植物組織培養(yǎng)第一章實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)于基本操作課件

1、植物組織培養(yǎng)第一章實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)于基本操作課件植物組織培養(yǎng)第一章實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)于基本操作課件本章內(nèi)容提要：一、實(shí)驗(yàn)室及其基本設(shè)備 二、基本操作 三、培養(yǎng)基及其配制四、培養(yǎng)條件的控制陳傳紅 制作本章內(nèi)容提要：陳傳紅 制作一、實(shí)驗(yàn)室及基本設(shè)備 植物組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室一般可劃分為四部分：化學(xué)實(shí)驗(yàn)室、無菌操作室、培養(yǎng)室、鑒定室、馴化移植室。陳傳紅 制作一、實(shí)驗(yàn)室及基本設(shè)備陳傳紅 制作1、化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（準(zhǔn)備室）為培制培養(yǎng)基的重要場(chǎng)所，一般宜大不宜小，有較大的平面實(shí)驗(yàn)臺(tái)；主要設(shè)備：精密天平（1/10000、1/100）、托盤天平、pH計(jì)、電冰箱、干燥箱、蒸餾水器、高壓消毒鍋、電爐和不銹鋼鍋等；玻璃儀器：試管、燒杯、

2、量筒、容量瓶、移液管、滴管培養(yǎng)基分裝器皿等；清洗器具：洗滌液、各式洗瓶刷、塑料框等。陳傳紅 制作1、化學(xué)實(shí)驗(yàn)室（準(zhǔn)備室）為培制培養(yǎng)基的重要場(chǎng)所，一般宜大不宜培養(yǎng) 容器陳傳紅 制作培養(yǎng) 容器陳傳紅 制作立式高壓蒸汽滅菌鍋臥式高壓蒸汽滅菌鍋陳傳紅 制作立式高壓蒸汽滅菌鍋臥式高壓蒸汽滅菌鍋陳傳紅 制作pH計(jì)陳傳紅 制作pH計(jì)陳傳紅 制作2、無菌操作室（接種室） 實(shí)驗(yàn)室的無菌條件組織培養(yǎng)成敗的關(guān)鍵。是無菌操作的重要場(chǎng)所，面積宜小不宜大；墻壁光滑平整，地面平坦無縫，室外有緩沖室，放置工作服、拖鞋和帽子，并用紫外線隨時(shí)滅菌，以減少雜菌進(jìn)入無菌室；主要設(shè)備：接種解剖器械（各種剪刀、各種鑷子、解剖刀）、空調(diào)、

3、紫外線燈、超凈工作臺(tái)或接種箱等。陳傳紅 制作2、無菌操作室（接種室） 實(shí)驗(yàn)室的無菌條件組織培養(yǎng)成敗的超靜工作臺(tái)陳傳紅 制作超靜工作臺(tái)陳傳紅 制作接種 推車電熱式 滅菌儀接種操作陳傳紅 制作接種 推車電熱式 滅菌儀接種操作陳傳紅 制作陳傳紅 制作陳傳紅 制作3、培養(yǎng)室 培養(yǎng)的重要場(chǎng)所，盡量安排在樓層較高處，以利采光，減少塵埃和雜菌污染；利于清潔、干燥和保溫隔熱；盡量利用自然光照，最大限度地加大采光面積；主要設(shè)備：培養(yǎng)架與燈光、配電板、石英電力時(shí)控器、空調(diào)機(jī)、加濕器、控溫儀、溫度濕度計(jì)、最高最低溫度計(jì)等。陳傳紅 制作3、培養(yǎng)室 培養(yǎng)的重要場(chǎng)所，盡量安排在樓層較高處，以利采光，培養(yǎng)架試管苗培養(yǎng)陳傳紅

