考試技術(shù)簡答流式細(xì)胞免疫學(xué)的質(zhì)量控制

1、簡答：流式細(xì)胞免疫學(xué)技術(shù)的質(zhì)量控制1.單細(xì)胞懸液的質(zhì)控適當(dāng)?shù)姆绞?；處理紅細(xì)胞；實(shí)體組織來源標(biāo)本用機(jī)械法；溫度 25377.07.22.免疫熒光染色的質(zhì)控溫度；濃度；固定劑3.分選后細(xì)胞的培養(yǎng)培養(yǎng)基及的選擇；溫度；離心速度；無菌操作問答：舉例做流式時(shí)設(shè)置的細(xì)胞各管的名稱及其所加的抗體（三、對照管的設(shè)置： 高老師）。同型對照（對照）：去除抗體非特異性吸附的影響。單色補(bǔ)償（單陽管）：去除相鄰熒光光譜的例：部分。CD34-PE CD34+ CD38-1/ PE- Isotype;CD38-FITC細(xì)胞FITC-Isotype: 設(shè)置對照門, 去除抗體非特異性吸附的影響2/ CD34-PE ; FITC

2、-Isotype3/CD38-FITC ; PE- Isotype: 單陽管對照, 設(shè)置補(bǔ)償: 單陽管對照, 設(shè)置補(bǔ)償問答題：參與腫瘤細(xì)胞藥物抗性 microRNA 的發(fā)現(xiàn)及其實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證技術(shù)比較腫瘤耐藥細(xì)胞及其敏感細(xì)胞株 MicroRNA 的表達(dá)差異，從而篩選出參與利用腫瘤細(xì)胞藥物抗性的 MicroRNA。可以利用Northern blot 及 RT-PCR 比較耐藥細(xì)胞株及敏感細(xì)胞株的MicroRNA 的表達(dá)量來驗(yàn)證。3.干系胞的分選方法并舉例：（1） MACS 細(xì)胞分選技術(shù)2流式細(xì)胞儀分選技術(shù)：該方法的特點(diǎn)是精度高（99%以上）；多標(biāo)志分選，正選負(fù)選可以同時(shí)進(jìn)行；無菌分選能滿足后續(xù)試驗(yàn)要求熒

3、光標(biāo)記小鼠的應(yīng)用及工藝（大概是這個(gè)意思）熒光發(fā)光是通過激發(fā)光激發(fā)熒光基團(tuán)到達(dá)高能量狀態(tài)，而后產(chǎn)生發(fā)射光。常用的有紅色熒 光 蛋 白 （ RFP ） 和 綠 色 熒 光 蛋 白 （ GFP ）。 RFP包 括DsRed,DsRed-Express,mRFPmars,DsRed-Timer 等；GFP 包括 S65T-GFP,EGFP,BFP,RSGFP4等。熒光成像具有操作簡單、所得結(jié)果直觀、靈敏度高等特點(diǎn)，在動物體內(nèi)成像中到廣泛應(yīng)用，如示蹤表達(dá)、標(biāo)記轉(zhuǎn)動物、研究腫瘤生物學(xué)行為、追蹤干細(xì)胞的分化與定位等。熒光蛋白轉(zhuǎn)小鼠作為一種工具小鼠，廣泛的應(yīng)用于生物學(xué)的各個(gè)領(lǐng)域，為干細(xì)胞的分化與定位、腫瘤、免

4、疫與腫瘤細(xì)胞相互作用和形成等研究提供有力的工具動物和分子影像學(xué)技術(shù)。制作工藝：1、熒光蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建及轉(zhuǎn)：螢光蛋白的可以被為載體并轉(zhuǎn)到生小鼠，物體中或轉(zhuǎn)染到細(xì)胞中，例如以攜帶綠色熒光蛋白（GFP）的慢將慢表達(dá)載體 FUGW 與 ViraerTMLentiviral PackagingMix 按 12 比例混合,用LipofectamineTM2000 轉(zhuǎn)染 293FT 細(xì)胞,包裝出的經(jīng)濃縮后以 293T 細(xì)胞測定滴度。采用卵卵周隙顯微注射的方式轉(zhuǎn)小鼠。2、PCR 鑒定熒光蛋白轉(zhuǎn)組 DNA 進(jìn)行小鼠：小鼠生后剪腳趾提取表型檢測。3、熒光影像系統(tǒng)分析熒光蛋白轉(zhuǎn)小鼠4、熒光蛋白轉(zhuǎn)敲除（名解）小鼠

5、全身重要組織熒光蛋白表達(dá)分析通過同源重組將外源定點(diǎn)整合入靶細(xì)胞組上某一確定的位點(diǎn)，以達(dá)到定點(diǎn)修飾改造上某一基本步驟:的目的的一種技術(shù)。ES 細(xì)胞的獲得；將載體的構(gòu)建；打靶載體通過一定的方式(常用電穿孔法)導(dǎo)入同源的胚胎干細(xì)胞(EScell)中，使外源 DNA 與胚胎干細(xì)胞組中相應(yīng)部分發(fā)生同源重組，將打靶載體中的 DNA 序列整合到內(nèi)源組中從而得以表達(dá)；用選擇性培養(yǎng)基篩選已的細(xì)胞；通過觀察嵌和體小鼠的生物學(xué)形狀的變化進(jìn)而了解目的變化前后對小鼠的生物學(xué)形狀的改變，達(dá)到研究目的敲除的應(yīng)用領(lǐng)域主要有：的目的。1、2、3、4、建立人類疾病的轉(zhuǎn)動物模型，為醫(yī)學(xué)研究提供材料；改造動物型，鑒定新和/或其新功能

6、，研究發(fā)育生物學(xué)；治療遺傳?。桓脑焐?、培育新的生物品種。現(xiàn)代技術(shù)名解：CT 值Ct 值的定義是 PCR 擴(kuò)增過程中，擴(kuò)增產(chǎn)物(熒光信號）到達(dá)閾值時(shí)所經(jīng)過的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)。簡答：RT-PCR 中，什么情況下需要采用絕對定量方法，什么情況下相對定量即可？如果需要知道拷貝數(shù)，就必須用絕對定量的方法，否則只需要給出表達(dá)相對量就足夠了。相對定量可能比絕對定量要更容易一些，因?yàn)樗恍枰鳂?biāo)準(zhǔn)曲線。3.問答：判斷擴(kuò)增曲線是否良好有哪些指標(biāo)？曲線拐點(diǎn)清楚，特別是低濃度樣本指數(shù)期明顯，擴(kuò)增曲線整體平行性好。曲線指數(shù)期斜率與擴(kuò)增效率成正比，斜率越大擴(kuò)增效率越高。標(biāo)準(zhǔn)的基線平直或略微下降，無明顯的上揚(yáng)趨勢。管的擴(kuò)增曲線平行性好，表明各反應(yīng)管的擴(kuò)增效率相近。2. 簡答題：簡述實(shí)驗(yàn)中如何去除 RNase（1）（2）（3）操作者在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中必須戴手套和，并經(jīng)常更換玻璃器皿沖洗干凈后，需要 180250干烤 4 小時(shí)以上盡可能使用制品（Ep 管、吸頭等），用 0.1%DPEC 溶液浸泡過夜，80烤干后高壓滅菌電泳槽沖洗干凈后，于 30%H2O2 中浸泡 30 分鐘以上，然后用 0.1%DPEC溶液或高壓滅菌水徹底沖洗除 Tris 類試劑外，所有溶液用 0.1%DPEC 處理 12