血小板抗原抗體檢測(cè)

1、 血小板抗原抗體廣州醫(yī)科大學(xué)從屬第五醫(yī)院輸血科第1頁 目錄血小板相關(guān)疾病血小板抗原血小板抗體抗體檢測(cè)及交叉配血第2頁血小板抗原血小板抗原泛指存在于血小板膜能夠刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體,并能與之結(jié)合血小板膜蛋白質(zhì)和糖分子.血小板相關(guān)抗原: 紅細(xì)胞血型抗原：ABO、Lewis和P系統(tǒng)抗原等，無RH抗原 白細(xì)胞抗原：HLA抗原血小板特異性抗原（human platelet antigen，HPA）第3頁血小板抗原血型抗原：ABO、Lewis和P系統(tǒng)抗原等，無RH抗原起源：血小板表面A、B抗原起源主要有兩個(gè)：大部分是血小板本身所固有（從巨核細(xì)胞分化而來）；小部分是從血漿吸附而來。如體外將O型血小板和A或B型血

2、清溫育，血小板就會(huì)帶上A或B抗原。不一樣個(gè)體間血小板膜ABH抗原量存在差異;同一個(gè)體每一個(gè)血小板抗原量差異非常大，由此能夠解釋有些人輸入ABH不相容血液后,一部分輸入血小板快速被破壞,而另外血小板其生命力不受影響. 第4頁血小板抗原白細(xì)胞抗原：HLA抗原血小板存含有HLA-類抗原類抗原，主要是HLA-A和HLA-B位點(diǎn)抗原（少許表示HLA-C抗原）。HLA-類分子為血小板固有蛋白，少許從血漿中吸附。血小板HLA抗原免疫原性比白細(xì)胞弱。第5頁血小板抗原血小板特異性抗原（human platelet antigen，HPA）主要位于人血小板膜一大類抗原,稱之為血小板特異性抗原高頻率抗原以“a”表示

3、，低頻率抗原以“b”表示人血小板同種抗原（HPA）自1959年被發(fā)覺以來，迄今已經(jīng)檢出24個(gè)抗原，其中HPA-1，-2，-3，-4，-5，-6,-15被血小板命名委員會(huì)（PNC）列入抗原系統(tǒng)，包含14個(gè)對(duì)偶抗原，而HPA-7-14，-16,-17因?yàn)閷?duì)偶抗原未檢出而未到達(dá)系統(tǒng)命名標(biāo)準(zhǔn)。 第6頁血小板抗原第7頁血小板抗原第8頁血小板抗原24個(gè)抗原主要分布在糖蛋白GPb，GPa，GPb，GPa以及CD109上 ；GPa（CD61）攜帶9種HPA抗原，分別為HPA-1，HPA-4，HPA-6bw，HPA-7bw，HPA-8bw，HPA-10bw，HPA-11bw，HPA-14bw，HPA-16bw

4、GPb（CD41）是跨膜蛋白，細(xì)胞外116 kD重鏈，經(jīng)過二硫鍵與22 kD輕鏈共價(jià)結(jié)合。GPb上攜帶 HPA-3和HPA-9bw；第9頁血小板抗體抗 體分 類疾 病HLA / HPA 抗 體其 它 抗 體同 種抗 體格蘭茨曼血小板功效不全病抗GPb/a抗體同 種 異體 抗 體新生兒同種異體免疫性血小板降低癥HPA1b(78%), HPA5b(19%)HPA-2,3,4(3%),HPA-15,HPA-9bw, Anti-CD36血小板輸注無效癥HLA-I抗體5080% 1725%(日本人為HPA-2b), HPA-15, anti-CD36極少數(shù)為ABO抗體血小板輸血后紫癜HPA-1a,HPA

5、-1b,HPA-2b,HPA-3a,HPA-3b,HPA-15, anti-CD36少數(shù)為抗GPIa/IIa抗體被動(dòng)同種異體免疫性血小板降低癥HPA-1a,HPA-5b移植相關(guān)同種異體免疫性血小板降低癥HPA-1a,HPA-3,HPA-5b自 身抗 體自發(fā)性血小板降低癥多數(shù)位于GPb/aGPIb/IX/V，少數(shù)位于GPIV/V 和 GPIa/IIa繼發(fā)于母體自發(fā)性血小板降低癥同上藥品依賴性抗體奎寧/奎尼丁抗體所致疾病抗原位于GPb/a和GPIb/IX肝素抗體所致疾病抗原表位是PF4第10頁抗體檢測(cè)及交叉配血采取預(yù)防和治療辦法防止流產(chǎn)、出血等血小板相容性檢測(cè)抗原定型抗體檢測(cè)建立血小板供者庫篩選基

