重組乙型肝炎疫苗課件

1、重組乙型肝炎疫苗 動(dòng)物細(xì)胞工程制藥 制作者：黃玉玲背景乙型肝炎是由病毒引起的，約占所有病毒性肝炎的40，它可以急性發(fā)病，也可以形成慢性肝炎，并進(jìn)而引發(fā)肝硬化，肝癌，而其中很大一部分人可以是健康的病毒攜帶者，不出現(xiàn)癥狀，但表面抗原（HbsAg）陽(yáng)性，或者同e抗原（HbeAg）陽(yáng)性，常常是重要的傳染源。在我國(guó)，人口眾多，而這樣的慢性病毒攜帶者約有一億人，是對(duì)公共衛(wèi)生的一個(gè)重要威脅。乙肝病毒屬DNA病毒科，有三種外殼的基因編碼。乙肝病毒具有五種抗原抗體系統(tǒng)：即表面抗原抗體(HBsAg與抗-HBs)、e抗原抗體(HBeAg與抗-HBe)、核心抗原抗體(HBcAg與抗-HBc)、x抗原抗體(HBxAg與

2、抗-HBx)和HBv-DNA。有臨床意義的主要有HBsAg與抗-HBs、HBeAg與抗-HBe和抗-HBc，簡(jiǎn)稱“兩對(duì)半”。 臨床主要表現(xiàn)為食欲減退、惡心、厭油、乏力、鞏膜黃染、黃色尿、肝臟腫大、肝區(qū)痛等。 疫苗用法(2)注射部位為上臂三角肌肌內(nèi)。 (1)本疫苗注射時(shí)要充分搖勻。 (3)新生兒第1針在出生后24小時(shí)內(nèi)注射，1個(gè)月及6個(gè)月后注射第2、3針;其他人群免疫程序?yàn)榈?、1、6個(gè)月，劑量均為5ug/支。 疫苗制備取國(guó)家批準(zhǔn)的重組酵母乙型肝炎疫苗的原始菌種，經(jīng)一代擴(kuò)增，制成生產(chǎn)菌種，逐級(jí)擴(kuò)增后接種于發(fā)酵罐，在適宜溫度和時(shí)間內(nèi)進(jìn)行三級(jí)發(fā)酵，收集細(xì)胞，經(jīng)破碎，吸附粗提，疏水色譜法精提乙型肝炎表

3、面抗原，再經(jīng)硫氰酸鹽處理，除菌濾過(guò)，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加入硫柳汞作為防腐劑。 取國(guó)家批準(zhǔn)的重組CHO乙型肝炎疫苗的細(xì)胞株，用靜置培養(yǎng)或旋轉(zhuǎn)法培養(yǎng)細(xì)胞，當(dāng)乙型肝炎表面抗原的分泌量達(dá)到每1.0mg/L時(shí)，收獲培養(yǎng)液，經(jīng)硫酸銨鹽析，23次密度梯度離心和色譜法純化后，再經(jīng)濃縮，除菌濾過(guò)，甲醛滅活，氫氧化鋁吸附等，加硫柳汞作為防腐劑，分裝制成。 鑒別與檢查【鑒別 】 取本品，照中國(guó)生物制品規(guī)程酶聯(lián)免疫吸附法，與已知乙型肝炎表面抗體確證其為乙型肝炎表面抗原。 【檢查】照中國(guó)生物制品規(guī)程規(guī)定的方法檢查如下項(xiàng)目。 純度 不得低于98%。 氫氧化鋁 每1ml不得過(guò)1mg。 硫柳汞 不得過(guò)0.01%。 甲

4、醛 不得過(guò)0.01%。 異常毒性 取本品，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 熱原 取本品，依法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 無(wú)菌 取本品，用直接接種法檢查，應(yīng)符合規(guī)定。 【效價(jià)測(cè)定】取本品，照中國(guó)生物制品規(guī)程測(cè)定，應(yīng)符合規(guī)定。 酵母乙型肝炎疫苗的ED50不得過(guò)1.5g。體外相對(duì)效力試驗(yàn)抗原含量與參比苗的抗原比值不低于0.5。 CHO乙型肝炎疫苗的ED50與參比苗的ED50比值不低于1.0。 【類別】亞單位疫苗。 【規(guī)格】酵母乙型肝炎疫苗 0.5ml:5g CHO乙型肝炎疫苗 1ml:10g 【貯藏與效期】在28的暗處保存。有效期2年。 （一）釀酒酵母 1982年Valenzuela首先在釀酒酵母中成功表達(dá)乙型肝炎

5、病毒表面抗原（HBsAg），1986年9月美國(guó)默克公司的重級(jí)酵母乙肝疫苗首次取得專利并得到美國(guó)FDA的批準(zhǔn)。1989年7月比利時(shí)史克比成公司的另一重組酵母乙肝炎疫苗也取得專利。目前重組酵母乙肝疫苗的生產(chǎn)廠家除默克公司，史克公司外，我國(guó)北京天壇生物，深圳康泰公司也大量生產(chǎn)該種疫苗。其優(yōu)點(diǎn)為：酵母為低等真核微生物，易于在營(yíng)養(yǎng)成份簡(jiǎn)單的培養(yǎng)基中高密中發(fā)酵培養(yǎng)，利用工業(yè)化生產(chǎn)，表達(dá)量高，目前世界上大規(guī)模生產(chǎn)和上市的疫苗大多數(shù)由該表達(dá)系統(tǒng)制備而成。 （三） CHO疫苗本疫苗系用基因工程技術(shù)將乙型肝炎表面抗原基因片段重組到中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞(CHO)內(nèi)，通過(guò)對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)增殖，增殖分泌乙肝表面抗原(HBsAg)

