灰樹花多糖增強腫瘤細胞對放射治療的敏感性及其分子機理初探

1、灰樹花多糖加強腫瘤細胞對放射治療的敏感性及其分子機理初探曹衛(wèi)國，蔣勁松，馬韜，趙勝光，韓白衣圖1用灰樹花與X-射線協(xié)同抗腫瘤作用第1天，第2天別離用灰樹花3g/l和X-射線(4Gy)處置懲罰HT116細胞，細胞存活率效果用elluntingKit-8檢測得到眾所周知，放射治療固然對腫瘤細胞的殺傷力強，但其毒副作用也十明白顯。病人恒久放療會嚴峻影響其生存質(zhì)量，也攔阻了治療的深化舉行?；覙浠ǘ嗵鞘菑乃幨硟捎谜婢覙浠ㄖ刑岖@得到的真菌多糖，自己是一種生物反響調(diào)治劑，對機體沒有副作用。本研究創(chuàng)造：第1天用X-射線輻射處置懲罰、第2天改用灰樹花多糖處置懲罰，不單沒有削弱其直接對腫瘤細胞的殺傷本領(lǐng)，并且還

2、能在臨床應(yīng)用時激活病人的免疫性能，大大進步病人的生存質(zhì)量。2.2灰樹花多糖團結(jié)X-射線誘導腫瘤細胞的細胞凋亡為了檢測灰樹花多糖團結(jié)X-射線誘導的細胞凋亡，熒光顯微鏡下不雅察Hehst33258染色后的細胞形態(tài)。效果創(chuàng)造：第1天X-射線、第2天灰樹花多糖團結(jié)處置懲罰后，大量HT116細胞核破碎呈分葉狀小核，為凋亡細胞的典范形態(tài)；而比較組核呈平滑完備的圓形，為正常細胞。我們將團結(jié)處置懲罰后的細胞用ApptsisLadderDetetinKit抽提DNA，電泳時出現(xiàn)了凋亡細胞較為典范的DNA梯形條帶，如圖2所示，說明灰樹花多糖團結(jié)X-射線處置懲罰可誘導腫瘤細胞的凋亡。2.2灰樹花多糖團結(jié)X-射線誘導

3、腫瘤細胞的細胞凋亡為了檢測灰樹花多糖團結(jié)X-射線誘導的細胞凋亡，熒光顯微鏡下不雅察Hehst33258染色后的細胞形態(tài)。效果創(chuàng)造：第1天X-射線、第2天灰樹花多糖團結(jié)處置懲罰后，大量HT116細胞核破碎呈分葉狀小核，為凋亡細胞的典范形態(tài)；而比較組核呈平滑完備的圓形，為正常細胞。我們將團結(jié)處置懲罰后的細胞用ApptsisLadderDetetinKit抽提DNA，電泳時出現(xiàn)了凋亡細胞較為典范的DNA梯形條帶，如圖2所示，說明灰樹花多糖團結(jié)X-射線處置懲罰可誘導腫瘤細胞的凋亡。圖2灰樹花和X-射線團結(jié)處置懲罰誘發(fā)HT116細胞凋亡2.3灰樹花多糖協(xié)同X-射線誘導Bax基因的表達本實行中，人腸癌細胞

4、系HT116的抑癌基因p53表達為野生型。p53是一種非常緊張的抑癌基因，它的成果重要表示為操縱細胞的生長和促進細胞凋亡6，7，以是p53卵白質(zhì)又被稱為“戒備卵白，在正常細胞中p53基因表達的量是非常低下的，但是有些腫瘤細胞中p53的表達卻非常高，HT116細胞株就是1例。Bax是p53誘導后表達的卑劣基因，可促使細胞凋亡。通常以為，p53表達非常高的腫瘤細胞中Bax的表達量卻很低，從而按捺了腫瘤細胞的凋亡。本研究為了探究灰樹花多糖團結(jié)放療抗腫瘤細胞作用的分子機理，我們用PR要領(lǐng)，半定量化檢測了BaxBl-2assiatedX基因在HT116細胞中的表達。對HT116細胞的處置懲罰是：(1零處