4、 制作培養(yǎng)架試管苗培養(yǎng)陳傳紅 制作培養(yǎng)室陳傳紅 制作培養(yǎng)室陳傳紅 制作牡丹山茶在增殖蝴蝶蘭試管苗開花情況金花茶濾紙橋液體 培養(yǎng)生根非洲紫羅蘭壯苗生根陳傳紅 制作牡丹山茶在增殖蝴蝶蘭試管苗開花情況金花茶濾紙橋液體 培養(yǎng)生根各種材料的培養(yǎng)陳傳紅 制作各種材料的培養(yǎng)陳傳紅 制作4、鑒定室(細(xì)胞學(xué)觀察室)是觀察和鑒定培養(yǎng)物的誘導(dǎo)、分化、遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的場(chǎng)所。主要設(shè)備：高倍顯微鏡、倒置顯微鏡、實(shí)體顯微鏡、恒溫箱、以及做植物切片全套設(shè)備等。陳傳紅 制作4、鑒定室(細(xì)胞學(xué)觀察室)是觀察和鑒定培養(yǎng)物的誘導(dǎo)、分化、遺5、馴化移植室（溫室、大棚等）主要用于試管苗的移栽管理，以及實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備。主要設(shè)備：溫室、大棚、

5、蔭棚、移植床、缽、盆、各種基質(zhì)、噴灌設(shè)施等。陳傳紅 制作5、馴化移植室（溫室、大棚等）主要用于試管苗的移栽管理，以及移栽苗床陳傳紅 制作移栽苗床陳傳紅 制作二、基本操作 1.洗滌2.滅菌 植物組織培養(yǎng)中最致命的危害是污染，因此，滅菌工作是極其重要的。有菌的范疇：凡是暴露在（未經(jīng)處理的）空氣中的物體，曾經(jīng)接觸過自然水源的物體，至少它的表面，毫無例外都是有菌的。它的內(nèi)部在未經(jīng)證實(shí)之前，也應(yīng)以有菌物休看待。無菌的范疇：經(jīng)過高溫灼燒或蒸煮過后的物體，或經(jīng)其它物理的或化學(xué)滅菌方法處理過后的物體，是無菌的。陳傳紅 制作二、基本操作 1.洗滌陳傳紅 制作3、常用的滅菌方法物理方法：干熱（烘烤和灼燒）、濕熱（

6、蒸煮或加壓蒸煮）、射線處理、超聲超、微波處理、過濾后的流體（空氣、溶液）、離心沉淀、清洗和大量無菌水沖洗技術(shù)措施?；瘜W(xué)方法：滅菌劑-升汞、福爾馬林、雙氧水、來蘇爾、高錳酸鉀、漂白粉、次氯酸鉀、抗菌劑、灑精等。要根據(jù)工作中的不同材料和不同目的適當(dāng)選用。陳傳紅 制作3、常用的滅菌方法陳傳紅 制作（1）培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌所必需的最少時(shí)間容器的體積（ml） 最少時(shí)間(121、min） 2050 15 75150 20 250500 25 1000 30 1500 35 200040陳傳紅 制作（1）培養(yǎng)基的滅菌 培養(yǎng)基高壓蒸汽滅菌所必需的最少時(shí)間陳傳紅(2) 不耐熱的物質(zhì)將采用過濾滅菌一

7、些生長(zhǎng)因子，如：生長(zhǎng)素（IAA）、赤霉素（GA3）、玉米素（ZT）、脫落酸（ABA）、尿素和某些維生素是不耐熱的，不能用高壓滅菌處理。通常采用過濾滅菌的方法。防細(xì)菌濾膜其孔徑尺寸小于或等于0.45微米。陳傳紅 制作(2) 不耐熱的物質(zhì)將采用過濾滅菌一些生長(zhǎng)因子，如：生長(zhǎng)素（無菌過濾器陳傳紅 制作無菌過濾器陳傳紅 制作（3）干熱滅菌法玻璃器皿及耐熱用具等，可采用干熱滅菌。是利用烘箱加熱到150，40min，或120 ，120min，來殺滅微生物。由于這一方法能源消耗大，費(fèi)時(shí)間，這一方法并不常用，盡量用高壓滅菌來取代它。陳傳紅 制作（3）干熱滅菌法玻璃器皿及耐熱用具等，可采用干熱滅菌。陳傳紅（4）

