血清低密度脂蛋白膽固醇化學選擇性抑制酶測定法

1、血清低密度脂蛋白膽固醇化學選擇性抑制酶測定法1. 實驗原理以往LDL-C的測定通常用總膽固醇、HDL-C和甘油三酯的檢測結果進行綜合，經(jīng)Friedwald公式計算而得3。本LDL-C試劑盒為均相方法，省卻離心步驟直接檢測LDL-C。在反應第一步，LDL被選擇性保護，而非LDL脂蛋白被酶處理。第二步中，LDL被釋放，由膽固醇酶法顯色反應選擇性地測定出LDL-C。1) LDL試劑1 LDL被保護 CHE&CHO HDL,VLDL,乳糜微粒 膽甾烯酮H2O2 POD H2O2 H2O2) 保護的LDL + 試劑2 釋放LDL CHE&CHO LDL-C 膽甾烯酮+H2O2 POD H2O2 H-DA

2、OS4-氨基安替比林 醌亞胺染料注：H-DAOS為：N-(2-羥基-3-丙磺基)-3,5-二甲氧基苯胺2. 標本：2.1 病人準備：12小時禁食。2.2 類型：血清，肝素抗凝血漿。3. 標本存放：穩(wěn)定性：-20保存至少可穩(wěn)定1周。4. 標本運輸：常溫條件下保存運輸。5. 標本拒收標準：細菌污染的標本。6. 實驗材料6.1 試劑 威特曼LDL-C測定試劑盒 試劑1；試劑2 6.1.1 試劑準備：試劑為即用式。6.1.2 試劑穩(wěn)定性與貯存：試劑保存于28，若無污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.3 變質指示：當試劑有看得見的微生物生長，有濁度，或者未開蓋的液體有沉淀時，表明試劑已變質，不能

3、繼續(xù)使用。6.1.4 注意事項：試劑中含疊氮鈉（0.95g/L）為防腐劑。不可入口！避免接觸皮膚及粘膜。應采取必要的預防措施使用試劑6.2 校準品：使用威特曼公司提供的HDL/LDL校準品LDL-C對自動分析儀進行校準，參見生化檢驗校準品和質控品.SOP文件。6.3 質控品：具體參見生化檢驗校準品和質控品.SOP文件。7. 儀器：奧林巴斯AU2700生化分析儀8. 操作步驟8.1 項目基本參數(shù)：參見AU2700生化分析儀項目測定參數(shù).SOP文件8.2 儀器操作步驟：參見AU2700生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9. 檢驗結果的判斷與分析10. 質量控制：在每一批標本中都應把非定值血清水平I與I

4、I質控做為未知標本進行分析，以2S為質控警告限，3S為失控限，繪制質控圖，判斷是否在控。質控規(guī)則參見室內質控操作規(guī)程.SOP文件。11. 計算方法：以TruCal HDL/LDL校準品HDL-C校準值校準儀器后，在病人結果可報告范圍內，儀器直接報告可靠的檢測結果。12. 參考值范圍 4合適范圍 3.4mmol/L高度危險臨界值 3.44.1mmol/L高度危險范圍 4.1mmol/L參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實驗室經(jīng)驗，每個實驗室應建立自己的參考值。13. 臨床意義1,2：膽固醇由體細胞合成和來自對食物的吸收1，是細胞膜的組分和類固醇激素、膽汁酸的前體。血液中的脂

5、蛋白是脂肪和載脂蛋白的復合物，由它轉運膽固醇。脂蛋白有四種形式：高密度脂蛋白（HDL），低密度脂蛋白（LDL），極低密度脂蛋白（VLDL）和乳糜微粒。LDL參與將膽固醇運送至外周細胞，而HDL負責從細胞中吸收膽固醇。四種形式的脂蛋白與冠狀動脈粥樣硬化有著明確的關系。低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）作用于動脈內膜形成動脈粥樣硬化斑塊，與冠心病(CHD)以及相關的死亡率有著非常密切的關系。即使總膽固醇在正常范圍內，LDL-C濃度的升高也預示了高度危險。HDL-C 具有抵御斑塊形成的作用，它與冠心病的發(fā)生呈負相關。事實上，低HDL-C值是獨立的危險因子。進行個體總膽固醇的檢測只是起過篩作用，如果要對

6、危險作較好的評估，必須另外進行HDL-C和LDL-C檢測。近年來，通過控制飲食、改變生活方式的治療、和/或使用各種藥物治療(特別他汀類藥物HMG CoA還原酶抑制劑)臨床試驗，說明了降低總膽固醇和LDL-C水平可極大地減少CHD的危險。歐洲預防冠心病實施計劃推薦：總膽固醇濃度應小于5.0mmol/L，低密度脂蛋白膽固醇濃度小于3.0mmol/L2。14. 操作性能14.1 線性范圍：0.0310.3mmol/L14.2 精密度：精密度的評估是根據(jù)NCCLS推薦的標準方法，AU2700批內精密度小于3%，總精密度小于3%。用于分析的質控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內精密度n=20

7、(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)批間精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品12.610.0160.63樣品12.790.0361.29樣品23.130.0210.66樣品23.490.0511.45樣品34.240.0280.6714.3 方法學比較：本公司的試劑盒(y)與參考方法(x)，同時對50個樣品進行LDL-C檢測，將檢測結果作方法學比較，其統(tǒng)計結果如下：y=1.02x+0.06mmol/L；r=0.994。14.4 靈敏度：本試劑的檢測限為0.03mmol/L。14.5 病人結果可報告范圍：0.0310.3mmol/L。15. 超出范圍結果處理：本

8、法對LDL-C檢測范圍為0.0310.3mmol/L。當樣品測定值超過上限時，應將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1稀釋，重新測定，結果乘以2。16 病危報警值的處理：無。17. 方法局限性17.1 本法對LDL-C檢測范圍為0.0310.3mmol/L。當樣品測定值超過上限時，應將樣品用9g/L氯化鈉溶液作1+1稀釋，重新測定，結果乘以2。17.2 干擾物質：當樣品中抗壞血酸濃度 2840mol/L，游離膽紅素濃度860mol/L，結合膽紅素濃度688mol/L，血紅蛋白濃度5.00g/L，甘油三酯濃度11.3mmol/L時沒有觀察到干擾。18. 補救措施：當儀器發(fā)生故障時，迅速聯(lián)系儀器廠家進

9、行維修。19. 參考文獻Rifai N, Bachorik PS, Albers JJ. Lipids, lipoproteins and apolipoproteins. In: Burtis CA, Ashwood ER. editors. Tietz textbook of clinical chemistry. 3rd ed. Philadelphia: W. B. Saunders Company; 1999.p.809-61.Recommendation of the Second Joint Task Force of European and other Societies o

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