6、因型相容供者防止血小板抗體產(chǎn)生診療血小板免疫性疾病交叉配型篩查血小板相容性供者降低血小板輸注無效防止紫癜、出血和死亡第11頁血小板抗原定型血清學(xué)定型即用已知特異性抗體檢測(cè)血小板血型抗原缺點(diǎn)：特異性抗體起源困難 -人血清中血小板抗體通常為多特異性 -單克隆抗體匱乏，當(dāng)前國際上僅有HPA-1a單抗， 無其它HPA單抗?；蚨ㄐ拖拗菩云伍L度多態(tài)性分析（RFLP）序列特異性寡核苷酸聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSO)序列特異性引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR-SSP)HPA-1 HPA-2 HPA-3 HPA-4 HPA-5 HPA-15 a b a b a b a b a b a b陽性對(duì)照條帶等位基因條帶 1

7、bb 2ab 3bb 4aa 5aa 15aa第12頁血小板抗體檢測(cè) 血清學(xué)ELISA法(酶聯(lián)免疫試驗(yàn))血小板抗原單抗特異性固相化法(MAIPA)固相血小板免疫血清學(xué)試驗(yàn)(SPISA)簡易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn)(SEPSA)流式細(xì)胞儀改良抗原俘獲(ELISA)免疫熒光試驗(yàn)第13頁簡易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn) SEPSA血小板譜細(xì)胞（三人份O型混合血小板）反應(yīng)板（已包被血小板單抗）血小板單層陽性反應(yīng)陰性反應(yīng)患者血清/血漿抗人IgG指示紅細(xì)胞（人IgG致敏紅細(xì)胞）50g,5min離心洗滌3次50l/孔洗滌5次水浴30min陽性陰性50l/孔各50l/孔200g,5min離心200g,5min

8、離心第14頁簡易致敏紅細(xì)胞血小板血清學(xué)試驗(yàn) SEPSA直接測(cè)定法 血小板表面結(jié)合血小板抗體測(cè)定間接測(cè)定法 血清內(nèi)抗血小板抗體測(cè)定交叉配血試驗(yàn) 選擇配合血小板供體質(zhì)量控制陰陽性對(duì)照第15頁ELISA法(酶聯(lián)免疫試驗(yàn))單克隆抗體免疫固定血小板抗原方法（MAIPA）：該法先制備羊抗鼠IgG包被多孔板，另外，將鼠抗人血小板糖蛋白單克隆抗體和帶有抗體血小板共同孵育，再將孵育后復(fù)合物加入多孔板，孵育，洗滌，最終加入酶聯(lián)羊抗人抗體和酶反應(yīng)底物后顯色，定量測(cè)定血小板抗體。第16頁血小板相關(guān)疾病 臨床上因?yàn)檠“逖涂乖l(fā)血小板降低癥主要有5種：血小板輸注無效（PTR）輸血后紫癜（PTP）新生兒同種免疫血小板

9、降低癥（FMAIT/NAIT）被動(dòng)免疫血小板降低癥（PAT）移植相關(guān)同種免疫血小板降低癥（TAT) 第17頁血小板相關(guān)疾病血小板免疫性疾病血小板輸注無效癥新生兒血小板降低癥輸血后紫癜本身免疫性血小板降低癥藥品引發(fā)血小板降低癥移植相關(guān)血小板降低癥血小板抗原 同種異體抗原 HLA-I,HPA,ABH 同種抗原 GPb/a,CD36 本身抗原 GPb/a,GPb/ 藥品依賴性抗原 肝素、奎寧等 非特異性抗原臨床病癥 淤點(diǎn) 淤斑 流產(chǎn)（顱內(nèi)）出血 死亡第18頁血小板相關(guān)疾病-血小板輸注無效(PTR）Platelet transfusion refractoriness, PTR: 患者接收充分治療劑量