8、灼燒滅菌無菌操作的器械主要有解剖刀、鑷子、剪刀等；先將它們放入95的灑精中，用前取出在灑精燈上灼燒滅菌，后放于滅過菌的支架上，涼后立即用；通常刀和鑷子等都是兩把輪流用；一般使用70灑精的，但在實(shí)踐中我認(rèn)為使用95比70的效果要好。此外瓶口、棉塞、包口紙也常用此法滅菌。陳傳紅 制作（4）灼燒滅菌無菌操作的器械主要有解剖刀、鑷子、剪刀等；陳傳（5）布制品采用高壓滅菌布制品：如布（線）手套、帽子、套袖、工作服、口罩等。方法：洗凈、涼干，用牛皮紙包好，放入高壓鍋中滅菌即可。陳傳紅 制作（5）布制品采用高壓滅菌布制品：如布（線）手套、帽子、套袖、（6）植物材料的表面滅菌外植體（explant）：用作組織

9、培養(yǎng)的材料，即在原生長(zhǎng)部位取得并轉(zhuǎn)移到人工培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的組織切段；簡(jiǎn)單地講就是接種的植物材料。外植體的選擇原則： 優(yōu)良的種質(zhì)； 健壯的植株； 外植體大小； 外植體的時(shí)期； 細(xì)胞培養(yǎng)材料。接種（inoculate）：把處理過的材料經(jīng)無菌操作手續(xù)放置到培養(yǎng)基上的過程。陳傳紅 制作（6）植物材料的表面滅菌外植體（explant）：用作組織培 外植體表面滅菌過程為了得到無菌材料，植物組織必須先進(jìn)行消毒。消毒試劑的選擇及處理時(shí)間要依材料對(duì)試劑的敏感性而定?？捎镁凭迣?duì)組織進(jìn)行表面消毒。選材 刷洗、沖洗 用洗衣粉水或肥皂水浸洗（攪動(dòng)） 自來水沖洗 70酒精浸泡3060秒振蕩 0.1升汞310分鐘 無菌水沖

10、先35次 接種陳傳紅 制作 外植體表面滅菌過程為了得到無菌材料，植物組織必須先進(jìn)行消 常用表面滅菌劑使用濃度及效果比較表 滅菌劑 使用濃度 持續(xù)時(shí)間 去除的難易 效果 （ ） （min）次氯酸鈣 910 5 30 易 很好次氯酸鈉 2 .530 5 20 易 很好過氧化氫 1012 5 15 最易 好溴 水 12 2 10 易 很好硝酸銀 12 5 30 較難 好 氯化汞 0.11 2 15 較難 最好抗菌素 450ppm 3060 中 比較好陳傳紅 制作 常用表面滅菌劑使用濃度及效果比較表 滅菌劑 三、培養(yǎng)基及其配制1、培養(yǎng)基的種類及其組成培養(yǎng)基（Medium）：植物組織培養(yǎng)離體材料賴以生存

11、的“土壤”，是外植體生長(zhǎng)的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。培養(yǎng)基種類：基本培養(yǎng)基、完全培養(yǎng)基?；九囵B(yǎng)基組分： 大量元素、微量元素，維生素和氨基酸，糖和水。陳傳紅 制作三、培養(yǎng)基及其配制1、培養(yǎng)基的種類及其組成陳傳紅 制作 基本培養(yǎng)基最常用的有十幾種，如：MS，改良MS，White，改良White，Nitsch，MT，N6，B5，NT，Blaydes等。完全培養(yǎng)基：在基本培養(yǎng)基上根據(jù)不同要求附加一些植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)以及其它的一些有機(jī)附加產(chǎn)物。根據(jù)物理性質(zhì)分為：固體和液體培養(yǎng)基， 固體培養(yǎng)基是在液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)上添加有凝固劑所致的。陳傳紅 制作 基本培養(yǎng)基最常用的有十幾種，如：MS，改良MS，White2、 培養(yǎng)基四種

