灰樹(shù)花多糖增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性及其分子機(jī)理初探

1、灰樹(shù)花多糖加強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)放射治療的敏感性及其分子機(jī)理初探曹衛(wèi)國(guó)，蔣勁松，馬韜，趙勝光，韓白衣圖1用灰樹(shù)花與X-射線協(xié)同抗腫瘤作用第1天，第2天別離用灰樹(shù)花3g/l和X-射線(4Gy)處置懲罰HT116細(xì)胞，細(xì)胞存活率效果用elluntingKit-8檢測(cè)得到眾所周知，放射治療固然對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷力強(qiáng)，但其毒副作用也十明白顯。病人恒久放療會(huì)嚴(yán)峻影響其生存質(zhì)量，也攔阻了治療的深化舉行。灰樹(shù)花多糖是從藥食兩用真菌灰樹(shù)花中提獲得到的真菌多糖，自己是一種生物反響調(diào)治劑，對(duì)機(jī)體沒(méi)有副作用。本研究創(chuàng)造：第1天用X-射線輻射處置懲罰、第2天改用灰樹(shù)花多糖處置懲罰，不單沒(méi)有削弱其直接對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷本領(lǐng)，并且還

2、能在臨床應(yīng)用時(shí)激活病人的免疫性能，大大進(jìn)步病人的生存質(zhì)量。2.2灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)X-射線誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡為了檢測(cè)灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)X-射線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，熒光顯微鏡下不雅察Hehst33258染色后的細(xì)胞形態(tài)。效果創(chuàng)造：第1天X-射線、第2天灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)處置懲罰后，大量HT116細(xì)胞核破碎呈分葉狀小核，為凋亡細(xì)胞的典范形態(tài)；而比較組核呈平滑完備的圓形，為正常細(xì)胞。我們將團(tuán)結(jié)處置懲罰后的細(xì)胞用ApptsisLadderDetetinKit抽提DNA，電泳時(shí)出現(xiàn)了凋亡細(xì)胞較為典范的DNA梯形條帶，如圖2所示，說(shuō)明灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)X-射線處置懲罰可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。2.2灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)X-射線誘導(dǎo)

3、腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞凋亡為了檢測(cè)灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)X-射線誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，熒光顯微鏡下不雅察Hehst33258染色后的細(xì)胞形態(tài)。效果創(chuàng)造：第1天X-射線、第2天灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)處置懲罰后，大量HT116細(xì)胞核破碎呈分葉狀小核，為凋亡細(xì)胞的典范形態(tài)；而比較組核呈平滑完備的圓形，為正常細(xì)胞。我們將團(tuán)結(jié)處置懲罰后的細(xì)胞用ApptsisLadderDetetinKit抽提DNA，電泳時(shí)出現(xiàn)了凋亡細(xì)胞較為典范的DNA梯形條帶，如圖2所示，說(shuō)明灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)X-射線處置懲罰可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡。圖2灰樹(shù)花和X-射線團(tuán)結(jié)處置懲罰誘發(fā)HT116細(xì)胞凋亡2.3灰樹(shù)花多糖協(xié)同X-射線誘導(dǎo)Bax基因的表達(dá)本實(shí)行中，人腸癌細(xì)胞

4、系HT116的抑癌基因p53表達(dá)為野生型。p53是一種非常緊張的抑癌基因，它的成果重要表示為操縱細(xì)胞的生長(zhǎng)和促進(jìn)細(xì)胞凋亡6，7，以是p53卵白質(zhì)又被稱為“戒備卵白，在正常細(xì)胞中p53基因表達(dá)的量是非常低下的，但是有些腫瘤細(xì)胞中p53的表達(dá)卻非常高，HT116細(xì)胞株就是1例。Bax是p53誘導(dǎo)后表達(dá)的卑劣基因，可促使細(xì)胞凋亡。通常以為，p53表達(dá)非常高的腫瘤細(xì)胞中Bax的表達(dá)量卻很低，從而按捺了腫瘤細(xì)胞的凋亡。本研究為了探究灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)放療抗腫瘤細(xì)胞作用的分子機(jī)理，我們用PR要領(lǐng)，半定量化檢測(cè)了BaxBl-2assiatedX基因在HT116細(xì)胞中的表達(dá)。對(duì)HT116細(xì)胞的處置懲罰是：(1零處

5、置懲罰；(2一天灰樹(shù)花3g/l；(3一天X-射線4Gy；(4第1天X-射線4Gy、第2天灰樹(shù)花3g/l；(52天都用X-射線4Gy的要領(lǐng)處置懲罰。實(shí)行效果表現(xiàn)見(jiàn)圖3：在第1天X-射線、第2天灰樹(shù)花多糖處置懲罰組中Bax的RNA程度大大進(jìn)步；一連2天接納X輻射比單日用X輻射的處置懲罰中Bax的RNA表達(dá)程度要強(qiáng)，但不及X-射線與灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)處置懲罰組所誘導(dǎo)的Bax的RNA表達(dá)量。圖3灰樹(shù)花與X-射線協(xié)同作用對(duì)Bax基因表達(dá)的影響第1天，第2天別離用灰樹(shù)花3g/l和X-射線處置懲罰HT116細(xì)胞后，抽提RNA用RT-PR闡發(fā)Bax基因的表達(dá)，GAPDH作為比較其他的研究也指出，單用X-射線的處置

