體外診斷試劑臨床試驗※仁濟-糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）-臨床試驗報告

1、糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）臨床試驗報告申辦者：XX醫(yī)療科技（中國）有限公司臨床試驗報告產(chǎn)品通用名稱：糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）試驗開始日期：2016年4月試驗完成日期：2016年5月研究單位：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院主要研究者：（簽名）試驗機構：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院（蓋章）統(tǒng)計單位：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院（蓋章）統(tǒng)計學負責人：（簽名）申辦單位：XX醫(yī)療科技（中國）有限公司（蓋章）申辦單位的聯(lián)系人及聯(lián)系方式：報告日期：2016年5月原始資料保存地點：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院目錄 TOC o 1-1 h z u HYPERLINK l _Toc451957129

2、臨床試驗報告 PAGEREF _Toc451957129 h 1 HYPERLINK l _Toc451957130 研究報告摘要 PAGEREF _Toc451957130 h 3 HYPERLINK l _Toc451957132 一、臨床試驗背景 PAGEREF _Toc451957132 h 5 HYPERLINK l _Toc451957133 二、產(chǎn)品的檢測原理及方法 PAGEREF _Toc451957133 h 5 HYPERLINK l _Toc451957134 三、產(chǎn)品的預期用途 PAGEREF _Toc451957134 h 6 HYPERLINK l _Toc4519

3、57135 四、臨床試驗目的和內(nèi)容 PAGEREF _Toc451957135 h 7 HYPERLINK l _Toc451957136 五、試驗總體說明 PAGEREF _Toc451957136 h 7 HYPERLINK l _Toc451957137 六臨床試驗結果及統(tǒng)計 PAGEREF _Toc451957137 h 10 HYPERLINK l _Toc451957138 七. 結論 PAGEREF _Toc451957138 h 13 HYPERLINK l _Toc451957139 附件一：樣本信息記錄表 PAGEREF _Toc451957139 h 14 HYPERLI

4、NK l _Toc451957140 附件二：試驗數(shù)據(jù)記錄表 PAGEREF _Toc451957140 h 14 HYPERLINK l _Toc451957141 附件三：相關試劑盒使用說明書及信息 PAGEREF _Toc451957141 h 14 HYPERLINK l _Toc451957142 附件四：臨床試驗主要研究人員的簡歷信息 PAGEREF _Toc451957142 h 14研究報告摘要研究單位：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院產(chǎn)品名稱：糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）臨床試驗類別：體外診斷試劑注冊申請的臨床驗證主要研究者：李敏研究目的：驗證考核試劑同參比試劑對于臨床樣本的檢

5、測一致性樣本數(shù)量：105例（考核試劑與參比試劑相關性）51例（血清血漿相關性）共計156例入選標準：樣本性別不限，年齡不限，隨機入組；醫(yī)院已經(jīng)檢測結束的正常及異常水平的該項目樣本或相關項目樣本，并有確切臨床診斷信息；正常沒有相關疾病的人群的樣本。排除標準：嚴重溶血、脂血、黃疸患者的樣本；經(jīng)過多次反復凍融的（3次以上）樣本；樣本信息不全或樣本量不足以完成全部試驗及存留的樣本；臨床試驗時候認為不能入組的樣本，應予以排除。試驗后如有樣本因不符合要求被剔除，應予以說明；如剔除樣本后樣本數(shù)量不能滿足試驗要求，應予以補充樣本，以達到數(shù)量要求。評價指標：雙變量相關性大于0.95。兩種試劑檢測的結果做散點圖，

6、分析其線性相關系數(shù)，r20.95。試驗結果的偏差95%在偏差均值2SD范圍內(nèi)。Bland-Altman偏倚圖顯示若95%以上的差值在1.96SD范圍內(nèi)，可視為結果具有一致性。分析和結論：分析：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院一共入組156例，其中105例樣本在日立7600全自動生化分析儀（使用考核試劑以及參比試劑）上測定血清中濃度，在日立7600全自動生化分析儀上測定同一樣本中血清與血漿的濃度共51例。其中#215檢測血清血漿結果均為負值，考慮為檢測儀器誤差所致，因此剔除此樣本，實際進行統(tǒng)計的樣本數(shù)為50例。其中實驗結果顯示考核試劑同參比試劑的檢測結果一致性非常好，其定量結果總結如下：血清樣本：