6、于培養(yǎng)液中，經(jīng)純化加佐劑氫氧化鋁后制成。疫苗外觀有輕微乳白色沉淀。 免疫效果新生兒（1） 母嬰傳播阻斷保護(hù)率：應(yīng)用6批國(guó)產(chǎn)量5 g酵母疫苗對(duì)163例HbsAg，HbeAg雙陽(yáng)性母親的新生兒進(jìn)行母嬰傳播阻礙斷效果考核，結(jié)果保護(hù)率在81.48-92.07%之間，遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)報(bào)道的10 g（59.2%）和20 g（74.3%）血源乙肝疫苗,與30 g血源乙肝疫苗的保護(hù)率(85.1%)相當(dāng),而進(jìn)口5 g M苗(46例,)10 gA苗(58例)和10 g S酵母疫苗(30例)的保護(hù)率分別為90.33%、86.59%和92.58%。表明國(guó)產(chǎn)酵母疫苗免疫效果達(dá)到國(guó)外同類產(chǎn)品和30 g國(guó)產(chǎn)血源乙肝疫苗的保護(hù)水平

7、。 2） 抗體GMT：未發(fā)現(xiàn)第一針免后3、9、12月時(shí)，HbsAg、HbeAg雙陽(yáng)性孕婦所生新生兒的抗體GMT與HbsAg單陽(yáng)性及健康孕婦所生新生兒抗體GMT有顯著差異。 小學(xué)生： （1） 抗體陽(yáng)性率：第一針免后1年時(shí)，進(jìn)口酶母疫苗，國(guó)產(chǎn)酵母疫苗和國(guó)產(chǎn)CHO疫苗抗體陽(yáng)性率在第一針免疫后3、9、12月均無(wú)顯著差異。 （2） 抗體CMT比較：第一針免后一年時(shí)，進(jìn)口酶母疫苗（10 g）和國(guó)產(chǎn)CHO疫苗（10 g）抗體GMT峰值較高，國(guó)產(chǎn)酵母疫苗（5 g）較低。 免疫持久性 對(duì)應(yīng)用0、1、6月程序免疫的小學(xué)生進(jìn)行了隨訪觀察。隨訪年及3年時(shí)，2批國(guó)產(chǎn)酵母疫苗具有保護(hù)性抗體（10mIU/ml）的陽(yáng)轉(zhuǎn)率分別

8、為81.48%；68.66%和92.11%；74.14%，而進(jìn)口A和M疫苗分別為90.38%；69.56%和93.10%；78.05%。2批國(guó)產(chǎn)酵母疫苗抗體GMT分別為123.99；146.10和92.11；83.52，A和M疫苗分別為120.56；67.07和145.75；74.62。 對(duì)應(yīng)用0、1、2月程序免疫的400名小學(xué)生進(jìn)行了免后4年的隨訪觀察，結(jié)果3批國(guó)產(chǎn)酵產(chǎn)疫苗陽(yáng)性率分別為87.50%；77.33%；79.49%，而對(duì)照M（5 g）疫苗為91.89,抗體GMT分別為：65.57；71.40；59.20和74.84。由抗體峰值6月至4年時(shí)，3批國(guó)產(chǎn)疫苗抗體陰轉(zhuǎn)率分別為7.2；5.2

9、6和13.79%，對(duì)照M苗為5.17%。無(wú)論抗體陽(yáng)性一率，抗體GMT以及4年抗體陰轉(zhuǎn)率，3批國(guó)產(chǎn)疫苗和M苗間增無(wú)顯著差異。 我們最近隨該結(jié)果表明，2批國(guó)產(chǎn)酵母乙肝疫苗免后5年時(shí)抗體陽(yáng)性率已降至70%以下，而同期血源乙肝抗體陽(yáng)性率在81-69%之間。 結(jié)果表明：國(guó)產(chǎn)酵母重組乙肝疫苗的近期免疫效果達(dá)到了進(jìn)口酵疫苗的免疫水平，但抗體陽(yáng)性率和抗體GMT下降較快，考慮當(dāng)前乙肝疫苗供應(yīng)充足，酵母疫苗的加強(qiáng)接種應(yīng)提到議事日程。 （二）治療性疫苗 1） 現(xiàn)有疫苗增加前S基因或替換現(xiàn)有鋁佐劑 研究開發(fā)植物來(lái)源、細(xì)胞因子、人工合成和可生物降解的高分子聚合物等佐劑，目的在于提高細(xì)胞免疫效果，國(guó)外已有制品進(jìn)行臨床研究。 2） DNA疫苗：可以肌肉細(xì)胞內(nèi)表達(dá)乙肝表面抗菌原，誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答，同時(shí)具有長(zhǎng)期表達(dá)抗原，可減少加強(qiáng)免疫及成本低，儲(chǔ)存方便的特點(diǎn)。 3） 增大劑量酵母疫苗（10 g/支）的生產(chǎn)： 我國(guó)現(xiàn)階段生產(chǎn)和使用的酵母乙肝疫苗均為5 g/支，由于以下原因：、實(shí)際應(yīng)用反映5 g酵母疫苗的抗體陽(yáng)性率和滴度較低。、我們對(duì)接種5 g疫苗的120例成人進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)免后抗體陽(yáng)性率和滴度較低，第二針免后1個(gè)月時(shí)抗體陽(yáng)性率為70.00%，抗體GMT為9.83；完成全程免疫后1個(gè)月時(shí)抗體陽(yáng)性率為80.77%，抗體GMT為151.4