6、懲罰使p53與Bax基因啟動(dòng)子的團(tuán)結(jié)本領(lǐng)加強(qiáng)的作用并不顯著5。如許的實(shí)行效果讓我們有來(lái)由信賴：在HT116細(xì)胞中，第1天X-射線、第2天灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)處置懲罰，在抗腫瘤中的協(xié)同作用是通過(guò)加強(qiáng)Bax基因的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。3討論惡性腫瘤照舊是當(dāng)前危害人類康健的重要疾病之一。手術(shù)治療、放療和化療是腫瘤治療的三大傳統(tǒng)本領(lǐng)，20世紀(jì)80年代起腫瘤的生物治療開(kāi)始日益引起人們的器重，并被普及應(yīng)用于臨床且獲得了必然的療效，成為腫瘤治療的第四大緊張本領(lǐng)。比年來(lái)，腫瘤四大治療本領(lǐng)共同共同、綜合應(yīng)用，在腫瘤治療中已獲得明顯療效，并為寬大腫瘤臨床事情者所擔(dān)當(dāng)，成為腫瘤治療的最正確和最盛行形式。研究生物治療與其他治療本領(lǐng)

7、的協(xié)同作用及其分子機(jī)理，無(wú)疑將有助于生物治療在腫瘤綜合治療中發(fā)揮更緊張的作用，到達(dá)延伸腫瘤患者保存時(shí)間、改進(jìn)生存狀態(tài)的治療目的。放射治療可殺滅腫瘤細(xì)胞，同時(shí)差異腫瘤細(xì)胞在擔(dān)當(dāng)放療后，可使細(xì)胞周期出現(xiàn)G1期停滯、G2期停滯和S期停滯的差異變革810。隨著生物技能的日新月異和分子生物學(xué)的鼓起，人們?cè)絹?lái)越器重對(duì)食用真菌的研究，藥食兩用真菌灰樹(shù)花的抗腫瘤成果日益引人注目?；覙?shù)花多糖是一種強(qiáng)效生物反響調(diào)治劑，可以有用激活細(xì)胞免疫成果，活化人體免疫細(xì)胞群，刺激種種細(xì)胞因子大量排泄，加強(qiáng)腫瘤局部免疫反響36?；覙?shù)花多糖抗腫瘤活性已得到醫(yī)學(xué)界的普及成認(rèn)和證明，但灰樹(shù)花多糖與放療協(xié)同抗腫瘤作用以及分子機(jī)理的研究

8、卻少見(jiàn)于報(bào)道。本研究創(chuàng)造：灰樹(shù)花多糖團(tuán)結(jié)放療的協(xié)同抗腫瘤作用十明白顯圖1，可以誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡圖2。更深化的分子生物學(xué)研究創(chuàng)造，凋亡相干基因Bax基因的表達(dá)增長(zhǎng)到場(chǎng)了這個(gè)作用。P53是如今天下上被研究得最為透徹的抑癌基因。它在操縱細(xì)胞生長(zhǎng)，增殖及凋亡方面充當(dāng)著緊張作用1114。當(dāng)細(xì)胞由于外界因素使DNA遭受損傷時(shí)，p53基因即被激活，由此而激活其卑劣的卵白質(zhì)p21sip1/af1/sdi1的表達(dá)而使細(xì)胞制止生上舉行修復(fù)，而當(dāng)DNA損傷嚴(yán)峻時(shí)p53又能啟動(dòng)其凋亡信號(hào)途徑-Bax基因的表達(dá)而導(dǎo)致細(xì)胞殞命。Bax基因是1993年ltvai初次創(chuàng)造可作為調(diào)控Bl-2的一個(gè)相干卵白15。與Bl-2按捺細(xì)胞凋亡相反，Bax促進(jìn)細(xì)胞凋亡。Bl-2/Bax的比值對(duì)細(xì)胞擔(dān)當(dāng)刺激后存活有關(guān)鍵作用。在正常細(xì)胞中p53的表達(dá)量非常低，而在有些腫瘤細(xì)胞中p53的表達(dá)卻非常的高。通常以為p53的表達(dá)非常高的腫瘤細(xì)胞中Bax的表達(dá)量卻很低，從而按捺了腫瘤細(xì)胞的凋亡。本研究中所接納的人腸癌細(xì)胞系HT116便是p53的表達(dá)量很高的細(xì)胞系。本研究創(chuàng)造，灰樹(shù)花多糖與放療協(xié)同作用