N 末端腦鈉肽 proBNP-II-測定試劑盒 羅氏

1、B型利鈉肽前體氨基末端B型利鈉肽前體04988531001V2proBNP IIB型利鈉肽前體氨基末端B型利鈉肽前體PAGE 6 / 8Elecsys和cobas分析儀 2007-09，V2 中文PAGE 7 / 82007-09，V2 中文 Elecsys和cobas分析儀04988531001V1B型利鈉肽前體氨基末端B型利鈉肽前體2007-06，V 1 中文 Elecsys和cobas分析儀04842464 190100測試表明分析儀可使用的試劑盒中文主要用途人血清和血漿中氨基末端B型利鈉肽前體體外定量的免疫測定。Elecsys proBNP測定可作為一種對疑似患充血性心力衰竭個體的診斷

2、和監(jiān)測輕度心臟功能障礙的輔助手段。1,2,3,4,5,6 該測試還可輔助評估罹患充血性心力衰竭患者的嚴重程度7。Elecsys proBNP 測定法可進一步用于急性冠狀動脈綜合征和充血性心力衰竭患者的危險分級，也可用于左室功能不全患者的治療監(jiān)測。8,9電化學發(fā)光免疫法“ECLIA”主要用于Elecsys和cobas e免疫測定分析儀。概要左室功能不全通常伴隨冠心病、動脈高壓、心瓣膜病和原發(fā)性心肌病而發(fā)生。如果左室功能不全未得到及時治療而使其進一步發(fā)展，患者的死亡率增高，例如心源性猝死。慢性心功能不全是一種由心臟泵血功能損害引起的臨床綜合癥狀。根據(jù)癥狀，心功能不全分為幾個階段（紐約心臟學會分類N

3、YHA-）。依據(jù)NYHA分類而分組的患者，其NT-proBNP水平隨著級數(shù)的增加而升高，反映了心臟損害的嚴重程度7。NT-proBNP的高靈敏度也使其可以監(jiān)測罹患器質性心臟病無癥狀患者的輕度心臟功能障礙1,2,3,4。過去常用臨床癥狀與成像的方法診斷左室功能不全10。已經(jīng)證明利鈉肽在控制心血管系統(tǒng)功能中的意義。研究顯示利鈉肽可用于與左室功能不全有關的臨床診斷11。其后陸續(xù)描述了以下幾種利鈉肽：心鈉素（ANP），B型利鈉肽（BNP）和C型利鈉肽（CNP）12,13。ANP和BNP為腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)的拮抗劑，通過利鈉肽和利尿肽影響器官中電解液和體液的平衡14,15。左室功能不全的患者，

4、血漿和血清中BNP濃度增加，同時血漿和血清中推定為無活性氨基末端碎片的濃度、NT-proBNP濃度、ProBNP濃度（包含108個氨基酸）都增加，BNP主要由心室分泌，在此過程中，裂解為有生理活性的BNP（77-108）和NT-proBNP氨基末端碎片（1-76）。13研究表明NT-proBNP可用于診斷和對預后的預測。16，17,18血清和血漿中NT-proBNP的濃度與左室功能不全的預后有關。Fisher等發(fā)現(xiàn)NT-proBNP值高于中值的充血性心力衰竭患者死亡率一年為53，相比之下低于中值的患者，死亡率為11。19一項有6800多名患者參與的GUSTO 研究表明NT-proBNP是最有力

5、的能獨立預測急性冠脈綜合征患者在一年內死亡率的預測指標。20本測定法也可用于確定心臟或非心臟病引起的癥狀，有助于鑒別左室功能不全的患者。歐洲心臟學會慢性心力衰竭診斷與治療工作組在其指導原則中推薦包括NT-proBNP在內的利鈉肽是臨床上排除試驗中最有用的，原因是由于其一致性和極高的陰性預測值”。10當使用推薦的分界值時，Elecsys proBNP 測定法根據(jù)不同年齡和性別得到范圍為97-100的陰性預測值。NT-proBNP濃度的變化可用于評估對左室功能不全患者的治療是否成功。另外，NT-proBNP適用于血管重建的評價，因此有助于個體恢復步驟的建立。21,22Elecsys proBNP

