正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細(xì)胞凋亡及增殖基因表達(dá)的研究

1、正常妊娠及妊高征孕婦胎盤組織中細(xì)胞凋亡及增殖基因表達(dá)的研究論文摘要目的：討論正常妊娠及妊高征pih孕婦胎盤組織bl2、bax及ki67基因的表達(dá)及其互相關(guān)系。方法：采用免疫組化方法測(cè)定正常早、中、晚期妊娠30例及輕、中、重度pih36例的胎盤組織bl2、bax及ki67的表達(dá)。結(jié)果：lbl2表達(dá)主要定位在絨毛的合體滋養(yǎng)層細(xì)胞sells，而bax在sells和細(xì)胞滋養(yǎng)層細(xì)胞eiis均呈陽(yáng)性，在絨毛間質(zhì)中bax也呈陽(yáng)性表達(dá)，但強(qiáng)度低于滋養(yǎng)層細(xì)胞。ki67定位于eiis；2bl2在晚期妊娠組的陽(yáng)性率低于早、中期妊娠組p005。ki67在正常早、中、晚期妊娠組，對(duì)照組與pih組，輕、中、重度pih組之

2、間均有顯著性差異p0.01；3bl2和bax表達(dá)及與ki67的表達(dá)無(wú)相關(guān)性p005。結(jié)論：bl2及bax在高程度上到達(dá)平衡，在胎盤組織中并不起介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主導(dǎo)作用，而且二者的表達(dá)不影響細(xì)胞的增殖。關(guān)鍵詞胎盤細(xì)胞凋亡bl-2baxki67論文人類胎盤不僅在胎兒胎盤母體的關(guān)系上起中心軸的作用，而且功能上失調(diào)會(huì)導(dǎo)致母體和胎兒的病理性變化，隨著妊娠的進(jìn)展，絨毛和滋養(yǎng)層不斷成熟和分化，已發(fā)現(xiàn)許多物質(zhì)包括原癌基因產(chǎn)物，在胎盤有生理性的表達(dá)。胎兒的開展特征是細(xì)胞群增殖和誘導(dǎo)或抑制細(xì)胞凋亡成熟起來(lái)的，因此，胎盤在妊娠期間也經(jīng)歷著相似的變化。我們通過(guò)測(cè)定胎盤組織中細(xì)胞凋亡調(diào)控基因bl-2、bax及細(xì)胞增殖基因

3、ki67，進(jìn)一步討論了妊娠高血壓綜合征pih的病理性變化。1資料與方法1.1臨床資料隨機(jī)選擇1998年11月至1999年4月白求恩醫(yī)科大學(xué)第二臨床醫(yī)院及長(zhǎng)春市婦產(chǎn)醫(yī)院婦科門診及產(chǎn)科病房的孕產(chǎn)婦66例。1妊高征組36例，平均26.143.42歲,平均孕37.443.9周,輕度9例,中度10例,重度17例；(2)正常妊娠組30例，孕早期10例，平均25.253.80歲，平均孕9.031.11周；孕中期5例，平均26.553.93歲，平均孕24.053.63周；孕晚期對(duì)照組15例，平均27.763.38歲，平均孕39.821.32周。1.2標(biāo)本采集及處理孕早期是行人工流產(chǎn)術(shù)者，孕中期是來(lái)自無(wú)妊娠合并

4、癥、并發(fā)癥，要求終止妊娠而行水囊引產(chǎn)者，孕晚期為單胎足月初產(chǎn)婦，無(wú)妊娠合并癥、并發(fā)癥、以自然分娩及擇期剖宮產(chǎn)手主完畢分娩，其剖宮產(chǎn)指標(biāo)主要是頭盆不稱及社會(huì)因素。妊高征組孕婦是無(wú)慢性高血壓、慢性腎炎及其它心腎疾病的病史者。早孕絨毛組織不需進(jìn)一步處理，取出后用生理鹽水沖洗凈，即用10%福爾馬林液固定。中、晚期胎盤組織于分娩后立即在母體面避開鈣化、機(jī)化灶隨機(jī)取3個(gè)不同區(qū)域約222胎盤組織，生理鹽水沖洗干凈后立即放入10%福爾馬林固定液中。1.3方法用免疫組化sp法，抗bl-2、抗bax、抗ki67單克隆抗體即用型及sp試劑盒均購(gòu)自福州邁新生物工程公司。每次染色均設(shè)陽(yáng)性和陰性對(duì)照。1.4結(jié)果斷定由2名

5、醫(yī)師獨(dú)立觀察切片中10個(gè)高倍視野。1陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：sp法顯示bl-2及bax定位于胞漿和胞膜內(nèi)，反響產(chǎn)物為棕黃色。根據(jù)顯色程度分為4級(jí)：-為無(wú)著色，+為淡黃色，+為棕黃色，+為棕褐色;2sp法顯示ki67以細(xì)胞核呈明晰棕褐色為陽(yáng)性，按陽(yáng)性細(xì)胞占-ells的比例分為：陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)10%為-；10%-20%為+；20%-30%為+；30%為+。1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析fisher準(zhǔn)確概率檢驗(yàn)法，兩組計(jì)數(shù)資料用等級(jí)相關(guān)分析。2結(jié)果2.1正常妊娠期胎盤組織中bl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bl-2表達(dá)主要定位在絨毛的s-ells，而bax在s-ells和-ells均呈陽(yáng)性，同時(shí)在絨毛間質(zhì)中bax也呈陽(yáng)性表達(dá)，但