10、（2.5x1011個(gè)/次）血小板輸注后，血液循環(huán)中血小板計(jì)數(shù)未見有效提升，臨床出血表現(xiàn)未見顯著改進(jìn)，處于血小板治療不應(yīng)狀態(tài)。普通臨床上認(rèn)為最少有2次及以上輸注血小板效果不佳才能做出PTR診療。1.若輸注后1小時(shí) CCI 7500/L 12小時(shí) CCI 6000/L 二十四小時(shí) CCI 4500/L 連續(xù)3次，可判斷為血小板無效輸注2.血小板恢復(fù)（回收率）百分率（PR%）若輸注血小板二十四小時(shí)后，PR%20%，可判斷為血小板無效輸注由HLA抗體引發(fā)PTR約占80%，其次為HPA或ABO抗體。現(xiàn)因?yàn)榕R床廣泛輸注去白細(xì)胞成份血治療血液病，發(fā)病率已經(jīng)大為下降第19頁血小板相關(guān)疾病-血小板輸注無效(PT

11、R）非免疫學(xué)原因(67.3%)發(fā)燒脾功效亢進(jìn)感染藥品作用DIC血小板質(zhì)量問題免疫學(xué)原因(17.5%)HLA抗體HPA抗體ABO血型不合血小板本身抗體藥品預(yù)防1.白細(xì)胞過濾2.輻照3. HLA和HPA配型輸注第20頁血小板相關(guān)疾病-血小板輸注無效(PTR）Platelet transfusion refractoriness, PTR: 患者接收充分治療劑量（2.5x1011個(gè)/次）血小板輸注后，血液循環(huán)中血小板計(jì)數(shù)未見有效提升，臨床出血表現(xiàn)未見顯著改進(jìn)，處于血小板治療不應(yīng)狀態(tài)。普通臨床上認(rèn)為最少有2次及以上輸注血小板效果不佳才能做出PTR診療。1.若輸注后1小時(shí) CCI 7500/L 12小時(shí)

12、 CCI 6000/L 二十四小時(shí) CCI 4500/L 連續(xù)3次，可判斷為血小板無效輸注2.血小板恢復(fù)（回收率）百分率（PR%）若輸注血小板二十四小時(shí)后，PR%20%，可判斷為血小板無效輸注由HLA抗體引發(fā)PTR約占80%，其次為HPA或ABO抗體?，F(xiàn)因?yàn)榕R床廣泛輸注去白細(xì)胞成份血治療血液病，發(fā)病率已經(jīng)大為下降第21頁血小板相關(guān)疾病- 輸血后紫癜輸血后血小板降低性紫癜(post-transfusion thrombocytopenic purpura，PTTP)，又稱“輸血后紫癜”, Post-transfusion purpura, PTP: 因?yàn)檠“遢斪⒑蟀l(fā)生同種免疫反應(yīng)所致，普通發(fā)病

13、率低?；颊弑惠斎氩幌嗳菅“?全血或?qū)掖稳焉锒a(chǎn)生血小板抗體，破壞輸入和本身血小板而造成急性和暫時(shí)性血小板降低?；颊叨嘁娪冢?5%)有屢次妊娠或輸血史老年女性。第22頁血小板相關(guān)疾病-輸血后紫癜HPA-1a是引發(fā)該病主要抗原。我國絕大部分人為HPA-1a抗原陽性。試驗(yàn)室檢驗(yàn)：血小板計(jì)數(shù)降低、骨髓巨核細(xì)胞增生活躍、血清學(xué)檢驗(yàn)血小板抗體存在但效價(jià)和病情無關(guān)。本病輸血小板無效，甚至有加重病情危險(xiǎn)，腎上腺皮質(zhì)激素不能縮短病程，不過，有可能改進(jìn)出血癥狀。主要治療辦法為血漿置換或換血，換血漿優(yōu)于換全血。在輸血后血小板顯著降低和發(fā)生嚴(yán)重出血癥狀時(shí)，應(yīng)立刻做血漿置換，一次交換65%85%血漿量，平均在15天后