6、測定法包括兩種單克隆抗體，它們可以識別位于proBNP（1-108）氨基末端部分（1-76）的抗原表位。檢測原理雙抗體夾心法原理。測定總時長：18分鐘。第一次孵育：15L樣品中的抗原，生物素化單克隆NT-proBNP特異性抗體和釕復合物標記的單克隆NT-proBNP特異性抗體反應形成夾心復合物。第二次孵育：加入鏈霉親和素包被的微粒后，通過生物素和鏈霉親和素之間的相互作用使夾心復合物結合成固體相。反應混合物被吸入測量池，在測量池內磁性微粒被電磁作用吸附到電極表面。未結合的物質用Procell除去。對電極加電壓，產(chǎn)生化學發(fā)光，通過光電倍增管進行測量。結果用定標曲線進行測定，定標曲線由2點定標和試劑

7、條碼提供的主曲線經(jīng)特異性的分析產(chǎn)生。a) Tris(2,2-bipyridyl)ruthenium(II)-complex (Ru(bpy)2+試劑-工作溶液M鏈霉親和素包被的微粒（透明蓋），1瓶，6.5mL：鏈霉親和素包被的微粒0.72mg/mL；防腐劑。R1抗-NT-proBNP-抗體生物素（灰色蓋），1瓶，9mL：生物素化單克隆抗- NT-proBNP抗體（小鼠）1.1g/L；磷酸鹽緩沖液40mmol/L，pH 5.8，防腐劑。R2抗-NT-proBNP-AbRu(bpy)2+3（黑色蓋），1瓶，9mL:標記釕復合物的單克隆抗- NT-proBNP抗體（綿羊）1.1g/L；磷酸鹽緩沖液4

8、0mmol/L，pH 5.8；防腐劑。警告與注意事項僅用于體外診斷。在使用本試劑盒時必需遵循所有試驗室試劑操作的注意事項。所有廢棄物必需按照當?shù)胤ㄒ?guī)進行處置。專業(yè)人員可要求獲得安全數(shù)據(jù)單。避免所有試劑和試樣類型（樣品、定標液和質控品）形成泡沫。試劑處理將試劑盒中的試劑組合成即用單位，不可分開。自動通過每種試劑的條形碼讀取正確操作需要的全部信息。儲存和穩(wěn)定性儲存在2-8。豎直存放Elecsys proBNP 試劑盒，以保證使用前自動混合期間微粒完全有效。穩(wěn)定性：未打開的試劑儲存在2-8： 最長保存至規(guī)定的有效期試劑打開后儲存在2-8： 12周在MODULAR ANALYTICS E170和cob

9、as e 601上： 8周在Elecsys 2010和cobas e 411上： 8周在Elecsys 1010上： 4周(環(huán)境溫度20-25；打開的試劑總共可保存20小時)樣本的收集和制備只有下列樣品才能進行檢測和被接受。使用標準樣品收集管或含分離膠的試管收集血清。肝素-鋰、肝素-鈉、EDTA K2,K3抗凝的血漿。標準：回收率在血清值的90-110范圍內或斜率0.9-1.1截距0.95。在20-25穩(wěn)定3天，在2-8穩(wěn)定6天23，在-20穩(wěn)定24個月。檢測時，列出的樣品類型用經(jīng)挑選的市售樣品收集管進行測試，也就是說，并非對所有生產(chǎn)商的全部試管都進行測試。有時，不同生產(chǎn)商的樣品收集系統(tǒng)可能含

