金耳菌絲體抗凝血有效部位初篩

1、金耳菌絲體抗凝血有效部位初篩【摘要】目的挑選金耳菌絲體抗凝血的有效部位。方法采用系統(tǒng)溶劑法處理金耳菌絲發(fā)酵物,得乙酸乙酯部位、正丁醇部位及水溶部位,通過凝血酶原實驗、小鼠凝血實驗及小鼠體內(nèi)血栓形成實驗等來挑選具有抗凝血作用的有效部位。結(jié)果金耳菌絲體的正丁醇部位表現(xiàn)出較好的抗凝血作用,乙酸乙酯部位及水溶部位表現(xiàn)出微弱的活性。結(jié)論金耳菌絲體抗凝血的有效部位為正丁醇提取部位?！娟P(guān)鍵詞】金耳；菌絲體；抗凝血keyrds：treellaaurantia；yeliu；antiagulant金耳(treellaaurantia)又名黃金銀耳、黃木耳、金木耳、黃耳、腦耳、膠耳等,是一種稀有野生名貴食、藥用菌。

2、分類地位屬擔(dān)子菌綱,銀耳目,銀耳科,銀耳屬,是銀耳的近緣種,其生物學(xué)特性有許多相似之處,具有較高經(jīng)濟價值。據(jù)?中國藥用真菌?記載,金耳性溫中帶寒,味甘,能化痰、止咳、定喘、調(diào)氣、平肝腸,主治肺熱、痰多、感冒咳嗽、氣喘、高血壓等。經(jīng)對其進展深層發(fā)酵研究,發(fā)現(xiàn)菌絲發(fā)酵產(chǎn)物與原子實體相比無論成分與藥用價值,前者均具有很大的應(yīng)用價值1。劉氏等2以小白鼠血栓形成和大鼠腦脂質(zhì)過氧化物等為指標(biāo),研究了金耳菌絲全發(fā)酵產(chǎn)物的抗凝血及抗血栓形成作用,對金耳菌絲發(fā)酵產(chǎn)物防治缺血性腦中風(fēng),治療腦梗死、腦缺氧導(dǎo)致的肌力喪失、手足麻木、意識不清等癥進展了初步的探究,但還需繼續(xù)深化研究該產(chǎn)物的有效部位,進一步確定其物質(zhì)根底

3、及其藥理作用機制。因此,我們采用系統(tǒng)溶劑法將金耳菌絲發(fā)酵產(chǎn)物分為假設(shè)干提取部位,以幾個提取部位為研究對象,通過抗凝及抗血栓形成等實驗,深化討論其抗凝血的有效部位。1實驗材料1.1動物昆明種小鼠,體重(220.89)g,雌雄各半；istar大鼠,體重(2611.56)g,雌雄各半,均由中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物中心提供,合格證號(95)01-3008。1.2藥物金耳9800菌絲發(fā)酵物(簡寫為t),采用山西省生物研究所自主別離馴化的金耳9800菌種發(fā)酵制得,批號20220511。1.3試劑與儀器dadei-trl1(德靈試劑),dadebehring公司,批號060512；烏拉坦,上海化學(xué)試劑采購供給

4、站經(jīng)銷,批號990309；羧甲基纖維素鈉(-na),河北省藍博化工廠消費,批號050816；其它化學(xué)試劑均為國產(chǎn)分析純。a-50自動血凝分析儀；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀re-52a(上海亞榮生化儀器廠)。2實驗方法2-62.1金耳菌絲體發(fā)酵物各部位的提取與別離稱取枯燥菌絲體,分別用12倍量、10倍量70%的乙醇提取2次,每次2h,過濾,濾液減壓回收乙醇,以水混懸,用石油醚脫脂,后分別用乙酸乙脂、正丁醇萃取5次,減壓回收乙酸乙酯、正丁醇,凍干,分別得乙酸乙酯提取部位、正丁醇提取部位、水溶性部位,冷藏備用。用時以1%的-na溶液混懸成不同濃度供藥理篩眩2.2各提取部位對凝血酶原作用的影響烏拉坦(1.5g/kg)

5、麻醉大鼠,固定,別離腹主動脈取血(3.8%枸櫞酸鈉抗凝)。離心別離血漿。受試藥物分別制成終濃度為100g/l(高劑量組)、50g/l(低劑量組)的溶液。每管血漿0.045l,參加不同濃度的受試藥物0.05l,致凝劑(德靈試劑)0.10l,總體積為0.15l。于血凝分析儀上測定其凝血酶原時間,等量生理鹽水作空白對照。記錄凝血酶原時間。2.3各提取部位對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響取小鼠70只,隨機分為7組,10只/組,ig給藥3d,高劑量組1.0g/(kgd),低劑量組0.5g/(kgd),于最后一次給藥1h后,尾靜脈注射配制好的鼠腦粉試劑0.1l/10g,待小鼠出現(xiàn)呼吸困難、驚厥、小便失禁、直至死亡

6、,存活者按5in計,記錄小鼠存活時間及死亡率。2.4各提取部位對小鼠全血凝血時間的影響(毛細玻管法)取安康小鼠70只,隨機分成7組,每組10只,ig給藥3d,第3天給藥1h后,用內(nèi)徑為1的玻璃毛細管插入小鼠眼球后靜脈叢取血,至毛細管內(nèi)血柱達5,將毛細玻管平放于桌上,每隔30s,折斷毛細玻管約0.5,緩慢左右拉開,檢查有無出現(xiàn)血凝絲。記錄從血液流進管內(nèi)至出現(xiàn)血絲的時間,即為凝血時間。2.5統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)以xs表示,統(tǒng)計學(xué)檢驗采用組間t檢驗進展處理。3結(jié)果(見表1表3)表1金耳菌絲發(fā)酵物各提取部位對小鼠凝血酶原的影響(略)注：與生理鹽水組比擬,*p0.05,*p0.01(下同)。表2金耳菌絲發(fā)酵物

7、各提取部位對小鼠體內(nèi)血栓形成的影響(略)表3金耳菌絲發(fā)酵物各提取部位對小鼠全血凝血時間的影響(略)4討論金耳菌絲發(fā)酵產(chǎn)物各提取部位藥理研究結(jié)果說明,正丁醇部位高、低劑量組對凝血酶原時間及小鼠體內(nèi)血栓形成皆有較顯著影響,并呈現(xiàn)一定的劑量-效應(yīng)關(guān)系,對小鼠凝血時間也有一定的影響；乙酸乙酯部位高劑量組對小鼠體內(nèi)血栓形成有一定的影響,但對凝血酶原時間及小鼠凝血時間,影響不大；而水溶部位高劑量組可以一定程度延長凝血酶原時間,但對小鼠凝血時間及小鼠體內(nèi)血栓形成無影響。這種現(xiàn)象可能是由于有效成分穿插存在于相鄰組分中而導(dǎo)致的。綜上可知,正丁醇部位是金耳菌絲發(fā)酵物抗凝血的有效部位,但其有效成分的化學(xué)本質(zhì)及其發(fā)揮抗凝血作用的藥理機制還需進一步討論。血栓形成與血栓栓塞是導(dǎo)致心血管疾病的因素之一,抗凝血和溶栓是有效的治療方法。因此,尋找此類藥物是重要的藥學(xué)課題。金耳經(jīng)過發(fā)酵可大量獲得,而且作為開發(fā)此類藥物的原料本錢經(jīng)濟,前景可觀?！緟⒖嘉墨I】3吳禎久.洋蟲對小鼠凝血時間和出血時間的影響j.中藥材,1996,19(7)：361.4陳奇.中藥