12、母液（1）大量元素： 其濃度大于0.5m mol/L的植物必須需元素。他們占植物體干重的百分之幾十至萬分之幾。如：氧、碳、氫、氮、鉀、磷、鎂、硫、鈣。（2）微量元素：其濃度小于0.5m mol/L的植物所需的元素。如：硼、錳、鋅、鉬、銅、鈷、鐵、氯等。（3） 鐵鹽：用FeSO47H2O與EDTA（乙二胺四乙酸二鈉）配成的鰲合鐵。陳傳紅 制作2、 培養(yǎng)基四種母液陳傳紅 制作（4）有機(jī)成分 維生素：硫胺素（VB1）、吡哆醇（VB6）、煙酸（VB3）、泛酸鈣（VB5）、生物素（VH）、鈷胺素（VB12）、葉酸（VBc）、抗壞血酸（VC）等等，用量一般為0.11.0mg/l。 是以各種輔酶的形式參與多

13、項(xiàng)代謝活動(dòng)，對(duì)生長(zhǎng)、分化等有很好的促進(jìn)作用。 氨基酸：甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、谷酰氨、門冬氨酸、門冬酰氨、丙氨酸等。 常用水解酪蛋白和水解乳蛋白，它們是含有約20種氨基酸的混合物，用量在101000mg/l之間。陳傳紅 制作（4）有機(jī)成分陳傳紅 制作肌醇（環(huán)已六醇）：它在糖的互相轉(zhuǎn)化中起作用。在適當(dāng)?shù)那闆r下使用，能促進(jìn)愈傷組織生長(zhǎng)、胚狀體和芽的形成。用量為50100mg/l。腺嘌呤及其硫酸鹽：可促進(jìn)芽的形成和生長(zhǎng)，難出芽的植物可試用。其它附加產(chǎn)物：椰乳、香蕉、麥芽提取物、酵母提取物、馬鈴薯塊等，它們對(duì)培養(yǎng)的某些植物的器官、組織或細(xì)胞有一定的促進(jìn)生長(zhǎng)的效應(yīng)。陳傳紅 制作肌醇（環(huán)已六醇）：它在糖的

14、互相轉(zhuǎn)化中起作用。在適當(dāng)?shù)那闆r（5）其他糖：糖作為碳源，為細(xì)胞提供合成新化合物的碳骨架，為細(xì)胞的呼吸代謝提供底物與能源，還用于維持一定的滲透勢(shì)。常用的碳源：蔗糖，葡萄糖和果糖也較常用。糖的用量一般為25。瓊脂：在固體培養(yǎng)時(shí)瓊脂是作為固化劑。用量一般在 610 g/L 之間。陳傳紅 制作（5）其他陳傳紅 制作 生長(zhǎng)素類主要生理作用： 促進(jìn)細(xì)胞伸長(zhǎng)生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂； 誘導(dǎo)受傷組織形成愈傷組織； 促進(jìn)生根; 促進(jìn)植物性別分化，使形成的雌花雌株較多; 防止落花、落果; 促進(jìn)無籽果實(shí)的形成等等。（6）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)陳傳紅 制作 生長(zhǎng)素類（6）植物生長(zhǎng)調(diào)節(jié)物質(zhì)陳傳紅 制作生長(zhǎng)素類在組織培養(yǎng)中的作用 誘導(dǎo)愈

15、傷組織； 誘導(dǎo)根形成； 與細(xì)胞分裂素配合使用，誘導(dǎo)不定芽的分 化，側(cè)芽的萌動(dòng)與生長(zhǎng)，以及胚狀體的形成等。陳傳紅 制作生長(zhǎng)素類在組織培養(yǎng)中的作用陳傳紅 制作常用的種類有：吲哚乙酸（IAA）、吲哚丁酸（IBA）、萘乙酸（NAA）、2，4二氯苯氧乙酸（2,4-D）等?；钚员容^：2，4DIBA和NAA IAA。相同濃度下，以IAA的相對(duì)活性為1，則NAA為34，2，4D則為1020。2，4D的副作用較大，使用的濃度較窄，濃度高有毒害作用，同時(shí)有抑制芽的形成作用。一般在誘導(dǎo)愈傷組織時(shí)使用，而誘導(dǎo)分化階段則只使用NAA和IBA。陳傳紅 制作常用的種類有：陳傳紅 制作 細(xì)胞分裂素類主要生理作用： 促進(jìn)細(xì)胞分

