第5組缺氧動物模型復制

1、缺氧動物模型及中樞神經系統(tǒng)功能抑制和低溫對缺氧的影響浙江大學醫(yī)學院臨床醫(yī)學專業(yè)3A 班 5 組乏氧性缺氧和血液性缺氧的動物模型方法；觀察缺氧過程中呼吸的摘要 目的 學習反應及血液色澤和全身一般情況的變化；了解溫度和中樞神經系統(tǒng)機能狀態(tài)對缺氧耐受的影響以及對照實驗和控制實驗條件重要性。方法 給小白鼠注射氯丙嗪并放在冰浴的紗布上以抑制中樞神經系統(tǒng)功能，觀察其對缺氧的影響。分別通過密閉瓶、CO 吸入、注射亞硝酸鈉來不同的缺氧動物模型。 結果 氯丙嗪加冰浴組小鼠的存活時間為 43.012.9min，顯著長于對照組小鼠存活時間 15.33.6min（p0.01）。氯丙嗪加冰組和對照組小鼠的總耗氧量分別為

2、 17.64.9mL 和 18.23.5mL。氯丙嗪加冰浴組小鼠的總耗氧率為 5.000.89%，對照組小鼠的總耗氧率為 1.940.46%，兩者存在顯著差異（p0.01）。亞硝酸鈉組小鼠的存活時間為 8.82.6min，顯著小于亞硝酸鈉加美蘭組小鼠的存活時間 15.15.2min（p0.01）。乏氧型缺氧小鼠肝臟呈暗紅色，CO小鼠肝臟呈櫻桃紅色，NaNO2小鼠肝臟呈深咖啡色，NaNO2且用美蘭治療小鼠肝臟呈淺咖啡色。結論 腹腔注射氯丙嗪加冰浴可延長在缺氧環(huán)境中的存活時間。CO、NaNO2可縮短小鼠的存活時間，降低呼吸頻率，造成小鼠血液型缺氧。美蘭可以在一定程度上對抗 NaNO2，延長小鼠的存

3、活時間。 缺氧模型 氯丙嗪 一氧化碳 亞硝酸鈉 美蘭1.材料1.1實驗動物: 小鼠(mouse)1.2藥品和試劑: 0.25%氯丙嗪(chlorpromazine) 、鈉石灰（soda Lime）1.3器械: 密閉瓶、注射器，測耗氧裝置（oxygen consumption gauge）1.4 小鼠捉拿方法右手抓鼠尾 鼠尾略向后拉左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后項背部皮毛 以無名指及小指鼠尾 左手翻轉使鼠腹部朝上,頭略朝下。1.5 小鼠腹腔注射右手持注射器45 度角刺入腹白線偏左的下腹部，進針 3mm 左右有落空感時表示已進入腹腔，回抽無腸液、尿液（有空氣）即可注射。切誤使針頭向上注射，以防針頭

4、刺傷內臟。1.6 實驗動物分組、處理1.7 總耗氧率計算公式：總耗氧率=總耗氧量(mL)鼠重(g)存活時間(min)1.8 數據處理數據以xs 表示，顯著性差異采用 t 檢驗。2.方法2.1 中樞神經系統(tǒng)機能狀況和低溫對缺氧耐受性的影響取 2 只相同體重相近的小鼠，準確稱取體重（W），并隨機分為生理鹽水組和氯丙嗪組。生理鹽水組按 0.1ml/10g 體重腹腔注射生理鹽水，并置于室溫中；氯丙嗪組按 0.1ml/10g體重腹腔注射 0.25氯丙嗪，并放置在冰浴的紗布上，待呼吸頻率降至 70 次/min 后，將 2只小鼠分別放入盛有鈉石灰的 125mL 廣口瓶內，連接好測耗氧裝置。觀察小鼠的活動情況