14、出血癥狀減退，血小板數(shù)目上升。盡可能防止或降低輸注血小板及含血小板血液制品。 第23頁血小板相關(guān)疾病- 新生兒同種免疫血小板降低癥(FMAIT/NAIT) 胎兒血小板 懷孕或生產(chǎn)時(shí)進(jìn)入母體循環(huán) 胎兒血小板刺激母體產(chǎn)生抗體 母親IgG抗體經(jīng)過胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)使胎兒血小板致敏 血小板破壞增加 發(fā)生FAIT第24頁血小板相關(guān)疾病- 新生兒同種免疫血小板降低癥(FMAIT/NAIT)第一胎即可發(fā)病；病死率約13%；治療：輸入相合血小板以提升患兒血小板數(shù)，如找不到相合血小板，能夠輸注經(jīng)洗滌和輻射母親血小板，也可給患兒做放血治療；治療前交叉配血：以母親血清與供者血小板進(jìn)行交叉配合試驗(yàn)；預(yù)防：母親在孕期可進(jìn)

15、行血漿置換第25頁被動(dòng)免疫血小板降低癥及移植相關(guān)同種免疫血小板降低癥 Passive alloimmune thrombocytopenia, PAT: 患者輸入含有血小板特異性抗體血漿，在數(shù)個(gè)小時(shí)之內(nèi)出現(xiàn)血小板降低癥，約一周后緩解。一旦發(fā)覺獻(xiàn)血員血漿、血清中含有血小板特異性抗體應(yīng)馬上停頓獻(xiàn)血，這類獻(xiàn)血員多為有妊娠史。Transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAT: 器官接收者淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗外來移植物（血小板）特異性抗體；或供體器官中殘留淋巴細(xì)胞產(chǎn)生抗宿主血小板抗體第26頁特發(fā)性血小板降低性紫癜（Idiopathic th

16、rombocytopenia purpura, I T P）ITP發(fā)病機(jī)制一、抗血小板抗體 約75%ITP患者可測(cè)到血小板相關(guān)本身抗體（PAIg），后者多為IgG、IgA也可是IgM?？贵w經(jīng)過Fab片段與血小板膜糖蛋白（Gpb/a等）結(jié)合。帶有抗體血小板接觸到單核-巨噬細(xì)胞表面FC受體，易被吞噬破壞。另外，抗血小板抗體對(duì)巨核細(xì)胞分化也有抑制作用。二、 血小板生成時(shí)間縮短 ITP血小板生存可縮短至23天或更短，ITP患者血小板易在脾臟被扣留。脾臟可產(chǎn)生抗血小板抗體，脾內(nèi)巨噬細(xì)胞參加破壞血小板過程，切脾對(duì)相當(dāng)部分患者有效。第27頁特發(fā)性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocyto

17、penia purpura, I T P）ITP急性型：兒童多見，初起有上感，主要為病毒細(xì)菌所致?？捎泻疅幔砥つw粘膜出血(瘢點(diǎn)，紫癜或血腫)、內(nèi)臟出血。1%患者顱內(nèi)出血，危及生命，但大多數(shù)呈自限性，普通46周可自行緩解。慢性型：主要見于40歲以下女青年，癥狀多在偶然中發(fā)覺，也有皮膚粘膜出血，內(nèi)臟出血較少見，月經(jīng)過多者可引發(fā)貧血。第28頁特發(fā)性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP第29頁特發(fā)性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP檢測(cè)LIFECOD

18、ES PAKAUTO試劑盒第30頁特發(fā)性血小板降低性紫癜（Idiopathic thrombocytopenia purpura, I T P）ITP一、糖皮質(zhì)激素二、脾切除三、免疫抑制劑四、高劑量免疫球蛋白和血漿置換第31頁血栓性血小板降低性紫癜(Thrombotic Thrombocytopenic Purpura，TTP)TTP是一個(gè)嚴(yán)重彌散性血栓性微血管病，以微血管病性溶血性貧血、血小板聚集消耗性降低，以及微血栓形成造成器官損害（如腎臟、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等）為特征。之前TTP預(yù)后差，病程短，不及時(shí)治療病死率8090%，伴隨血漿置換臨床應(yīng)用，預(yù)后大大改觀，病死率降至1020%。臨床五大特征，即血小板降低性紫癜、微血管病性溶血、中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀、發(fā)燒以及腎臟損害，并稱之為TTP五聯(lián)征，僅有前三大特征稱為三聯(lián)征。多數(shù)TTP患者起病急驟，病情兇險(xiǎn)，如不治療死亡率高達(dá)90%。 第32頁TTP絕大多數(shù)患者是因?yàn)関WF蛋白裂解酶（vWFCP）異常所致。vWFCP 是正常止血過程中必須成在高剪切力