16、裂與擴(kuò)大，可使莖增粗，而抑制莖伸長(zhǎng)； 誘導(dǎo)芽的分化，促進(jìn)側(cè)芽萌發(fā)生長(zhǎng)，當(dāng)組織內(nèi)細(xì)胞分裂素/生長(zhǎng)素的比值高時(shí)，誘導(dǎo)芽的分化，這時(shí)細(xì)胞分裂素起著主導(dǎo)作用； 抑制衰老，可延緩衰老過程，有保鮮產(chǎn)效果。陳傳紅 制作 細(xì)胞分裂素類陳傳紅 制作常用的細(xì)胞分裂素有：芐基腺嘌呤（BA或BAP ）異戊烯基腺嘌呤（2-ip）糠基腺嘌呤（KT）玉米素（ZT）陳傳紅 制作常用的細(xì)胞分裂素有：陳傳紅 制作赤霉素類主要生理作用： 誘導(dǎo)莖的細(xì)胞伸長(zhǎng)，對(duì)根則無效，對(duì)矮生型植物恢復(fù)成高生型特別有效，植物組織培養(yǎng)中常用來促進(jìn)幼苗莖的伸長(zhǎng)生長(zhǎng)； 對(duì)形成層的細(xì)胞分化有影響，往往同生長(zhǎng)素有協(xié)同作用，IAA/GA比值 高有利于木質(zhì)部分化，

17、比值低有利于韌皮部分化； 代替低溫和長(zhǎng)日照，使一些兩年生植物在當(dāng)年就開花，可加快育種進(jìn)程； 打破種子、塊莖、鱗莖等休眠，使之提前萌發(fā)。 對(duì)生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的活性有增效作用。 陳傳紅 制作赤霉素類陳傳紅 制作 活性炭：可防止組織自身的酚類物質(zhì)排泌（酚污染)、變褐，對(duì)形態(tài)發(fā)生和器官形成有良好效應(yīng)。減少培養(yǎng)基的透光性，有利于根的形成發(fā)育。具有強(qiáng)大的吸附能力，主要吸附非極性物質(zhì)和色素等大分子，減少一些有害物質(zhì)的影響，但是吸附的選擇性很差，溫度低吸附力強(qiáng)，溫度高吸附力減弱，甚至解吸附。通常使用濃度為0.51.0g/l。（9）其它成分陳傳紅 制作 活性炭：（9）其它成分陳傳紅 制作抗生素主要作用：防止菌

18、類污染，減少培養(yǎng)中材料的損失，尤其是快速繁殖中采用適當(dāng)?shù)目股乇憧晒?jié)約人力、物力和時(shí)間。抗生素各有各有其抑菌譜，可單獨(dú)用，也可混用。常用的抗菌素有：青霉素、鏈霉素、土霉素、慶大霉素、金霉素等。用量在520mg/l之間。注意！抗生素只能抑制菌的生長(zhǎng)，而不能殺死各種細(xì)菌和霉菌。陳傳紅 制作抗生素陳傳紅 制作 防止褐變的添加劑褐變：植物組織在切割時(shí)會(huì)溢泌一些酚類物質(zhì)，接觸空氣中的氧氣后，自動(dòng)氧化或由酶類催化氧化為相應(yīng)的醌類，產(chǎn)生可見的茶色、褐色以致黑色的現(xiàn)象。酚類代謝是合成木質(zhì)素、芳香族氨基酸等化合物的中間途徑。是產(chǎn)生一些天然的生長(zhǎng)抑制物如香豆素、兒茶酸、綠原酸等的過程，這些物質(zhì)滲出細(xì)胞外就造成自身

