超出x+3s范圍時(shí)，系統(tǒng)處于失控狀態(tài)，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不能被接受，可能是系統(tǒng)誤差、隨機(jī)誤差或外部質(zhì)控品 穩(wěn)

43、定性下降所致。 7.1.3.3 質(zhì)控圖的分析及失控處理 實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立質(zhì)控圖分析及失控情況處理的程序。 當(dāng)出現(xiàn)失控時(shí)， 必須找出發(fā)生問題的原因，找出解除問題的方法，并消除原因。 7.1.4 室內(nèi)質(zhì)控其他方式“即刻法”質(zhì)控 “即刻法”質(zhì)控方法是在對同一批外部質(zhì)控品連續(xù)測定3次后，即可對第3次以后的檢驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)控。具體計(jì)算方法如下： 7.1.4.1 將質(zhì)控品的測定值從小到大排列：x1，x2，x3?xn（x1為最小值，xn為最大值）。 20 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 7.1.4.2 計(jì)算x和s。 7.1.4.3 計(jì)算SI上限值 和SI下限值。 X最大值-x SI上限= S x-X 最小值 S SI下限= 7.1.4.4 將SI上限、SI下限與SI值表（表1）中的數(shù)字比較。 表1 SI值表 （1）當(dāng)SI 上限 和SI 下限 n3s值時(shí)說明該值已在3s范圍之外， 22 全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范 紙破損或污染；未達(dá)到質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn) （陽性/陰