第5組缺氧動(dòng)物模型復(fù)制

1、缺氧動(dòng)物模型及中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對(duì)缺氧的影響浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床醫(yī)學(xué)專業(yè)3A 班 5 組乏氧性缺氧和血液性缺氧的動(dòng)物模型方法；觀察缺氧過程中呼吸的摘要 目的 學(xué)習(xí)反應(yīng)及血液色澤和全身一般情況的變化；了解溫度和中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能狀態(tài)對(duì)缺氧耐受的影響以及對(duì)照實(shí)驗(yàn)和控制實(shí)驗(yàn)條件重要性。方法 給小白鼠注射氯丙嗪并放在冰浴的紗布上以抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能，觀察其對(duì)缺氧的影響。分別通過密閉瓶、CO 吸入、注射亞硝酸鈉來不同的缺氧動(dòng)物模型。 結(jié)果 氯丙嗪加冰浴組小鼠的存活時(shí)間為 43.012.9min，顯著長(zhǎng)于對(duì)照組小鼠存活時(shí)間 15.33.6min（p0.01）。氯丙嗪加冰組和對(duì)照組小鼠的總耗氧量分別為

2、 17.64.9mL 和 18.23.5mL。氯丙嗪加冰浴組小鼠的總耗氧率為 5.000.89%，對(duì)照組小鼠的總耗氧率為 1.940.46%，兩者存在顯著差異（p0.01）。亞硝酸鈉組小鼠的存活時(shí)間為 8.82.6min，顯著小于亞硝酸鈉加美蘭組小鼠的存活時(shí)間 15.15.2min（p0.01）。乏氧型缺氧小鼠肝臟呈暗紅色，CO小鼠肝臟呈櫻桃紅色，NaNO2小鼠肝臟呈深咖啡色，NaNO2且用美蘭治療小鼠肝臟呈淺咖啡色。結(jié)論 腹腔注射氯丙嗪加冰浴可延長(zhǎng)在缺氧環(huán)境中的存活時(shí)間。CO、NaNO2可縮短小鼠的存活時(shí)間，降低呼吸頻率，造成小鼠血液型缺氧。美蘭可以在一定程度上對(duì)抗 NaNO2，延長(zhǎng)小鼠的存

3、活時(shí)間。 缺氧模型 氯丙嗪 一氧化碳 亞硝酸鈉 美蘭1.材料1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物: 小鼠(mouse)1.2藥品和試劑: 0.25%氯丙嗪(chlorpromazine) 、鈉石灰（soda Lime）1.3器械: 密閉瓶、注射器，測(cè)耗氧裝置（oxygen consumption gauge）1.4 小鼠捉拿方法右手抓鼠尾 鼠尾略向后拉左手的拇指和食指抓住小鼠兩耳后項(xiàng)背部皮毛 以無名指及小指鼠尾 左手翻轉(zhuǎn)使鼠腹部朝上,頭略朝下。1.5 小鼠腹腔注射右手持注射器45 度角刺入腹白線偏左的下腹部，進(jìn)針 3mm 左右有落空感時(shí)表示已進(jìn)入腹腔，回抽無腸液、尿液（有空氣）即可注射。切誤使針頭向上注射，以防針頭

4、刺傷內(nèi)臟。1.6 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、處理1.7 總耗氧率計(jì)算公式：總耗氧率=總耗氧量(mL)鼠重(g)存活時(shí)間(min)1.8 數(shù)據(jù)處理數(shù)據(jù)以xs 表示，顯著性差異采用 t 檢驗(yàn)。2.方法2.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)機(jī)能狀況和低溫對(duì)缺氧耐受性的影響取 2 只相同體重相近的小鼠，準(zhǔn)確稱取體重（W），并隨機(jī)分為生理鹽水組和氯丙嗪組。生理鹽水組按 0.1ml/10g 體重腹腔注射生理鹽水，并置于室溫中；氯丙嗪組按 0.1ml/10g體重腹腔注射 0.25氯丙嗪，并放置在冰浴的紗布上，待呼吸頻率降至 70 次/min 后，將 2只小鼠分別放入盛有鈉石灰的 125mL 廣口瓶?jī)?nèi)，連接好測(cè)耗氧裝置。觀察小鼠的活動(dòng)情況