19、中毒，使培養(yǎng)的材料生長(zhǎng)停頓，失去分化能力，最終變褐死亡。陳傳紅 制作 防止褐變的添加劑陳傳紅 制作抗酚類氧化藥劑半胱氨酸及其鹽酸鹽可用50200mg/l的濃度洗滌傷口表面，或過濾滅菌后加入固體培養(yǎng)基的表層。其它有：抗壞血酸、聚乙烯吡咯烷酮（PVP）、二硫蘇糖醇、谷胱甘肽、硫乙醇、二乙基二硫氨基甲酸酯等。褐變的影響因素：基因型、材料的生理狀態(tài)、培養(yǎng)基成分、培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)。防止褐變的其它方法：選擇適當(dāng)?shù)耐庵搀w和培養(yǎng)條件、連續(xù)轉(zhuǎn)移、加入活性炭、減少光照等。陳傳紅 制作抗酚類氧化藥劑半胱氨酸及其鹽酸鹽陳傳紅 制作（8）pH值培養(yǎng)基pH值影響離子的溶解度，會(huì)使一些溶解度變小的鹽類沉淀，影響到植物對(duì)各元素的

20、吸收比例，產(chǎn)生缺素癥狀。pH一般調(diào)整到5.66.0范圍內(nèi)，可用1N的HCl和NaOH調(diào)整。 pH值過高，會(huì)使得培養(yǎng)基脆而易碎； pH值過低，滅菌后培養(yǎng)基不能凝固。陳傳紅 制作（8）pH值陳傳紅 制作常用培養(yǎng)基成分表及母液濃度和用量常用培養(yǎng)基的配方（見課本附錄）陳傳紅 制作常用培養(yǎng)基成分表及母液濃度和用量陳傳紅 制作常用培養(yǎng)基的特點(diǎn)（1） 高鹽成分培養(yǎng)基包括MS、LS、BL、BM、ER等培養(yǎng)基。它們應(yīng)用最廣泛，其特點(diǎn)是鉀鹽、銨鹽及硝酸鹽含量均較高，微量元素種類齊全。陳傳紅 制作常用培養(yǎng)基的特點(diǎn)（1） 高鹽成分培養(yǎng)基陳傳紅 制作（2） 硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基如：B5、N6 (朱至清等 1975)、

21、LH、GS等培養(yǎng)基。B5培養(yǎng)基：除含有較高的鉀鹽外，還含較低的銨態(tài)氮和較高的鹽酸硫胺素，較適合南洋杉、葡萄及豆科與十字花科植物等的培養(yǎng)；N6培養(yǎng)基：適用單子葉植物花藥培養(yǎng)，柑桔花藥培養(yǎng)也適合，在楸樹、針葉樹等的組織培養(yǎng)中使用效果也好；LH培養(yǎng)基：是礦鹽濃度較高的一種培養(yǎng)基，其中銨與磷酸是同磷酸二氫銨提供的。陳傳紅 制作（2） 硝酸鉀含量較高的培養(yǎng)基陳傳紅 制作（3）中等無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基如：H培養(yǎng)基（Bourgingn 與Nitsch 1967）、尼奇培養(yǎng)基（Nitsch 1969）、米勒培養(yǎng)基（Miller 1963）。 H培養(yǎng)基：其大量元素約為MS培養(yǎng)基的一半，僅磷酸二氫鉀及氯化鈣稍低，微

22、量元素種類減少，而含量較MS為高，維生素種類比MS多，適于花藥培養(yǎng)；尼奇培養(yǎng)基：與H培養(yǎng)基成分基本相同，僅生物素比H培養(yǎng)基高10倍。與適合花藥培養(yǎng)；米勒培養(yǎng)基：適合大豆愈傷組織培養(yǎng)和花藥等培養(yǎng)用。 陳傳紅 制作（3）中等無機(jī)鹽含量的培養(yǎng)基陳傳紅 制作（4）低無機(jī)鹽培養(yǎng)基主要用于生根培養(yǎng)。如：改良White培養(yǎng)基（White 1963）、WS培養(yǎng)基(Wolter & Skoog 1966 )、克諾普培養(yǎng)基(Knop 1965)、貝爾什勞特液(Berthelot 1934)、HB培養(yǎng)基(Holley & Baker 1963)等。HB培養(yǎng)基在花卉脫毒培養(yǎng)和木本植物的莖尖培養(yǎng)中效果良好。陳傳紅 制作