7、樣本數(shù)數(shù)量105雙變量相關系數(shù)（R）0.9884線性相關系數(shù)（R2）0.9770線性方程Y=0.9686*X+1.163血清血漿樣本：樣本數(shù)數(shù)量50雙變量相關系數(shù)（R）0.9821線性相關系數(shù)（R2）0.9645線性方程Y=0.9210*X+0.982結論：通過本次臨床試驗的比較分析，考核試劑同參比試劑的檢測結果雖然在一定程度上存在著差異，但總體差異不明顯，兩種試劑的檢測結果線性相關性非常好（r=0.9884）。報告日期：2016年5月25日一、臨床試驗背景糖化白蛋白(GA)是血液中葡萄糖與白蛋白發(fā)生非酶糖化反應的早期糖基化產(chǎn)物。因白蛋白在體內(nèi)的半衰期較短（約17天），且白蛋白與血糖的結合速度

8、比血紅蛋白快，所以GA對短期內(nèi)血糖變化比糖化血紅蛋白（HbA1c）敏感，通常認為GA測定可反映患者近期（約2周）的血糖控制情況，目前GA已成為臨床上應用較廣泛的血糖檢測指標。多項研究表明，30天內(nèi)的血糖水平影響HbA1c水平達50%，而90天120天只影響10%。所以，在血糖檢測體系中GA是對HbA1c的有效補充。近年來，GA與HbA1c的關系受到廣泛重視，通過研究GA與HbA1c的關系可進一步認識GA的臨床意義。動脈粥樣硬化是長期慢性炎癥性過程，它并非在糖尿病確診后才啟動，在血糖升高但仍未達到糖尿病診斷標準時就已啟動，隨著血糖的增高而進展加速。既往研究表明，作為糖尿病患者體內(nèi)主要的早期糖基化

9、產(chǎn)物，GA可通過破壞內(nèi)皮細胞功能，導致血管壁的氧化應激和炎癥反應、刺激平滑肌細胞增殖和遷移等病理過程，加快動脈粥樣硬化和糖尿病血管并發(fā)癥的發(fā)生與發(fā)展。因此GA在糖尿病動脈粥樣硬化病理生理機制中起到重要作用。GA是反映過去2-3周平均血糖水平的一項指標。比血糖檢測“金標準”HbA1c的反映周期要短一些。因此，GA在治療效果的確認以及臨床用藥量的調(diào)整方面比A1c具有優(yōu)勢。另外，在許多血紅蛋白代謝異常的情況下，A1c的結果受到影響不能真實反映患者的血糖水平，而GA的結果則不受影響，如糖尿病腎病透析患者、貧血患者、妊娠期婦女的血糖檢測等，因此GA為血糖監(jiān)測的首選指標。二、產(chǎn)品的檢測原理及方法1.糖化白

10、蛋白的測定第一反應為糖化白蛋白在特異性蛋白酶的作用下，發(fā)生反應生成糖化氨基酸。第二反應為糖化氨基酸在果糖氨基酸氧化酶（FAOD）的作用下，生成過氧化氫。過氧化氫在4-氨基安替比林以及N，N-雙（4-磺丁基）-m-苯胺鈉鹽（DSBmT）的共存下，經(jīng)過過氧化酶（POD）的作用，變換成紅紫色色素。通過測定此紅紫色色素的吸光度進而計算出糖化白蛋白的濃度。糖化白蛋白：蛋白酶第一反應 糖化白蛋白 糖化氨基酸FAOD第二反應 糖化氨基酸+O2+H2O 葡萄糖醛酮+氨基酸+H2O2POD H2O2+4-氨基安替比林+DSBmT 紅紫色色素2）白蛋白的測定在第一反應中，還原型白蛋白變成氧化型白蛋白。在第二反應中

11、，氧化型白蛋白在溴甲酚藍（BCP）的作用下，白蛋白與BCP生成藍色結合體，測定此藍色結合體的吸光度進而計算出白蛋白的濃度。第一反應 還原型白蛋白 氧化型白蛋白BCP第二反應 氧化型白蛋白 白蛋白-BCP結合體3）糖化白蛋白值（%）的計算得出的糖化白蛋白濃度除以白蛋白濃度，為使測定值與常規(guī)檢測方法（露喜佳GA-L，旭化成制藥株式會社）測定的結果相一致，需要用以下公式進行補正。補正公式：（糖化白蛋白濃度/白蛋白濃度）48.9+1.9三、產(chǎn)品的預期用途本產(chǎn)品用于定量檢測血清或血漿中GA的濃度。四、臨床試驗目的和內(nèi)容4.1 臨床試驗目的驗證考核試劑同參比試劑對于臨床樣本的檢測一致性。4.2 臨床試驗內(nèi)