6、強(qiáng)度低于滋養(yǎng)層細(xì)胞；ki67蛋白主要定位在-ells。bl-2在晚期妊娠組的陽(yáng)性率明顯低于早、中期妊娠組p0.05；ki67在晚期妊娠組的陽(yáng)性率明顯低于早、中期妊娠組p0.01。早、中、晚期妊娠組bl-2的表達(dá)強(qiáng)度與ki67的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)相關(guān)性p0.05，bax與ki67也無(wú)相關(guān)性p0.05。2.2妊高征與正常晚期妊娠胎盤組織中bl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bl-2的陽(yáng)性率在對(duì)照組與pih兩組間差異無(wú)顯著性p0.05，bax兩組差異無(wú)顯著性p0.05，對(duì)照組ki67的陽(yáng)性率明顯低于pih組p0.01。bl-2與ki67的表達(dá)強(qiáng)度無(wú)相關(guān)性p0.05，bax與ki67也無(wú)相關(guān)性p0.05。2.

7、3妊高征胎盤組織中bl-2、bax及ki67的基因表達(dá)bl-2的陽(yáng)性率在輕、中、重度pih3組間差異無(wú)顯著性p0.05，bax在3組間差異也無(wú)顯著性p0.05，而ki67在輕度pih組的陽(yáng)性率明顯低于中、重度組p0.01。pih輕、中、重度組妊娠bl-2的表達(dá)強(qiáng)度與ki67的表達(dá)強(qiáng)度經(jīng)等級(jí)相關(guān)分析無(wú)相關(guān)性p0.05，bax與ki67也無(wú)相關(guān)性p0.05。3討論3.1正常妊娠與妊高征胎盤組織bl2、bax的基因表達(dá)bl2是細(xì)胞凋亡的重要抑制基因。本研究中免疫組化已確定bl2定位在sell表達(dá)，并且從正常早孕到晚期妊娠持續(xù)出現(xiàn)3，6，因此保存滋養(yǎng)層細(xì)胞團(tuán)可能是維持妊娠的一種機(jī)制1。晚期妊娠bl2表

8、達(dá)下降、可能是因?yàn)閎l2正常生理性功能，在孕晚期組成胎盤的細(xì)胞不再需要存活，可能是細(xì)胞凋亡的一種早期生物學(xué)變化，也可能與分娩有關(guān)2。目前bl2和bax是bl2家族中重要成員。bl2表達(dá)程度較高時(shí)，可形成bl2和bax的異源二聚體，細(xì)胞凋亡受到抑制；bax表達(dá)程度較高時(shí)，可形成baxbax同源二聚體，加速細(xì)胞凋亡。本研究中，對(duì)照組bl2與bax的陽(yáng)性率為667與80，pih組的陽(yáng)性表達(dá)均為75，說(shuō)明大多數(shù)胎盤組織均呈bl2與bax高表達(dá)。bl2和bax表達(dá)已在一定程度上到達(dá)平衡，所以在胎盤組織中不起介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的主導(dǎo)作用。pih組的bax并無(wú)隨病情的嚴(yán)重程度而有下降的趨勢(shì)，說(shuō)明bax會(huì)進(jìn)一步影響

9、妊娠的結(jié)局，反映病情的嚴(yán)重程度。這些結(jié)果可能提示，胎盤的細(xì)胞凋亡并不是bax單獨(dú)起作用，但有待進(jìn)一步證實(shí)。32正常妊娠與妊高征胎盤組織中ki67的表達(dá)及bl2、bax的關(guān)系ki67同細(xì)胞增殖核抗原pna、拓樸異構(gòu)酶一樣，在細(xì)胞群和組織中可作為增殖細(xì)胞的選擇性標(biāo)記。在細(xì)胞周期s、g2、期均有表達(dá)，而g0期缺如。本研究中在ells中表達(dá)，妊娠早期表達(dá)最豐富，妊娠中期次之、晚期表達(dá)最少，提示早期胎盤活性是高增殖的3。在妊高征組中ki67表達(dá)多為強(qiáng)陽(yáng)性，提示hi67的過(guò)度表達(dá)與ells活性有關(guān)。在pih中，胎盤部分缺血是由于子宮胎盤血流下降引起4，因?yàn)閟ells對(duì)缺血缺氧敏感，導(dǎo)致sells受損，所以出現(xiàn)代償性的過(guò)早成熟的ells增生。這種病理變化可能是sells損傷或壞死的指征，增生的ells修復(fù)和補(bǔ)償受損的sells，這種結(jié)果可能是絨毛對(duì)血流障礙的代償性反響。redline等5報(bào)道在前兆子癇胎盤中間層滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)pna時(shí)顯示陽(yáng)性，但bl2為陰性。本組孕32周重度pih胎死宮內(nèi)1例，其bl2表達(dá)為陰性，bax與ki67均為陽(yáng)性，但病例少，需積累更多病例討論。分析ki67與bl-2及bax的關(guān)系，未發(fā)現(xiàn)它們之間有相關(guān)性，說(shuō)明bl2和bax在胎盤發(fā)生過(guò)程中不引起細(xì)胞增殖，只是通過(guò)阻止細(xì)胞凋亡和延長(zhǎng)細(xì)胞存活，增多細(xì)胞數(shù)量。ki67的表達(dá)增加說(shuō)明ells增殖可能與其他基因的異常有關(guān)，如