血清尿素氮BUN谷氨酸脫氫酶測(cè)定法

1、血清尿素氮BUN谷氨酸脫氫酶測(cè)定法實(shí)驗(yàn)原理脲酶-谷氨酸脫氫酶（Urease-GLDH）連續(xù)監(jiān)測(cè)法。尿素被脲酶水解產(chǎn)氨。在NADH的存在下，氨和-酮戊二酸反應(yīng)生成谷氨酸，NADH同時(shí)被氧化成NAD。NADH的減少和樣品中尿素濃度成正比。本法是連續(xù)監(jiān)測(cè)法。 脲酶尿素 + 2H2O 2 NH4 + 2 HCO3 谷氨酸脫氫酶NH4+-酮戊二酸+NADH L-谷氨酸+NAD+H2O2 標(biāo)本：2.1 病人準(zhǔn)備：血清無(wú)特殊要求。要留取24小時(shí)尿樣。2.2 類(lèi)型：血清、血漿（不可使用肝素銨）、新鮮尿液。無(wú)溶血和凝塊的血清，如果必須使用血漿，建議使用無(wú)銨離子的抗凝血?jiǎng)?，如EDTA和肝素鈉。用新鮮尿液作樣品時(shí)，

2、用蒸餾水作1:100稀釋。3. 標(biāo)本存放：血清或血漿穩(wěn)定性：425保存可穩(wěn)定7天；-20保存可穩(wěn)定1年。尿液穩(wěn)定性：2025保存可穩(wěn)定2天；48保存可穩(wěn)定7天；-20保存可穩(wěn)定1個(gè)月。4. 標(biāo)本運(yùn)輸：常溫條件下保存運(yùn)輸。5. 標(biāo)本拒收標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)菌污染的標(biāo)本。6. 實(shí)驗(yàn)材料6.1 試劑：奧林巴斯尿素測(cè)定試劑盒 試劑1：試劑2： 6.1.1 試劑準(zhǔn)備：試劑為即用式。6.1.2 試劑穩(wěn)定性與貯存試劑保存于225，若無(wú)污染，可穩(wěn)定至失效期。試劑不可冰凍。6.1.3 變質(zhì)指示：當(dāng)試劑有看得見(jiàn)的微生物生長(zhǎng)，有濁度，或者未開(kāi)蓋的液體有沉淀時(shí)，表明試劑已變質(zhì)，不能繼續(xù)使用。6.1.4 注意事項(xiàng)：此試劑為體外診斷

3、用。不要入口，吞下有害。保護(hù)劑為疊氮鈉，避免接觸皮膚及粘膜，與下水管中的鉛反應(yīng)形成爆炸性化合物，即使只含有少量的疊氮鈉，如果排向下水道請(qǐng)用大量的水沖洗。應(yīng)采取必要的預(yù)防措施使用試劑。6.2 校準(zhǔn)品：使用奧林巴斯公司提供的校準(zhǔn)品對(duì)自動(dòng)分析儀進(jìn)行校準(zhǔn)，具體參見(jiàn)生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。6.3 質(zhì)控品：具體參見(jiàn)生化檢驗(yàn)校準(zhǔn)品和質(zhì)控品.SOP文件。7. 儀器：奧林巴斯AU2700生化分析儀8. 操作步驟8.1 項(xiàng)目基本參數(shù)：參見(jiàn)生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU2700生化分析儀項(xiàng)目測(cè)定參數(shù).SOP文件8.2 儀器操作步驟：參見(jiàn)生化檢驗(yàn)奧林巴斯AU2700生化分析儀操作規(guī)程.SOP文件9. 檢驗(yàn)結(jié)果的判斷

4、與分析10. 質(zhì)量控制：在每一批標(biāo)本中都應(yīng)把非定值血清水平I與II質(zhì)控做為未知標(biāo)本進(jìn)行分析，以2S為質(zhì)控警告限，3S為失控限，繪制質(zhì)控圖，判斷是否在控。質(zhì)控規(guī)則參見(jiàn)生化室室內(nèi)質(zhì)控操作規(guī)程.SOP文件。11. 計(jì)算方法：以TruCal U復(fù)合校準(zhǔn)品尿素氮校準(zhǔn)值校準(zhǔn)儀器后，在病人結(jié)果可報(bào)告范圍內(nèi)，儀器直接報(bào)告可靠的檢測(cè)結(jié)果，以mmol/L報(bào)告。將尿素量乘以系數(shù)2.8可以換算成尿素氮量；將尿素氮量乘以系數(shù)0.357可以換算成尿素量。手工測(cè)定計(jì)算方法為： Au尿素氮濃度（mmol/L） 校準(zhǔn)液濃度 As12. 參考值范圍血清/血漿1成人（mmol/L）全球 2.87.2女性50歲 3.57.5男性50