12、容通過考核試劑對按照方案要求入組的樣本的檢測結果同參比試劑對同一樣本的檢測結果的分析對比，統(tǒng)計出兩種試劑檢測的一致性。五、試驗總體說明5.1 臨床試驗流程按照臨床試驗方案設定的流程進行檢測。5.2 考核試劑信息5.2.1 名稱及主要成分名稱規(guī)格糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）GA酶液40mL2GA酶液13.4mL2 ALB緩沖液40mL2ALB顯色劑20mL2校準品1mL用3校準品1mL用35.2.2 儲存條件及有效期儲存條件：210有效期：制造日起14個月5.2.3 試劑信息本臨床試驗使用的是日立的7600系列全自動生化分析儀。生產(chǎn)廠家：XX醫(yī)療株式會社產(chǎn)品名稱：糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）試劑

13、校準品質(zhì)控品產(chǎn)品批號005RLM005RLM005RLM有效期2016-082016-082016-08容量GA：40ml2GA：13.4ml2ALB：40ml2ALB：20ml21ml2濃度31ml2濃度65.2.4 操作步驟具體請詳見考核試劑產(chǎn)品說明書，見附件三.1。5.3 參比試劑信息及第三方驗證試劑信息5.3.1 參比試劑生產(chǎn)廠家：旭化成制藥株式會社產(chǎn)品名稱：Lucica GA-L糖化白蛋白測定試劑盒（酶法）試劑校準品質(zhì)控品產(chǎn)品批號1502A1501A1501A有效期2016-092016-062016-06容量GA R-1：40ml2GA R-2：10ml2ALB R-1：40ml2

14、ALB R-2：20ml21ml23ml2濃度1參比試劑的詳細操作步驟及相關注意事項請詳見參比試劑的產(chǎn)品說明書，見附件三.2。5.3.2第三方驗證試劑生產(chǎn)廠家四川邁克生物科技股份有限公司產(chǎn)品名稱糖化白蛋白檢測試劑盒（酶法）產(chǎn)品批號TBD有效期TBD5.4 臨床試驗的樣本量按照臨床試驗方案的設計要求，本單位的樣本量應不低于100例.上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院一共入組156例，其中105例樣本分別在日立7600全自動生化分析儀（使用考核試劑以及參比試劑）上測定血清中濃度，在日立7600全自動生化分析儀上測定同一樣本中血清與血漿的濃度共51例。其中#215檢測血清血漿結果均為負值，考慮為檢測儀器

15、誤差所致，因此剔除此樣本，實際進行統(tǒng)計的樣本數(shù)為50例?？倶颖纠龜?shù)為155例。因總臨床樣本數(shù)已經(jīng)滿足臨床試驗方案的要求，因此，本臨床單位不再另行補充樣本以滿足100例的要求。5.5 臨床試驗單位信息名稱：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)院地址：上海市浦東新區(qū)浦建路160號電話總機)5.6 臨床樣本的入選與排除按照臨床試驗方案的要求，隨機入組了156例樣本，其中用于檢測血清血漿的#215血清血漿測定結果均為負值，考慮為檢測儀器誤差所致，因此剔除此樣本，故實際進行統(tǒng)計的樣本數(shù)為50例。其他樣本均符合入組要求。5.7臨床樣本的保存及運輸方式均符合臨床試驗方案的要求。5.8樣本

16、相關信息記錄入組樣本的相關信息符合臨床試驗方案的要求。5.9臨床樣本分組符合臨床試驗方案的要求。六臨床試驗結果及統(tǒng)計6.1 樣本說明樣本信息見附件一。本次臨床試驗使用了105例血清樣本進行了考核試劑和參比試劑的檢測，50例同一樣本考核試劑血清血漿結果相關性的檢測。檢測后，105例血清樣本經(jīng)Bland-Altman偏倚圖比較兩組結果的差值，有101個樣本結果（95.05%95%）的差值在均值1.96SD范圍內(nèi)，可視為結果具有一致性，無需剔除或補充樣本。6.2定量檢測結果統(tǒng)計描述說明：以下統(tǒng)計中，考核試劑指的是XX醫(yī)療株式會社生產(chǎn)的糖化白蛋白測定試劑盒（酶法），參比試劑指的是旭化成制藥株式會社生產(chǎn)

