實(shí)驗(yàn)專題方案的格式

1、實(shí)驗(yàn)方案【實(shí)驗(yàn)題目】：土壤中細(xì)菌日勺分離純化實(shí)驗(yàn)【實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)思想】：細(xì)菌是具有很高實(shí)用價(jià)值勺一類微生物，世界各國(guó)對(duì)其研究與資源開(kāi)發(fā)極 為注重.目前，國(guó)內(nèi)有關(guān)細(xì)菌勺區(qū)系調(diào)查及資源開(kāi)發(fā)雖然有某些報(bào)道，但對(duì)不 同作物根際細(xì)菌勺研究很少.甘肅天水麥積山海拔1742m,屬黃土高原潮濕區(qū), 植物生長(zhǎng)土壤區(qū)有機(jī)質(zhì)含量豐富，本次實(shí)驗(yàn)將以該地區(qū)勺落葉松、馬尾松、白巖 松、野豌豆等作物生長(zhǎng)地區(qū)勺土壤為材料，分離鑒定其中勺細(xì)菌，探討不同作物 根際土壤中細(xì)菌分布數(shù)量及種類勺差別，并且分析每一種菌種在植物生長(zhǎng)過(guò)程 中所起勺作用，最后以此為根據(jù)來(lái)推斷麥積山大片地區(qū)內(nèi)土壤中微生物勺分布豐 富狀況和它們對(duì)植物生長(zhǎng)作出勺巨大奉獻(xiàn)

2、.【實(shí)驗(yàn)?zāi)可住浚簩W(xué)會(huì)培養(yǎng)基最基本勺制備措施。學(xué)會(huì)最基本勺微生物滅菌、接種等基本操作過(guò)程。2.掌握最基本勺分離、純化微生物勺一系列操作操作?！緦?shí)驗(yàn)措施】：取天水麥積山不同植物根部勺土壤作為土樣，通過(guò)對(duì)其土壤中微生物勺一系列培 養(yǎng)、分離、篩選最后分離出細(xì)菌得菌株，并稀釋平板菌落計(jì)數(shù)法進(jìn)行數(shù)量測(cè)定 四.實(shí)驗(yàn)原理：菌種來(lái)源：由于多種細(xì)菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)需求不同，在不同地方采樣對(duì)選用所要勺 細(xì)菌含量和其他雜菌含量勺多少直接有關(guān)，因此選擇微生物含量有也許豐富勺土 壤（天水麥積山植物根區(qū)）中采樣。培養(yǎng)基勺選用：為了使所要勺細(xì)菌能較好勺生長(zhǎng)，其他微生物生長(zhǎng)受到一定勺 克制，要用選擇培養(yǎng)基。還要把細(xì)菌與其她微生物相區(qū)

3、別，還要用鑒別培養(yǎng)基。為了達(dá)到既是選擇培養(yǎng)基又是鑒別培養(yǎng)基，選用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。培養(yǎng)及分離純化：通過(guò)涂布培養(yǎng)法、平板劃線法等措施達(dá)到分離純化日勺目日勺。保藏：通過(guò)度離純化得到勺菌種，接種與斜面培養(yǎng)基上，到一定期間后進(jìn)行傳 代培養(yǎng)保藏，使其不死亡、減少突變所引起勺生物學(xué)性狀勺變化。通過(guò)形態(tài)與染色鑒定：由于多種微生物有其特定勺菌落形態(tài)特性和單細(xì)胞形態(tài) 特性，可通過(guò)這些形態(tài)進(jìn)行鑒定。還由于細(xì)胞壁構(gòu)成不同可進(jìn)行鑒別染色法進(jìn)行 鑒定，也可用產(chǎn)生不產(chǎn)生芽孢進(jìn)行芽孢染色。通過(guò)以上措施可對(duì)所分離純化勺菌 種進(jìn)行初步勺鑒定。通過(guò)生理生化反映進(jìn)行鑒定：多種微生物在代謝類型上體現(xiàn)了很大勺差別，如 表目前對(duì)對(duì)大分

4、子糖類和蛋白質(zhì)勺分解能力，以及分解代謝勺最后產(chǎn)物勺不同， 反映出她們有不同勺酶系。我們?cè)趯?shí)驗(yàn)室容許勺條件下做了糖類發(fā)酵與氧化、與 否能產(chǎn)生過(guò)氧化氫酶以及與否具有細(xì)胞色素氧化酶等生理生化實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行再次鑒 定。五【實(shí)驗(yàn)材料】：器材：玻璃燒杯、天平、搪瓷燒杯、三角瓶、量筒、漏斗、試管、培養(yǎng)皿、吸 管、培養(yǎng)基分裝器、電爐、接種環(huán)、移液槍、PH試紙(PH5.49)、牛角匙、牛 皮紙、棉花、紗繩、高壓蒸汽滅菌鍋等。牛肉膏、蛋白月東、NaCl、1mol/LNaCl、1mol/LHCl。六.實(shí)驗(yàn)環(huán)節(jié)：配備牛肉膏蛋白東培養(yǎng)基：.配方及其配量：牛肉膏0.3g，蛋白東1gNaCl0.5g,瓊脂粉1.5g水100ml

5、注：PH7.27.4,每份如此，根據(jù)需要可變化量進(jìn)行配備。.稱取藥物:按培養(yǎng)及配方與配量分別稱取藥物，取少于總量日勺水于燒杯中， 將各個(gè)培養(yǎng)及成分(瓊脂除外)逐個(gè)加入水中待溶。.加熱溶解：將玻璃被放在石棉網(wǎng)上(搪瓷燒杯可直接用文火加熱)，用文 火加熱并不斷攪拌，促使各藥物迅速溶解，然后補(bǔ)充水分之所需培養(yǎng)基勺量。調(diào)節(jié)PH值：初配好勺牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液是微酸性勺，故需用1mol/LNaOH 調(diào)PH至7.2-7.4。為避免調(diào)解時(shí)過(guò)堿，應(yīng)緩慢加入NaOH液，即要邊滴加NaOH 邊攪勻培養(yǎng)液，然后用PH試紙側(cè)其酸堿度值。檢測(cè)培養(yǎng)基勺pH，若pH偏酸， 可滴加1mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用p

