葉綠素含量測定方法

1、葉綠素含量測定方法-丙酮法由于微藻的生長周期比較復雜，包括無性繁殖階段和有性繁殖階段，其在不同階段的生理形態(tài)不同，有時藻細胞會聚集在一起，以片狀或團狀形式存在，在顯微鏡下難以確定其所包含的細胞數量。藻細胞中葉綠素的含量(特別是葉綠素a的含量)通常隨與細胞的生長呈較好的線性關系，因此可通過測定藻細胞中葉綠素含量變化來反映微藻的生長情況。葉綠素測定采用丙酮研磨提取法。取適量藻液于10mL離心管中在4000rpm轉速下離心10min,棄去上清液,藻泥中加入適量的100%的丙酮。采用丙酮提取法時在試管研磨器中冰浴研磨5min，4000rpm離心后，上清液轉入10mL容量瓶中。按上述方法對藻體沉淀進行萃

2、取，直至藻體沉淀呈白色為止。定容后，采用722S型可見分光光度計分別測定645nm和663nm下萃取液的吸光值，葉綠素含量用以下公式進行計算(Amon,1949)：葉綠素a含量用以下公式進行計算：Chlorophylla(mg/L)=(12.7XA663nm2.69XA645nm)X稀釋倍數葉綠素b含量用以下公式進行計算：Chlorophyllb(mg/L)=(22.9XA645nm4.64XA663nm)X稀釋倍數葉綠素總含量用以下公式進行計算：Chlorophylla+b(mg/L)=(20.2XA645nm+8.02XA663nm)X稀釋倍數由于丙酮的沸點較低，較高溫度下?lián)]發(fā)很快。此外，

3、葉綠素穩(wěn)定性較差，見光易分解，因此，本實驗中葉綠素的提取和測定均在低溫黑暗條件下進行，以減少提取過程中的損失。葉綠素提取方法提取液：本試驗用丙酮/提取的葉綠素，譚桂英周百成底棲綠藻葉綠素的二甲基亞砜提取和測定法海洋與湖沼（）一、直接浸提法：1準確量取10ml藻液,加到15ml離心管中，放在臺式離心機離心,3500r/min（根據不同的藻選擇不同那個的離心轉速離心5min倒上清；留藻泥。隨后在盛有藻泥的離心管中加入蒸餾水，與藻泥混勻后再次離心，目的是除去藻細胞表面的鹽份，此清洗過程重復三次。、往澡泥中加二甲基亞砜,C水浴，；3然后離心，將上清轉移到棕色瓶中，4添加丙酮到離心管中，混勻，離心，再將

4、上清轉移到棕色瓶中。5定容，待測。二、研磨法獲取藻泥方法同直接浸提法，將藻泥轉移到研缽中，加入少許碳酸鈣和丙酮，v研磨，全部轉移到具塞離心管中，涮洗次，離心，將上清轉移到棕色瓶中，定容，待測。三、渦旋法:1、獲取藻泥方法同直接浸提法2、往藻泥中加入0.2g石英砂和少許碳酸鈣，然后添加1ml丙酮，v/v，）3、在渦旋器上渦旋2min，再添加3ml丙酮/，混勻，3500r/min離心5min，收集上清于10ml容量瓶，4、重復步驟3兩次5、用丙酮，定容到10mL待測。1）預處理過程每種分別取ml藻液，置于離心管中，在r/min條件下離心min后棄去上清液，分別加入定量蒸餾水，混勻后再次離心。此清洗過程重復三次。后將離心后的藻泥移到ml容量瓶中，分別加入4ml二甲基亞砜。后置于恒溫箱中0h處理。最后在支容量瓶中分別加入ml丙酮，處理一段時間后待測。（2）測定設置三組重復，用分光光度計分別測定每個藻種此三個重復在nmnmnm處的吸光度，記錄數據。（）計算按下列公式進行計算：葉綠素的濃度：