同濟醫(yī)院檢驗科ISO15189體系文件23.抗人球蛋白試驗

1、同濟大學附屬同濟醫(yī)院檢驗科血液組項目操作指導書TJYYJYKMY/XMZ123第2版標題: 抗人球蛋白試驗第1章 第23節(jié)第 PAGE 4 頁 共 NUMPAGES 4 頁 目的：保證抗人球蛋白試驗檢測結果準確、可靠。 適用范圍：檢測抗人球蛋白試驗 項目名稱：抗人球蛋白試驗（Coombs） 檢測方法：直接、間接檢測法5 原理：直接法：受檢紅細胞懸液中加入抗人球蛋白血清，抗人球蛋白血清中含有IgG抗體和抗C3d。如果受檢紅細胞上存IgG性紅細胞抗體或C3d，則抗人球蛋白血清中的抗IgG抗體和抗C3d抗體與其結合，使紅細胞發(fā)生凝集。間接法：經(jīng)受檢血清吸附過的正常O型紅細胞懸液中加入等量抗人球蛋白血

2、清如果受檢血清中存在IgG紅細胞抗體，便于正常紅細胞膜上的相應抗原結合（至敏）然后抗人球蛋白血清中抗IgG抗體與結合在紅細胞膜上的IgG紅細胞抗體結合，使紅細胞發(fā)生凝集。6 試劑：6.1 品牌抗人球蛋白血清（多抗、IgG、C3） 上海血液中心抗Rh(D)血清 上海血液中心生理鹽水 上海同濟醫(yī)院6.2 貨號；抗人球蛋白血清（多抗、IgG、C3） 抗Rh(D)血清 生理鹽水 B916.3 包裝規(guī)格：抗人球蛋白血清（多抗、IgG、C3） 各1瓶 抗Rh(D)血清 1瓶 生理鹽水 500Ml6.4 內含物：抗人球蛋白血清（多抗、IgG、C3） 抗Rh(D)血清 7 儀器：37度水浴箱8 操作步驟： 8

3、.1 2受檢者的紅細胞懸液備制：標本為05真空管采集的肝素抗凝受檢者3ml血液，以 2000轉/分，離心10分鐘，吸去上層血漿。用生理鹽水將壓緊的紅細胞洗滌34次，最后以生理鹽水配制成2的紅細胞懸液。8.2 2陽性紅細胞懸液的制備：抽取Rho(D)陽性正常人O型血液3ml，以2000轉/分，離心10分鐘，吸去上層血漿，用生理鹽水將壓緊的紅細胞洗滌34次，以壓積紅細胞0.1ml加入抗Rho（D）血清0.2ml，置37度水浴中致敏1h，取出后，用生理鹽水洗滌致敏紅細胞34次，最后以生理鹽水配成2的紅細胞懸液。8.3 2陰性紅細胞懸液制備：以洗滌過的Rho（D）陽性正常人O型壓積紅細胞0.1ml，加

4、入正常人AB型血清0.2ml，混勻置37度水浴中孵育1h。取出以生理鹽水洗滌紅細胞34次，最后以生理鹽水配成2紅細胞懸液。8.4 直接反應：8.4.1 取支試管，置于試管架上，一支為陽性對照，一支為陰性對照，另一支為測定管。8.4.2 按下表操作：試劑（）測定管陽性對照陰性對照受檢者紅細胞懸液 0.2 / /陽性對照紅細胞懸液 / 0.2 /陰性對照紅細胞懸液 / / 0.2（鹽水）抗人球蛋白血清 0.2 0.2 0.28.5 間接反應：（類似于直接法）經(jīng)患者血清吸附過的正常O型紅細胞1滴+抗人球蛋白1滴。陽性對照：經(jīng)抗D血清吸附過的正常O型紅細胞1滴+抗人球蛋白1滴陰性對照：經(jīng)血清吸附過的正

5、常O型紅細胞1滴+抗人球蛋白1滴。8.6 將上述試管置于37度水溫箱中放置15分鐘，取出離心1000轉/分，1分鐘 觀察凝集現(xiàn)象，凝集為陽性，但必須陽性對照亦凝集，陰性對照為不凝集。8.7 結果判斷：直接抗人球蛋白試驗：陽性：陰性對照管不凝集，陽性對照管、受檢者試管紅細胞出現(xiàn)凝集。效價：發(fā)生凝集反應的受檢者測定管中抗人球蛋白血清最高稀釋度的倒數(shù)為其效價。陽性對照不凝集：可能是抗人球蛋白血清失效，抗Rho（D）失效，紅細胞未洗凈血漿中黏附的球蛋白以致中和了抗人球蛋白血清。陰性對照管出現(xiàn)凝集，可能是抗人球蛋白血清不純，有殘存的抗人種屬抗體被細菌污染。間接抗人球蛋白試驗：陽性：陰性對照管、鹽水對照管部凝集，陽性對照管、受檢者測定紅細胞出現(xiàn)凝集。效價：發(fā)生凝集反應的受檢者血清最高稀釋度的倒數(shù)為其效價。9 線性范圍：無10 參考范圍：陰性反應11 臨床意義：直接法是檢查體內致敏紅細胞的一種方法，用于檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏，如新生兒溶血病、溶血性輸血反應、自身免疫性溶血性貧血及藥物誘導產(chǎn)生的自身抗體。間接法是檢測血清中的不完全抗體的一種方法，用于血型的鑒定、抗體的檢出、輸血前交叉配血試驗。 病人準備標本要求：無溶血無脂血 注意事項：13.1 試驗時，溫度須恒定37度。13.2 洗滌紅細胞時盡可能縮短時間，使結合在紅細胞上的抗體不因洗脫而損失。試驗中，抗