10、有影響測試結果的物質。在原始管（樣品收集系統(tǒng)）內處理樣品時，需遵守試管生產(chǎn)商的使用說明。測定前離心含有沉淀物的樣品。勿使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的樣品和質控品。測量前，保證患者的樣品、定標液和質控品存放在20-25的環(huán)境溫度。由于可能存在的蒸發(fā)效應，分析儀上的樣品、定標液和質控品應在個小時內進行測量。提供的物品參閱有關試劑的“試劑-工作溶液”章節(jié)。需要的物品（未提供）貨號04842472，proBNP II CalSet，4x1mL貨號04917049，PreciControl Cardiac II，每個PreciControl Cardiac II 1和2，2x2mL貨號11732277，通用稀

11、釋劑，2x18mL樣品稀釋劑或貨號03183971，通用稀釋劑，2x40mL樣品稀釋劑一般實驗室設備Elecsys 1010/2010，MODULAR ANALYTICS E170 和cobas e分析儀Elecsys1010/2010和cobas e分析儀的附件：貨號11662988，ProCell，6x380mL系統(tǒng)緩沖液貨號1662970，CleanCell，6x380mL測量池清洗液貨號11930346，Elecsys SysWash，1x500mL 沖洗用水添加劑貨號11933159，SysClean適配器貨號11706829，Elecsys 1010 檢測杯，12x32反應管或貨號

12、11706802，Elecsys 2010 檢測杯，60 x60反應管貨號11706799，Elecsys 2010 檢測吸頭，30 x120移液器吸頭MODULAR ANALYTICS E170和cobas e601分析儀的附件：貨號04880340，ProCell，2x2L系統(tǒng)緩沖液貨號04880293，CleanCell，2x2L測量池清洗液貨號03023141，PC/CC杯，12杯使用前用于預熱ProCell M和CleanCell M貨號03005712，ProbeWash M，12x700mL操作結束的清洗和試劑更換期間的沖洗貨號03004899，PreClean M，5x600m

13、L 檢測清洗液貨號12102137，分析接頭/分析杯，Combimagazine M，48盒x84反應管或吸頭，廢物袋貨號03023150，WasteLiner，廢物袋貨號03027651，SysClean適配器 M所有分析儀的附件：貨號11298500，Elecsys SysClean，5x100mL 系統(tǒng)清洗溶液測定為得到最佳測定性能請遵守分析儀有關文件中的使用說明。專用的分析儀測定說明請參閱有關的操作手冊。使用前微粒的再懸浮會自動發(fā)生。通過試劑條形碼讀取特異性的檢測參數(shù)。如果出現(xiàn)條形碼不能讀取的異常情況，請輸入15位的數(shù)字序列。MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys

14、 2010和cobas e分析儀：將冷卻的試劑移到約20的環(huán)境中，放置在分析儀的試劑盤內（20）。避免形成泡沫。系統(tǒng)會自動調節(jié)試劑的溫度以及試劑瓶的開/閉。Elecsys 1010分析儀：將冷卻的試劑移到約20-25的環(huán)境中，放置在分析儀的樣品/試劑盤內（環(huán)境溫度20-25）。避免形成泡沫。使用前手動打開瓶蓋，使用后手動蓋上瓶蓋。用后儲存于2-8。定標溯源性：該方法已經(jīng)用Elecsys proBNP測定法（貨號03121640）進行標準化。 每個Elecsys proBNP 試劑盒均標記著條形碼，內含特殊試劑批次定標液的特別信息。通過使用Elecsys proBNP CalSet，預定義的主曲

15、線（master curve）適合于此分析儀。定標頻率：每一試劑批次新鮮試劑（即，自試劑盒在分析儀上注冊后不長于24小時）使用前必須完成一次定標。推薦的重新定標如下：MODULAR ANALYTICS E170、Elecsys 2010和cobas e分析儀:使用同一批次試劑一個月（28天）后7天后（在分析儀上使用同一試劑盒）Elecsys 1010分析儀:每一個試劑盒7天后（環(huán)境溫度20-25）3天后（環(huán)境溫度25-32）所有分析儀：根據(jù)需要：如質控結果超出了指定限值質控對于質量控制，使用Elecsys PreciControl Cardiac 1和2。另外，可以使用其它合適的質控品。不同濃