5、。從密閉測耗氧裝置開始計時至小鼠，小鼠的存活時間（T）。待小鼠后從量筒讀出液面下降的體積（mL），即為小鼠的總耗氧量（A）。解剖生理鹽水組小鼠尸體，將肝、肺置于濾紙上，觀察并血液和臟器顏色。根據總耗氧量、存活時間、鼠體重三項指標，按以下公式計算：RmL/（gmin）=A（mL）/W（g）T（min）2.2CO和乏氧模型取 2 只相同體重相近的小鼠隨機分為乏氧性缺氧組和一氧化碳組。乏氧性缺氧組小鼠放入含有 5g 鈉石灰的 100ml 密閉瓶中；一氧化碳組小鼠放入 500ml 密閉瓶，注入 10ml CO 氣體。注入 CO 或放入鈉石灰的小鼠的時間。解剖小鼠尸體肝和血液顏色變化。2.3 亞硝酸鈉取

6、相同、體重相近的小鼠 2 只，隨機分為亞硝酸鈉組和亞硝酸鈉加亞甲藍組。觀察皮膚黏膜顏色。2 只小鼠分別腹腔注射 0.2mL 亞硝酸鈉。亞硝酸鈉加亞甲藍組小鼠在注射亞硝酸鈉后立即注射 0.2mL 亞甲藍，亞硝酸鈉組小鼠在注射亞硝酸鈉后注射生理鹽水0.2mL。小鼠表現(xiàn)、皮膚黏膜顏色變化及時間。解剖小鼠尸體，肝臟和血液顏色變化。2.4 統(tǒng)計方法小鼠存活時間及耗氧率以XS 表示，統(tǒng)計學分析采用 t 檢驗。小鼠存活率用百分率表示，統(tǒng)計學分析用卡方檢驗。結果氯丙嗪加冰浴對小鼠耐氧性的影響氯丙嗪加冰浴組小鼠的存活時間 43.012.9min 明顯大于對照組小鼠存活時間15.33.6min，兩者存在高度顯著性

7、差異（p0.01）。氯丙嗪加冰組和對照組小鼠的總耗氧量分別為 17.64.9mL 和 18.23.5mL。氯丙嗪加冰浴組小鼠的總耗氧率為 5.000.89%，對照組小鼠的總耗氧率為 1.940.46%，兩者間存在高度顯著性差異（p0.01）。見表 1。3.2 亞硝酸鈉及美蘭的治療效果亞硝酸鈉組小鼠的存活時間為 8.82.6min，明顯小于亞硝酸鈉加美蘭組小鼠的存活時間 15.15.2min，兩者間存在高度顯著性差異（p0.01）。3.3 乏氧、CO、亞硝酸鈉小鼠的呼吸頻率乏氧型缺氧小鼠于 5min，且隨著氧總量的減少小鼠呼吸頻率加快；CO小鼠在 12min 時，隨著 CO程度的加深，呼吸頻率呈

8、增高態(tài)勢；NaNO2小鼠在 12min時，隨注射NaNO2 后時間的推移，呼吸頻率逐漸加快；而用美蘭解毒的小鼠，存活時間為 24min，且呼吸頻率先加快后減慢。3.4 不同原因缺氧小鼠皮膚及肝臟顏色的特征變化乏氧型缺氧耳、尾、口唇顏色青紫色，肝血顏色色。CO耳、尾、口唇顏色和肝血顏色均為櫻桃紅色。NaNO2耳、尾、口唇顏色為青石板色，肝血顏色為深咖啡色。NaNO2+美蘭組耳、尾、口唇顏色為稍淺的青石板色，肝血顏色為淺咖啡色。4.4.1 中樞神經系統(tǒng)功能抑制和低溫對缺氧的影響中樞神經系統(tǒng)功能抑制和低溫可以提高小鼠的耐氧性。氯丙嗪為吩噻嗪類抗藥物，對中樞神經系統(tǒng)有抑制作用，起到安定效果。它阻斷 D