5、。從密閉測(cè)耗氧裝置開始計(jì)時(shí)至小鼠，小鼠的存活時(shí)間（T）。待小鼠后從量筒讀出液面下降的體積（mL），即為小鼠的總耗氧量（A）。解剖生理鹽水組小鼠尸體，將肝、肺置于濾紙上，觀察并血液和臟器顏色。根據(jù)總耗氧量、存活時(shí)間、鼠體重三項(xiàng)指標(biāo)，按以下公式計(jì)算：RmL/（gmin）=A（mL）/W（g）T（min）2.2CO和乏氧模型取 2 只相同體重相近的小鼠隨機(jī)分為乏氧性缺氧組和一氧化碳組。乏氧性缺氧組小鼠放入含有 5g 鈉石灰的 100ml 密閉瓶中；一氧化碳組小鼠放入 500ml 密閉瓶，注入 10ml CO 氣體。注入 CO 或放入鈉石灰的小鼠的時(shí)間。解剖小鼠尸體肝和血液顏色變化。2.3 亞硝酸鈉取

6、相同、體重相近的小鼠 2 只，隨機(jī)分為亞硝酸鈉組和亞硝酸鈉加亞甲藍(lán)組。觀察皮膚黏膜顏色。2 只小鼠分別腹腔注射 0.2mL 亞硝酸鈉。亞硝酸鈉加亞甲藍(lán)組小鼠在注射亞硝酸鈉后立即注射 0.2mL 亞甲藍(lán)，亞硝酸鈉組小鼠在注射亞硝酸鈉后注射生理鹽水0.2mL。小鼠表現(xiàn)、皮膚黏膜顏色變化及時(shí)間。解剖小鼠尸體，肝臟和血液顏色變化。2.4 統(tǒng)計(jì)方法小鼠存活時(shí)間及耗氧率以XS 表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用 t 檢驗(yàn)。小鼠存活率用百分率表示，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析用卡方檢驗(yàn)。結(jié)果氯丙嗪加冰浴對(duì)小鼠耐氧性的影響氯丙嗪加冰浴組小鼠的存活時(shí)間 43.012.9min 明顯大于對(duì)照組小鼠存活時(shí)間15.33.6min，兩者存在高度顯著性

7、差異（p0.01）。氯丙嗪加冰組和對(duì)照組小鼠的總耗氧量分別為 17.64.9mL 和 18.23.5mL。氯丙嗪加冰浴組小鼠的總耗氧率為 5.000.89%，對(duì)照組小鼠的總耗氧率為 1.940.46%，兩者間存在高度顯著性差異（p0.01）。見表 1。3.2 亞硝酸鈉及美蘭的治療效果亞硝酸鈉組小鼠的存活時(shí)間為 8.82.6min，明顯小于亞硝酸鈉加美蘭組小鼠的存活時(shí)間 15.15.2min，兩者間存在高度顯著性差異（p0.01）。3.3 乏氧、CO、亞硝酸鈉小鼠的呼吸頻率乏氧型缺氧小鼠于 5min，且隨著氧總量的減少小鼠呼吸頻率加快；CO小鼠在 12min 時(shí)，隨著 CO程度的加深，呼吸頻率呈

8、增高態(tài)勢(shì)；NaNO2小鼠在 12min時(shí)，隨注射NaNO2 后時(shí)間的推移，呼吸頻率逐漸加快；而用美蘭解毒的小鼠，存活時(shí)間為 24min，且呼吸頻率先加快后減慢。3.4 不同原因缺氧小鼠皮膚及肝臟顏色的特征變化乏氧型缺氧耳、尾、口唇顏色青紫色，肝血顏色色。CO耳、尾、口唇顏色和肝血顏色均為櫻桃紅色。NaNO2耳、尾、口唇顏色為青石板色，肝血顏色為深咖啡色。NaNO2+美蘭組耳、尾、口唇顏色為稍淺的青石板色，肝血顏色為淺咖啡色。4.4.1 中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫對(duì)缺氧的影響中樞神經(jīng)系統(tǒng)功能抑制和低溫可以提高小鼠的耐氧性。氯丙嗪為吩噻嗪類抗藥物，對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，起到安定效果。它阻斷 D