16、度范圍的質控應于測試過程中在每個試劑盒每次定標之后至少每隔24小時做為單次分析運行一次。質控限值范圍應適合于每個實驗室的要求。所得結果應落在定義的限值內。如果所得結果在所定義的限值以外，每個實驗室應建立可采用的校正措施。計算分析儀自動計算每個樣品中被分析物的濃度（pmol/L或者pg/mL）。換算因子： pmol/L8.457pg/mL pg/mL0.118pmol/L干擾因素測定不受黃疸（膽紅素428mol/L或25mg/dL）、溶血（Hb0.621mmol/L或1.0g/dL）、脂血癥甘油三酯17.1mmol/L 或1500mg/dL）和生物素82nmol/L或5mg/天）治療的患者，在末

17、次服用生物素后至少8小時才能采集樣品。在類風濕因子高達1500IU/mL的樣品中未觀察到干擾。在NT-proBNP濃度高達33400pmol/L（300000pg/mL）時無高劑量鉤狀效應。在51種常用藥物制劑上執(zhí)行體外測試。未發(fā)現(xiàn)對檢測的干擾。來自于測試組分和極少數(shù)血清之間潛在的免疫干擾可通過加入合適的添加劑來減小。對于含有小鼠單克隆抗體的全部測試，從小鼠單克隆抗體治療過的患者或因診斷目的而接受小鼠單克隆抗體的患者采集的樣品可能出現(xiàn)錯誤的測試結果。極少數(shù)情況下，由于鏈霉親和素抗體的滴度極高而引起干擾。該測定含有使上述影響最小化的添加劑。出于診斷目的，這些結果應結合患者的病史、臨床檢查和其它檢

18、查結果進行評估。測定范圍5-35000pg/mL或0.6-4130pmol/L（由檢測下限和主曲線最大值定義）。報告顯示低于檢測限的數(shù)值5 pg/mL（35000pg/mL（4130pmol/L）或稀釋2倍的樣品最高為70000pg/mL（8277pmol/L）。稀釋NT-proBNP濃度在測量范圍以上的樣品可以用通用的Elecsys稀釋液稀釋。推薦的稀釋度為1：2（由MODULAR ANALYTICS E170，Elecsys 1010/2010和cobas e分析儀自動或手動稀釋）。被稀釋樣品的濃度必須1770pmol/L或15000pg/mL。經(jīng)手動稀釋后，將測量結果乘以稀釋因子。經(jīng)分析

19、儀稀釋后，計算樣品濃度時MODULAR ANALYTICS E170， Elecsys 1010/2010和cobas e軟件會把稀釋因子考慮進去。稀釋度為1：10時會導致與理論值有25的最大偏差。臨床數(shù)據(jù)NT-proBNP值的解釋隨著年齡的增長，動脈粥樣硬化和心臟的老化（如纖維化）會導致心臟功能障礙。心臟功能障礙的發(fā)展有個體差異，在早期階段無臨床癥狀。24,25NT-proBNP水平分別反映心臟功能或心臟功能障礙。隨著年齡的增長，NT-proBNP水平的升高在表觀健康的個體中發(fā)生的頻率增高，即反映了心功能障礙發(fā)生的頻率增高。NT-proBNP值需結合治療史、臨床測定和其它信息（如成像、實驗室

20、測定、并發(fā)性障礙、治療效果）進行解釋。24分界值大量的研究證明NT-proBNP的決策閾值為125pg/mL。若NT-proBNP125pg/mL，提示有心臟功能障礙，并伴有心臟并發(fā)癥增多的危險（心肌梗塞、心衰、死亡）。診斷穩(wěn)定性慢性心力衰竭患者的推薦分界值穩(wěn)定性心力衰竭患者（n=721）與參照組（n=2264）相比較。26分界值為125pg/mL的ROC曲線分析表明：靈敏度為88，特異性為92，陰性預測值（NPV）和陽性預測值（PPV）為分別為96.7和80.6。參考值參照組的NT-proBNP濃度如下表所示。在這些分布中表現(xiàn)出的最合適的決策閾值為125pg/mL。每個實驗室應研究預期值對該

