流動(dòng)相的配制及液相色譜儀的使用方法簡(jiǎn)介

1、流動(dòng)相的配制及液相色譜儀的使用方法簡(jiǎn)介液相色譜儀是分析工作者最常用的“一門(mén)武器”，現(xiàn)今的液相軟件均已具備了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)處理功能，如能庖丁解牛般使用，便可將此測(cè)定做到事半功倍、輕松自如。一、水相中的溶質(zhì)溶解方式水相中需溶解的無(wú)機(jī)鹽和表面活性劑等固體溶質(zhì)，建議采用加熱法，不建議采用振搖、超聲等方式。因此種方式的溶解，溶質(zhì)可能處于“臨界膠團(tuán)濃度”，其后一旦遇到某特殊情形（如遇有機(jī)溶劑、溫度劇降等），極易析出少量結(jié)晶；而一旦析出，便將損傷儀器和色譜柱，呈現(xiàn)泵頭處析出“鹽和白粉”的現(xiàn)象。二、流動(dòng)相的配制與使用1.恒度洗脫一定是將水相與有機(jī)相混合后、抽濾（使用混合型過(guò)濾膜），用一個(gè)管路（如A管）泵入儀器，這

2、是使用的原則。切勿因節(jié)約有機(jī)相、便于摸索色譜條件等原因而使用兩個(gè)管路（一個(gè)純水相、一個(gè)純有機(jī)相）泵入儀器，即便配制了脫氣機(jī)。因此種情形極易造成水相中鹽和表面活性劑的少量析出。剩余流動(dòng)相完全可繼續(xù)使用，密封后放置陰涼處；待下次試驗(yàn)時(shí)與新配制的流動(dòng)相混合后抽濾即可。無(wú)需擔(dān)心發(fā)霉、無(wú)機(jī)鹽析出、揮發(fā)、比例不準(zhǔn)等問(wèn)題，這些皆為疑神疑鬼的表現(xiàn)。實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)！實(shí)踐吧2.梯度洗脫流動(dòng)相配制最為科學(xué)的方式是：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為低比例的水相-高比例的有機(jī)相（英國(guó)藥典幾乎均如此）；其次為：A相為高比例的水相-低比例的有機(jī)相、B相為純有機(jī)相；最不科學(xué)的為：A相為純水相、B相為純有機(jī)

3、相，如既有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用了此種方式，建議改為第二種或第一種方式，否則基線漂移嚴(yán)重，難以進(jìn)行穩(wěn)定的雜質(zhì)檢測(cè)。梯度洗脫結(jié)束后，建議經(jīng)5分鐘回到初始狀態(tài)，再平衡5分鐘后開(kāi)始下一針測(cè)定。這10分鐘的穩(wěn)定極為關(guān)鍵。切勿短時(shí)間內(nèi)回到初始狀態(tài)，會(huì)對(duì)儀器和色譜柱損傷較大。三、色譜柱的安裝標(biāo)準(zhǔn)SOP應(yīng)為：取A管路放入流動(dòng)相瓶中擰松泵頭流速由0ml/min逐漸升至10ml/min，觀察尾液是否呈瀑布狀流出，持續(xù)10秒擰緊泵頭流動(dòng)相呈拋射狀從安裝色譜柱的一端噴出，觀測(cè)是否呈拋物線狀，持續(xù)5秒流速逐步降至1.0ml/min安裝色譜柱，待20秒后，流動(dòng)相從色譜柱另一端呈泉水狀涌出再安裝另一端手握兩端螺絲帽，擰緊。以上安裝