9、A 受體、5-HT 受體、M 膽堿手頭、腎上腺素受體，因此作用廣泛，副作用也多。小鼠注射氯丙嗪后，能明顯減少自發(fā)活動(dòng)，配合物理降溫（冰浴、冰袋）可誘使其進(jìn)入假冬眠狀態(tài)。此時(shí)，小鼠體溫降低、基礎(chǔ)代謝及組織耗氧量減少，增強(qiáng)了小鼠對(duì)缺氧的耐受力。因此，在氧總量相等的條件下，氯丙嗪加冰浴組小鼠的存活時(shí)間長(zhǎng)于生理鹽水組。4.2 不同原因造成的缺氧缺氧是指當(dāng)供應(yīng)組織的氧，或組織利用氧時(shí)，機(jī)體的機(jī)能和代謝發(fā)生異常變化的病理過程。缺氧時(shí)多種疾病共有的病理過程。根據(jù)缺氧的原因不同可將缺氧分為乏氧性缺氧，血液性缺氧，循環(huán)性缺氧和組織缺氧四種類型。不同類型的缺氧，其機(jī)體的代償適應(yīng)性反應(yīng)和癥狀表現(xiàn)有所不同。乏氧性缺氧

10、，主要特征是動(dòng)脈血氧分壓降低，動(dòng)脈血氧含量的血液中脫氧血紅蛋白濃度約為 2.6g/dl。乏氧性缺氧降低，組織供氧。正常毛細(xì)時(shí)，動(dòng)靜脈血中的脫氧血紅蛋白濃度增高。當(dāng)毛細(xì)血液中脫氧血紅蛋白濃度達(dá)到或超過5g/dl 時(shí)，皮膚和粘膜呈青紫色，即為發(fā)紺。4.3COCO時(shí)，可引起血液性缺氧。CO 與血紅蛋白結(jié)合形成碳氧血紅蛋白，由于 CO 與血紅蛋白的親和力比氧與血紅蛋白的親和力高 210 倍，當(dāng)吸入氣中含 0.1的 CO 時(shí)，血液中有 50%的血紅蛋白成為碳氧血紅蛋白而失去攜氧能力。同時(shí)，CO 還可抑制紅細(xì)胞的糖酵解，使 2，3二磷酸甘油酸生成減少，氧離曲線左移，HbO2 中的氧氣不易，從而加重組織缺氧

11、。當(dāng)血液中的 HbCO 增加至 1020%時(shí)，動(dòng)物可出現(xiàn)頭痛、乏力、眩暈、等癥狀；增至 50%時(shí)，可迅速出現(xiàn)痙攣、呼吸、，甚至。此時(shí)，由于動(dòng)物動(dòng)脈血氧分壓不降低，而含過多的HbCO，故其皮膚、粘膜呈櫻桃紅色。4.4 亞硝酸鹽正常時(shí)，血紅蛋白中的鐵主要以二價(jià)鐵的形式存在，亞硝酸鹽作為氧化劑可使血紅素中的二價(jià)鐵氧化成三價(jià)鐵，形成高鐵血紅蛋白，導(dǎo)致高鐵血紅蛋白血癥。高鐵血紅蛋白中的三價(jià)鐵因與羥基結(jié)合牢固而失去結(jié)合氧的能力，或者血紅蛋白分子中的四個(gè)二價(jià)鐵中有部分氧化成三價(jià)鐵，剩余的二價(jià)鐵雖能結(jié)合氧，但不易解離，導(dǎo)致氧離曲線左移，使組織缺氧。亞硝酸鹽等氧化劑時(shí)，如高鐵血紅蛋白含量超過血紅蛋白總量的 10

12、，就可出現(xiàn)缺氧表現(xiàn)；嚴(yán)重時(shí)，皮膚和粘膜可出現(xiàn)青紫色。低濃度美藍(lán)是一種還原劑，可抑制氧化劑所產(chǎn)生的反應(yīng)。5.參考文獻(xiàn)1藥理學(xué) 人民衛(wèi)生2011 150151.2、生理科學(xué)實(shí)驗(yàn)浙江大學(xué)2012 225227.附錄：表 1.氯丙嗪、冰浴對(duì)小鼠耐氧性的影響小鼠體重（g）存活時(shí)間（min）總耗氧量（mL）總耗氧率（%）樣本對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組實(shí)驗(yàn)組12323175921215.371.5522223173519.121.25.102.6332222164519195.401.9242424124818.5176.421.4852222195720.5164.901.2862324174016184.091.8872222165219225.401.92822227195.110.63.252.349242416.532.220195.052.4622.670 22.890 15.33. 43.012 17.64.18.23.xs5.000.891.940.46#.87.936.9*95P(t-test)/1.22446E-05/9.76152E-08注：*p0.01 vs對(duì)照組。表 2 亞硝酸鈉和美蘭解毒的效果注：第 1 組實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)廢棄表 3.乏氧、CO