5、歲 3.09.2兒童13歲 1.86.0413歲 2.56.01419歲 2.97.5尿素/肌酐比率1 2540(mmol/L)/(mmol/L)尿液2 0.430.72mol/d（注：各實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有自己的參考范圍。）參考值因性別、年齡、飲食和地域的不同而有所差別。根據(jù)好的實(shí)驗(yàn)室經(jīng)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)建立自己的參考值。13. 臨床意義：尿素是蛋白質(zhì)分解代謝的含氮終產(chǎn)物。高尿素血癥或氮血癥表現(xiàn)為血液中尿素水平升高。鑒別腎前和腎后氮血癥時(shí)可以同時(shí)檢測(cè)尿素和肌酐。因脫水、蛋白質(zhì)代謝增加、皮質(zhì)醇治療或腎臟灌注減少等引起的腎前氮血癥，表現(xiàn)為尿素水平升高而肌酐水平正常。由泌尿管道阻塞引起的腎后氮血癥，表現(xiàn)為尿素

6、和肌酐水平都升高，但肌酐升高程度較小。發(fā)生腎病時(shí)，腎小球?yàn)V過(guò)作用明顯下降或蛋白質(zhì)攝入量大于200 g/天都會(huì)導(dǎo)致尿素濃度升高。尿素氮的檢測(cè)用于診斷和治療某些腎臟疾病和代謝紊亂。尿素氮大約占血液中非蛋白氮的75%。它通過(guò)肝臟中的氨進(jìn)行合成，是蛋白質(zhì)脫氨作用的產(chǎn)物。通過(guò)腎小球從血液中過(guò)濾尿素到尿中，是消除體內(nèi)多余氮的主要方法。血液尿素氮（BUN）水平是腎功能以及腎前狀態(tài)和腎后狀態(tài)的度量標(biāo)準(zhǔn)，腎前因素引起的BUN的升高包括心臟代償失調(diào)，缺水或增加的蛋白質(zhì)分解代謝。水平增加的腎臟因素有急性腎小球腎炎，慢性腎炎，多囊腎，腎纖維化和腎小管壞死。任何類(lèi)型的泌尿道的梗塞受阻是BUN水平升高的腎后因素1。腎小球

7、清除尿素和肌酸酐，但是，尿素隨后部分地被腎小管重吸收，然而肌酸酐卻不會(huì)。因此，血清尿素氮和血清肌酸酐測(cè)定經(jīng)常同時(shí)用于腎功能的不同診斷中。14. 操作性能14.1 線(xiàn)性范圍：0.350mmol/L14.2 精密度：精密度的評(píng)估是根據(jù)NCCLS推薦的標(biāo)準(zhǔn)方法，AU2700批內(nèi)不精密度小于3%，總不精密度小于5%。用于分析的質(zhì)控血清和數(shù)據(jù)處理符合以上的NCCLS的規(guī)則。批內(nèi)精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)天間精密度n=20(mmol/L)s(mmol/L)CV(%)樣品14.960.275.41樣品15.230.305.79樣品28.770.273.13樣品28.770.3

8、43.87樣品319.480.251.27樣品319.480.552.8614.3 方法學(xué)比較：本公司的試劑(y)與某商品化試劑(x)，同時(shí)對(duì)68個(gè)樣品進(jìn)行Urea檢測(cè)，將檢測(cè)結(jié)果作方法學(xué)比較，其統(tǒng)計(jì)結(jié)果如下：y=0.99x+0.176mmol/L；r=0.999。14.4 靈敏度：本試劑的檢測(cè)限為0.3mmol/L。14.5 病人結(jié)果可報(bào)告范圍：0.350mmol/L15. 超出范圍結(jié)果處理：本法線(xiàn)性上限血清/血漿為50mmol/L、尿液為5mol/L。如樣品測(cè)定值超過(guò)上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9%的氯化鈉溶液作1:2稀釋?zhuān)匦聹y(cè)定，結(jié)果乘以3。16. 病危報(bào)警值的處理：當(dāng)尿素氮測(cè)定值36mmo

9、l/L時(shí)，在經(jīng)過(guò)復(fù)查等確認(rèn)手段處理后應(yīng)及時(shí)向臨床主管醫(yī)生匯報(bào)。17. 方法局限性17.1 本法線(xiàn)性上限血清/血漿為50mmol/L、尿液為5mol/L。如樣品測(cè)定值超過(guò)上限時(shí)，應(yīng)將樣品用0.9%的氯化鈉溶液作1:2稀釋?zhuān)匦聹y(cè)定，結(jié)果乘以3。17.2 干擾物質(zhì)：當(dāng)樣品中抗壞血酸濃度1704mol/L，膽紅素濃度684mol/L，血紅蛋白濃度5.00g/L，甘油三酯濃度22.6mmol/L時(shí)沒(méi)有觀察到干擾。銨離子會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果，因此收集血漿時(shí)勿用肝素銨抗凝！18. 補(bǔ)救措施：當(dāng)儀器發(fā)生故障時(shí)，迅速聯(lián)系儀器廠家進(jìn)行維修。19. 參考文獻(xiàn) Thomas L, editor. Clinical lab

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