5、置懲罰；(2一天灰樹花3g/l；(3一天X-射線4Gy；(4第1天X-射線4Gy、第2天灰樹花3g/l；(52天都用X-射線4Gy的要領(lǐng)處置懲罰。實行效果表現(xiàn)見圖3：在第1天X-射線、第2天灰樹花多糖處置懲罰組中Bax的RNA程度大大進步；一連2天接納X輻射比單日用X輻射的處置懲罰中Bax的RNA表達程度要強，但不及X-射線與灰樹花多糖團結(jié)處置懲罰組所誘導的Bax的RNA表達量。圖3灰樹花與X-射線協(xié)同作用對Bax基因表達的影響第1天，第2天別離用灰樹花3g/l和X-射線處置懲罰HT116細胞后，抽提RNA用RT-PR闡發(fā)Bax基因的表達，GAPDH作為比較其他的研究也指出，單用X-射線的處置

6、懲罰使p53與Bax基因啟動子的團結(jié)本領(lǐng)加強的作用并不顯著5。如許的實行效果讓我們有來由信賴：在HT116細胞中，第1天X-射線、第2天灰樹花多糖團結(jié)處置懲罰，在抗腫瘤中的協(xié)同作用是通過加強Bax基因的表達來實現(xiàn)的。3討論惡性腫瘤照舊是當前危害人類康健的重要疾病之一。手術(shù)治療、放療和化療是腫瘤治療的三大傳統(tǒng)本領(lǐng)，20世紀80年代起腫瘤的生物治療開始日益引起人們的器重，并被普及應(yīng)用于臨床且獲得了必然的療效，成為腫瘤治療的第四大緊張本領(lǐng)。比年來，腫瘤四大治療本領(lǐng)共同共同、綜合應(yīng)用，在腫瘤治療中已獲得明顯療效，并為寬大腫瘤臨床事情者所擔當，成為腫瘤治療的最正確和最盛行形式。研究生物治療與其他治療本領(lǐng)

7、的協(xié)同作用及其分子機理，無疑將有助于生物治療在腫瘤綜合治療中發(fā)揮更緊張的作用，到達延伸腫瘤患者保存時間、改進生存狀態(tài)的治療目的。放射治療可殺滅腫瘤細胞，同時差異腫瘤細胞在擔當放療后，可使細胞周期出現(xiàn)G1期停滯、G2期停滯和S期停滯的差異變革810。隨著生物技能的日新月異和分子生物學的鼓起，人們越來越器重對食用真菌的研究，藥食兩用真菌灰樹花的抗腫瘤成果日益引人注目?；覙浠ǘ嗵鞘且环N強效生物反響調(diào)治劑，可以有用激活細胞免疫成果，活化人體免疫細胞群，刺激種種細胞因子大量排泄，加強腫瘤局部免疫反響36?；覙浠ǘ嗵强鼓[瘤活性已得到醫(yī)學界的普及成認和證明，但灰樹花多糖與放療協(xié)同抗腫瘤作用以及分子機理的研究

8、卻少見于報道。本研究創(chuàng)造：灰樹花多糖團結(jié)放療的協(xié)同抗腫瘤作用十明白顯圖1，可以誘導腫瘤細胞凋亡圖2。更深化的分子生物學研究創(chuàng)造，凋亡相干基因Bax基因的表達增長到場了這個作用。P53是如今天下上被研究得最為透徹的抑癌基因。它在操縱細胞生長，增殖及凋亡方面充當著緊張作用1114。當細胞由于外界因素使DNA遭受損傷時，p53基因即被激活，由此而激活其卑劣的卵白質(zhì)p21sip1/af1/sdi1的表達而使細胞制止生上舉行修復(fù)，而當DNA損傷嚴峻時p53又能啟動其凋亡信號途徑-Bax基因的表達而導致細胞殞命。Bax基因是1993年ltvai初次創(chuàng)造可作為調(diào)控Bl-2的一個相干卵白15。與Bl-2按捺細胞凋亡相反，Bax促進細胞凋亡。Bl-2/Bax的比值對細胞擔當刺激后存活有關(guān)鍵作用。在正常細胞中p53的表達量非常低，而在有些腫瘤細胞中p53的表達卻非常的高。通常以為p53的表達非常高的腫瘤細胞中Bax的表達量卻很低，從而按捺了腫瘤細胞的凋亡。本研究中所接納的人腸癌細胞系HT116便是p53的表達量很高的細胞系。本研究創(chuàng)造，灰樹花多糖與放療協(xié)同作用