6、H試紙檢測(cè)，直至達(dá)到所需pH 范疇。若偏堿，則用1mol/LHCl進(jìn)行調(diào)節(jié)。pH勺調(diào)節(jié)一般放在加瓊脂之前。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過(guò) 頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子勺濃度.過(guò)濾:液體培養(yǎng)基可用濾紙過(guò)濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過(guò)濾，以 利成果勺觀測(cè)。但是供一般使用勺培養(yǎng)基.此步可省略分裝:披實(shí)驗(yàn)規(guī)定，可將配制勺培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶?jī)?nèi)。分裝時(shí)可用三 角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面導(dǎo)致污染。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度勺1/5,滅菌后制成斜面。分裝入三角瓶?jī)?nèi) 以不超過(guò)其容積內(nèi)一半為宜。半固體培養(yǎng)基以試管高度勺1/4為宜.滅菌后垂 直待凝。.加棉塞 試管口和三角瓶口塞上用一般棉花(非脫脂棉

7、)制作勺棉塞，棉塞 勺形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才干起到避免雜菌侵 入和有利透氣勺作用。要使棉塞總長(zhǎng)約3/5塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。有些微生物 需要更好勺透氣，則可用8層紗布制成通氣塞。有時(shí)也可用試管帽或塑料蓋替 代棉塞。包扎:加塞后，將三角瓶日勺棉塞外包一層牛皮紙或雙層報(bào)紙，以防滅菌時(shí)冷凝 水沾濕棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包 一層牛皮紙。然后用記號(hào)筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。滅菌:將上述培養(yǎng)基于121C濕熱滅菌20min。如因特殊狀況沒(méi)能及時(shí)滅菌， 則應(yīng)放人冰箱內(nèi)臨時(shí)保存.擺斜面滅菌后，待培養(yǎng)基冷卻至50-60C，然后制斜

8、面，則需趁熱將 試管口端擱在一根長(zhǎng)木條上，并調(diào)節(jié)斜度，使斜面長(zhǎng)度不超過(guò)試管總長(zhǎng)勺一半.無(wú)菌檢查:將滅菌勺培養(yǎng)基放入37C溫箱中培養(yǎng)24-48h,無(wú)菌生長(zhǎng)時(shí)可 以使用，或放置在冰箱或清潔勺櫥內(nèi)，備用.配備無(wú)菌生理鹽水：稱0.85g NaCl至盛有100ml蒸餾水勺三角瓶中，塞上棉塞，塞外包上一層牛皮 紙，至加壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)在121C下滅菌20min即為無(wú)菌生理鹽水。3取樣并制備土壤稀釋液：. 土壤前解決；取出采集勺土樣，清除其中較大勺雜質(zhì)，將其攆碎、攆細(xì)待 用。制土液：稱出10克于帶有無(wú)菌玻璃珠勺250ml錐形瓶中，用已滅菌勺量筒 量取90ml無(wú)菌水溶解，振搖約20分鐘，使土樣與水充足混勻。點(diǎn)燃

9、酒精燈在火 焰附近，用無(wú)菌移液槍從中吸取1ml 土壤懸液加入盛有9ml無(wú)菌水勺大試管中 充足混勻，然后用無(wú)菌移液槍從此試管中吸取1ml加入另一盛有9ml無(wú)菌水勺試 管中，混合均勻，以此類推制成10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6不同 稀釋度勺土壤溶液。4 .涂布接種：將上述9個(gè)平板分別貼上標(biāo)簽10-4、10-5、10-6各三個(gè)，然后用無(wú)菌移液槍分 別由10-4、10-5、10-6三管土壤稀釋液中各吸取0.1ml對(duì)號(hào)放入已寫好稀釋度 日勺平板中，用無(wú)菌玻璃涂棒在培養(yǎng)基表面輕輕日勺涂布均勻，室溫下靜置5到10 分鐘，使菌液吸附進(jìn)培養(yǎng)基。【注意：所有日勺接種工作必須在無(wú)菌室里面

10、進(jìn)行， 在接種之前必須先進(jìn)行滅菌】培養(yǎng)。30攝氏度恒溫室中培養(yǎng)3天觀測(cè)并進(jìn)一步分離純化。觀測(cè)菌落特性，并記錄。再倒兩個(gè)平板。點(diǎn)燃勺酒精燈附近，從稀釋度 合適勺培養(yǎng)平板上挑取帶有溶磷圈勺菌落，在新制勺平板上劃線分離，30攝氏 度恒溫室中培養(yǎng)3天斜面培養(yǎng) 放置斜面。挑取單個(gè)菌落接種到3個(gè)斜面上培養(yǎng)。置于2830C 恒溫箱中培養(yǎng)7 2h .與此同步，用單菌落進(jìn)行如下鑒定實(shí)驗(yàn)革蘭氏染色1.1涂片常規(guī)涂片法1.2初染滴加結(jié)晶紫（以剛好將菌膜覆蓋為宜）于涂片上，染色12min，傾去 染色液，細(xì)水沖洗至洗出液為無(wú)色。1.3媒染用碘液媒染約l min，水洗。1.4脫色用濾紙吸去玻片上勺殘水，將玻片傾斜，在白色背景下，用滴管流加95%勺 乙醇脫色，直至流出勺乙醇無(wú)紫色時(shí)，