4、順序遵循的是：逐級(jí)排放氣泡和儀器內(nèi)存留的洗液，使得安裝后氣泡極難混入。本人曾試驗(yàn)梯度洗脫連續(xù)一周，第一針與最后一針主成分保留時(shí)間相差在6秒以內(nèi)。四、試驗(yàn)后色譜柱的清洗1.最為常用的C8柱、C18柱1.1流動(dòng)相僅為乙腈-水或甲醇-水時(shí)繼續(xù)沖洗30分鐘，流速1.0ml/min，柱溫保持試驗(yàn)時(shí)溫度，即可。1.2水相中有無(wú)機(jī)鹽、表面活性劑或三乙胺、高氯酸等物質(zhì)時(shí)先采用純水（或含有2%甲醇），沖洗A管路（試驗(yàn)采用哪個(gè)管路，就要從頭到尾沖洗該管路），時(shí)間30分鐘（如流動(dòng)相中有表面活性劑，適當(dāng)增加時(shí)間），流速1.0ml/min，柱溫可較試驗(yàn)溫度高出510；隨后更換成20%甲醇再?zèng)_洗30分鐘，流速1.0ml/

5、min，柱溫箱加熱裝置關(guān)閉。結(jié)束后取下色譜柱放置陰涼處。很多同仁其后采用高比例的甲醇沖洗，實(shí)屬畫(huà)蛇添足，導(dǎo)致殘余的有機(jī)相中水相遇到高比例的甲醇后析出少量鹽和表面活性劑，從而在泵頭上、色譜柱中析出，也導(dǎo)致了色譜柱壽命大為縮短。本人曾使用過(guò)一根約2000元的色譜柱，正著用了四年、倒著用了兩年（倒著用測(cè)非有關(guān)物質(zhì)）。2.其他類(lèi)型色譜柱查詢獲取如何科學(xué)合理地使用與清洗保存該類(lèi)型色譜柱的方法，切勿盲動(dòng)，否則導(dǎo)致色譜柱性能急劇下降。五、試驗(yàn)順序工作流程應(yīng)如下進(jìn)行：(1)02小時(shí)配制流動(dòng)相、對(duì)照品和供試品溶液等，切勿催促昨日試驗(yàn)同事。 (2)23小時(shí)采用A管路注入流動(dòng)相（B、C、D管路一般不用，除非梯度洗脫

6、才用到B管路），平衡1小時(shí)。如流動(dòng)相中有表面活性劑，建議前一晚小流速過(guò)夜，第二天上班后將流速增至1.0ml/min，平衡1小時(shí)后即可開(kāi)始做試驗(yàn)。 (3)35小時(shí)測(cè)定空白溶劑，一定要做到基線不漂移后方可開(kāi)始測(cè)定。所謂“不漂移”，通常系指以1.0%自身對(duì)照溶液主成分峰高約20%高度來(lái)設(shè)定的視野范圍觀察所得，切不可設(shè)定得過(guò)小，使得雜質(zhì)峰顯得很突兀、基線抖動(dòng)得很厲害，弄得人很擔(dān)心。 (4)58小時(shí)配制完所有樣品，預(yù)試了對(duì)照溶液和供試品溶液，設(shè)定好自動(dòng)進(jìn)樣程序，程序最后一針設(shè)定為小流速過(guò)夜，紫外燈關(guān)閉。切勿設(shè)定為切換至B管路洗脫，此舉得不償失。 (5)924小時(shí)放心回家，讓儀器自動(dòng)進(jìn)樣，除非不穩(wěn)定的樣品（配制一份測(cè)定一針）。充分利用下班后的16小時(shí)，做到從容不迫、鎮(zhèn)定自若。如單位還無(wú)自動(dòng)進(jìn)樣裝置，建議向領(lǐng)導(dǎo)申請(qǐng)購(gòu)買(mǎi)，因一臺(tái)自動(dòng)媲美三臺(tái)手動(dòng)。 (6)第二天00.5小時(shí)檢查并計(jì)算昨晚試驗(yàn)結(jié)果，如發(fā)現(xiàn)不良記錄，將流速增至1.0ml/min，平衡30分鐘后，測(cè)定重新配制的該份樣品即可（同時(shí)回校對(duì)照一針）。無(wú)需全部重新測(cè)定，不要過(guò)度謹(jǐn)小慎微。 (7)第二天0.52.0小時(shí)如上沖洗色譜柱，交給其后試驗(yàn)同事。六、其他1.如需使用正相系統(tǒng)，一定要單獨(dú)采用一臺(tái)儀器（如二手的、較