21、實驗室患者的可轉移性，如若需要，確定實驗室自己的參考值范圍。參照組循環(huán)血液中的NT-proBNP濃度是通過對1981名年齡在18-65歲之間的供血者和283名年齡在50-90歲之間的老年患者提供的樣本進行測定得到的，這兩組人群無已知的心臟病危險、心臟病癥狀和病史。參照組NT-proBNP濃度（pg/mL）的統(tǒng)計描述如下表所示：使用Elecsys proBNP 測定法測得的年齡為1-18歲的兒童群體的NT-proBNP值如下所示：28診斷為CHF（慢性心力衰竭）患者中，NT-proBNP與NYHA分類之間的相關性限制性左室射血分數(shù)（多數(shù)正在接受治療）的患者的NT-proBNP值（pg/mL）。急

22、性呼吸困難患者ICON（NT-proBNP國際協(xié)作）研究29NT-proBNP濃度是通過4家醫(yī)院急診科1256名急性呼吸困難患者的樣本測定的。該群體包括罹患高血壓、冠狀動脈疾病、心肌梗塞、心衰或肺病病史的患者。當通過測定殘留物來鑒別其它原因引起的呼吸困難時，有720名研究對象正經(jīng)受心衰的急劇惡化。兩組NT-proBNP濃度（pg/mL）的統(tǒng)計描述如下表所示：急性呼吸困難患者的結果解釋下表所示為ICON研究組建立的最佳分界值，通過該分界值，內科醫(yī)生可提高在急診中把表現(xiàn)出急性呼吸困難癥狀的患者診斷為心衰的特異性和準確性。特殊性能指標分析儀的代表性性能數(shù)據(jù)如下。不同實驗室所得的數(shù)據(jù)可能會有差異。精密

23、度使用Elecsys試劑、混合人血清和CLSI（美國臨床實驗室標準化委員會，前身為NCCLS）修改協(xié)議（EP-5）規(guī)定的質控品確定重現(xiàn)性：每天6次持續(xù)10天（n=60）；MODULAR ANALYTICS E170分析儀上的批內精密度，n=21。所得結果如下：b)HS=人血清c)PC=PreciControl分析靈敏度（檢測下限）5pg/mL（0.6pmol/L）檢測限代表可以區(qū)別零濃度的最低可測分析物水平。方法比較使用臨床樣品對Elecsys proBNP 測定法（y)與Elecsys proBNP測定法(x)進行比較，產(chǎn)生下面的相關（pg/mL）：測量的樣品數(shù)：1824Passing/Ba

24、blok30 線性回歸y = 0.970 x + 0.456 y = 0.990 x - 31.6 = 0.963 r = 0.999樣本濃度在約5至35000pg/mL（約0.6至4130pmol/L）之間。分析的特異性Elecsys proBNP 測定法未顯示出與下列物質有顯著的交叉反應，測試時NT-proBNP的濃度約為230pg/mL和2300pg/mL（最大測試濃度）：腎上腺髓質素（1.0ng/mL），醛固酮（0.6ng/mL），血管緊張素（0.6ng/mL），血管緊張素（0.6ng/mL），血管緊張素（1.0ng/mL），ANP28（3.1g/mL），精氨酸加壓素（1.0ng/mL

25、），BNP32（3.5g/mL），CNP22（2.2g/mL），內皮素（20pg/mL），NT-proANP1-30 （preproANP26-55）（3.5g/mL），NT-proANP31-67 （preproANP56-92）（1.0 ng/mL），NT-proANP79-98（preproANP104-123）（1.0 ng/mL），腎素（50ng/mL），尿擴張素（3.5g/mL）。功能靈敏度50pg/mL（5.9pmol/L）功能靈敏度是能重復測量的并且批內變異系數(shù)在20的最低分析物濃度。參考文獻Mueller T, et al. Head-to-head comparison o

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