9、A 受體、5-HT 受體、M 膽堿手頭、腎上腺素受體，因此作用廣泛，副作用也多。小鼠注射氯丙嗪后，能明顯減少自發(fā)活動，配合物理降溫（冰浴、冰袋）可誘使其進入假冬眠狀態(tài)。此時，小鼠體溫降低、基礎代謝及組織耗氧量減少，增強了小鼠對缺氧的耐受力。因此，在氧總量相等的條件下，氯丙嗪加冰浴組小鼠的存活時間長于生理鹽水組。4.2 不同原因造成的缺氧缺氧是指當供應組織的氧，或組織利用氧時，機體的機能和代謝發(fā)生異常變化的病理過程。缺氧時多種疾病共有的病理過程。根據缺氧的原因不同可將缺氧分為乏氧性缺氧，血液性缺氧，循環(huán)性缺氧和組織缺氧四種類型。不同類型的缺氧，其機體的代償適應性反應和癥狀表現(xiàn)有所不同。乏氧性缺氧

10、，主要特征是動脈血氧分壓降低，動脈血氧含量的血液中脫氧血紅蛋白濃度約為 2.6g/dl。乏氧性缺氧降低，組織供氧。正常毛細時，動靜脈血中的脫氧血紅蛋白濃度增高。當毛細血液中脫氧血紅蛋白濃度達到或超過5g/dl 時，皮膚和粘膜呈青紫色，即為發(fā)紺。4.3COCO時，可引起血液性缺氧。CO 與血紅蛋白結合形成碳氧血紅蛋白，由于 CO 與血紅蛋白的親和力比氧與血紅蛋白的親和力高 210 倍，當吸入氣中含 0.1的 CO 時，血液中有 50%的血紅蛋白成為碳氧血紅蛋白而失去攜氧能力。同時，CO 還可抑制紅細胞的糖酵解，使 2，3二磷酸甘油酸生成減少，氧離曲線左移，HbO2 中的氧氣不易，從而加重組織缺氧

11、。當血液中的 HbCO 增加至 1020%時，動物可出現(xiàn)頭痛、乏力、眩暈、等癥狀；增至 50%時，可迅速出現(xiàn)痙攣、呼吸、，甚至。此時，由于動物動脈血氧分壓不降低，而含過多的HbCO，故其皮膚、粘膜呈櫻桃紅色。4.4 亞硝酸鹽正常時，血紅蛋白中的鐵主要以二價鐵的形式存在，亞硝酸鹽作為氧化劑可使血紅素中的二價鐵氧化成三價鐵，形成高鐵血紅蛋白，導致高鐵血紅蛋白血癥。高鐵血紅蛋白中的三價鐵因與羥基結合牢固而失去結合氧的能力，或者血紅蛋白分子中的四個二價鐵中有部分氧化成三價鐵，剩余的二價鐵雖能結合氧，但不易解離，導致氧離曲線左移，使組織缺氧。亞硝酸鹽等氧化劑時，如高鐵血紅蛋白含量超過血紅蛋白總量的 10

12、，就可出現(xiàn)缺氧表現(xiàn)；嚴重時，皮膚和粘膜可出現(xiàn)青紫色。低濃度美藍是一種還原劑，可抑制氧化劑所產生的反應。5.參考文獻1藥理學 人民衛(wèi)生2011 150151.2、生理科學實驗浙江大學2012 225227.附錄：表 1.氯丙嗪、冰浴對小鼠耐氧性的影響小鼠體重（g）存活時間（min）總耗氧量（mL）總耗氧率（%）樣本對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組對照組實驗組12323175921215.371.5522223173519.121.25.102.6332222164519195.401.9242424124818.5176.421.4852222195720.5164.901.2862324174016184.091.8872222165219225.401.92822227195.110.63.252.349242416.532.220195.052.4622.670 22.890 15.33. 43.012 17.64.18.23.xs5.000.891.940.46#.87.936.9*95P(t-test)/1.22446E-05/9.76152E-08注：*p0.01 vs對照組。表 2 亞硝酸鈉和美蘭解毒的效果注：第 1 組實驗數據廢棄表 3.乏氧、CO