23、（4）低無機(jī)鹽培養(yǎng)基陳傳紅 制作4、培養(yǎng)基的制備 （1）母液的配制和保存注意事項(xiàng)：一般配成所需濃度的10100倍；各種藥品要充分溶解后才能混合；混合時(shí)其稀釋度要大，慢慢混合，邊混合邊攪拌；混合時(shí)注意先后次序，把含鈣離子的化合物要最后混合；稱量時(shí)規(guī)范操作；配好的母液要標(biāo)明名稱、倍數(shù)、日期等；母液一般放在24冰箱中保存。陳傳紅 制作4、培養(yǎng)基的制備 （1）母液的配制和保存陳傳紅 制作（2）培養(yǎng)基的配制程序水藥品 混合 加入生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑 pH調(diào)整糖瓊脂 加熱溶解 玻璃器皿 清洗 干燥 分裝 接種 冷卻凝固 高壓蒸汽滅菌 封口陳傳紅 制作（2）培養(yǎng)基的配制程序陳傳紅 制作（3）pH的調(diào)整pH值，一會(huì)影響

24、到對(duì)離子的吸收；二會(huì)影響培養(yǎng)基的凝固；故培養(yǎng)基配制好后，調(diào)整pH值就十分重要。一般用1N的NaOH與1N的HCl來調(diào)整。培養(yǎng)基經(jīng)高溫高壓滅菌后，其pH值會(huì)下降0.10.2。（4）培養(yǎng)基的分裝和滅菌陳傳紅 制作（3）pH的調(diào)整陳傳紅 制作四、培養(yǎng)條件的控制離體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：在人工控制的環(huán)境條件下，研究培養(yǎng)物的生長(zhǎng)發(fā)育等生命活動(dòng)。包括：光照、濕度、溫度、氣體等條件的調(diào)控。區(qū)別于大田栽培及溫室栽培的不同特點(diǎn)。把專門研究離體培養(yǎng)的環(huán)境條件控制的研究?jī)?nèi)容稱為離體生態(tài)學(xué)（In vitro Ecology）。陳傳紅 制作四、培養(yǎng)條件的控制離體培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：在人工控制的環(huán)境條件下，研1、光照對(duì)離體培養(yǎng)物的生長(zhǎng)發(fā)育

25、，光照條件有重要的作用。光照參數(shù)：光照強(qiáng)度、光照時(shí)間和光波長(zhǎng)短。普通培養(yǎng)室要求每日光照時(shí)間為1216h；光照強(qiáng)度約10005000lx；波長(zhǎng)一般為普通日光燈的波長(zhǎng)。培養(yǎng)物不同，對(duì)光照的要求也不同。陳傳紅 制作1、光照對(duì)離體培養(yǎng)物的生長(zhǎng)發(fā)育，光照條件有重要的作用。陳傳紅對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)，黑暗條件有利于其生長(zhǎng)；百合在黑暗條件下，長(zhǎng)出小鱗莖，在光照條件下，長(zhǎng)出葉片。器官的分化需要有光照，不同光波對(duì)器官分化有密切關(guān)系，如煙草愈傷組織的分化，藍(lán)光區(qū)起主要作用；壯苗培養(yǎng)要加強(qiáng)光照，有利于試管苗的移栽成活。陳傳紅 制作對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)，黑暗條件有利于其生長(zhǎng)；百合在黑暗條件下，長(zhǎng)2、溫度溫度對(duì)培養(yǎng)物生長(zhǎng)作用更為明顯，低于15或高于35對(duì)培養(yǎng)物生長(zhǎng)都不利。一般培養(yǎng)室內(nèi)的溫度控制在252。不同植物有著