17、的糖化白蛋白測定試劑盒（酶法）。試驗數(shù)據(jù)見附件二。6.2.1 線性相關及散點圖考核試劑和參比試劑的檢測結果的相關系數(shù)為r=0.9884（r2=0.9770），兩者的線性方程為：Y=0.9686*X+1.163，兩組檢測結果高度相關。以自變量（參比試劑結果）為X軸，因變量（考核試劑結果）為Y軸做散點圖，結果如下：考核試劑與參比試劑相關性考核試劑GA%參比試劑GA%6.2.2偏倚圖（bland-altman）分析以參比試劑和考核試劑的差值作為縱坐標，參比試劑作為橫坐標，做散點圖，進行差值偏倚分析。105例血清樣本經(jīng)Bland-Altman偏倚圖比較兩組結果的差值，有4個樣本結果超出均值1.96SD

18、范圍，有96.19%（95%）的差值在均值1.96SD范圍內(nèi)，可視為結果具有一致性，因此無需剔除或補充樣本。6.3 血清與血漿樣本比對結果血清樣本檢測結果和血漿樣本檢測結果的相關系數(shù)為r=0.9821（r2=0.9645），兩者線性方程為：Y=0.9210*X+0.982。以同一患者的血清檢測結果為自變量Xi，血漿檢測結果為因變量Yi，以Yi對Xi作散點圖，結果如下：血清與血漿相關性考核試劑血漿GA%考核試劑血清GA%七. 結論通過本次臨床試驗的比較分析，考核試劑同參比試劑的檢測結果無顯著性差異，兩種試劑的檢測結果線性相關性高度相關（r=0.9884）。經(jīng)Bland-Altman偏倚圖比較兩組

19、結果的差值，有96.19%（95%）的差值在均值1.96SD范圍內(nèi)，可視為結果具有一致性。同時，考核試劑在進行血漿樣本與血清樣本檢測結果比對時，兩組結果的線性相關性良好。本次臨床試驗結果顯示考核試劑與參比試劑對臨床樣本的檢測具有等效性，適用于臨床使用。附件一：樣本信息記錄表請查看附件附表1_GA_樣本篩選入選表附件二：試驗數(shù)據(jù)記錄表1. 考核試劑和參比試劑數(shù)據(jù)記錄表2. 血清與血漿對比實驗檢測數(shù)據(jù)請查看附件附表2_GA_測定結果統(tǒng)計。附件三：相關試劑盒使用說明書及信息考核試劑產(chǎn)品說明書參比試劑產(chǎn)品說明書附件四：臨床試驗主要研究人員的簡歷信息李敏職 稱：研究員職 務：上海交通大學醫(yī)學院附屬仁濟醫(yī)

20、院檢驗科科主任1975 年1月出生，醫(yī)學博士，研究員，博士研究生導師。2005 年 10 月至 2008年 3 月以博士后身份在美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）工作?，F(xiàn)任中國微生物學會臨床微生物學專業(yè)委員會青年委員會副主任委員；上海醫(yī)學會檢驗醫(yī)學分會青年委員（兼學會工作秘書）、青年學組組長；上海市分子診斷技術準入及基因擴增檢驗技術評審專家；美國微生物學會（American Society for Microbiology）會員等；擔任PLoS One 、中華微生物學和免疫學雜志編委以及Infect Immun、EMI 等 6 本國際雜志審稿人等。醫(yī)療專長：目前主要從事“病原性微生物耐藥和致病機理”等研究工作。先后在Nat Med、Mol Cell、PNAS等國際專業(yè)期刊發(fā)表SCI論著35篇，以第一或通訊作者發(fā)表SCI論著13篇（13篇論文影響因子累計84.7分，他引379次）；其中近5年發(fā)表SCI論著25篇，第一或通訊作者10篇（10篇論著總影響因子67.1分，他引208次）近5年主持國家自然基金5項(包括優(yōu)秀青年科學基金1項)、國家教育部基金2項、上海市科委基金1項以及上海市人才基金3項等。 研究成果受邀在美國“Gord