實驗5-2-酵母菌細胞數(shù)量和大小的測定

1、實驗5-2 酵母菌細胞數(shù)量、大小的測定一、實驗目的 1、學習利用血球計數(shù)板直接計數(shù)微生物細胞的方法 2、學習測定微生物細胞大小的方法 二、實驗材料1、菌種：釀酒酵母培養(yǎng)液2、器材：血球計數(shù)板、目鏡測微尺三、實驗原理及結果記錄 1、顯微直接計數(shù)法 （血球計數(shù)板） 血球計數(shù)扳的構造 a.平面圖(中間平臺分為兩半，各刻有一個方格網(wǎng))b.側面圖(中間平臺與蓋玻片之間有高度為0.1毫米的間隙)0.1毫米血球計數(shù)板計數(shù)網(wǎng)的分區(qū)和分格4X51mm/20格1/400mm25X4如菌體位于中格的雙線上，計數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差?？膳恼蘸髲膱D片上計數(shù)。 小格中格如菌體位于中格的雙線上，計

2、數(shù)時則數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線，以減少誤差。可拍照后從圖片上計數(shù)。 小格中格每個大方格均被分成400個小方格；根據(jù)規(guī)定每個大方格的邊長為1mm，則每一個大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后，在蓋玻片與載玻片之間的高度為0.1mm，所以計數(shù)室的容積為0.1 mm3（萬分之一毫升）。 1mm/20格5X4A表示五個中方格的總菌數(shù)；B表示菌液的稀釋倍數(shù)。各中格中的菌數(shù)AB菌數(shù)/ml二室平均數(shù)12345第一室第二室1、用血球計數(shù)板進行酵母菌液計數(shù)并記錄結果。1ml菌液中的總菌數(shù)=A/525104B =50,000AB一般在每個計數(shù)室中取5個中方格(左上、左下、右上、右下、中間）進行計數(shù)，數(shù)兩個計

3、數(shù)室?？膳恼蘸笤陔娔X上數(shù)。1ml=1立方厘米2、測微尺的構造及測定原理 目鏡測微尺是一塊圓形玻片，在玻片中央刻有精確等分的刻度。測量時，將其放在接目鏡中的隔板上來測量經(jīng)顯微鏡放大后的細胞物象。由于不同目鏡、物鏡組合的放大倍數(shù)不相同，目鏡測微尺每格實際表示的長度也不一樣，因此目鏡測微尺測量微生物大小時須先用置于鏡臺上的鏡臺測微尺校正，以求出在一定放大倍數(shù)下，目鏡測微尺每小格所代表的相對長度。 鏡臺測微尺是中央部分刻有精確等分線的載玻片，一般將lmm等分為100格，是專門用來校正目鏡測微尺的。當更換不同放大倍數(shù)的目鏡或物鏡時，必須重新校正目鏡測微尺每一格所代表的長度。也可用血球計數(shù)板來進行標定，血

4、球計數(shù)板每個小方格的邊長為50m。目鏡測微尺的標定： 用低倍鏡觀察，當看到血球計數(shù)板的小方格后，轉動目鏡，使目鏡測微尺與小方格平行，移動推動器，尋找兩條完全重合的刻度線，計數(shù)兩重合刻度之間目鏡測微尺的格數(shù)和小方格的格數(shù)。因為小方格每格長50m，所以由下列公式可以算出目鏡測微尺每格所代表的長度。 兩重合線間計數(shù)室小方格數(shù)50 目鏡測微尺每格長度（m）= 兩重合線間目鏡測微尺格數(shù)1、記錄目鏡測微尺的標定結果，以及所測量的酵母細胞大小。目尺格數(shù)=1cm=100格物鏡目尺格數(shù)小方格數(shù)目尺校正值（m）410顯微鏡下對應的測微尺格數(shù)12345678910平均值（m） 長寬（一）血球計數(shù)板計數(shù)1、檢查血球計數(shù)板2、菌懸液加樣（先蓋蓋玻片）3、顯微鏡下計數(shù)并記錄4、清洗血球計數(shù)板（用水沖洗，不要用硬物或刷子去刷）四、實驗方法（二）酵母細胞大小的測定1、利用血球計數(shù)板在中、高倍鏡下（10、40）標定目鏡測微尺。2、取一滴酵母菌菌懸液制成水浸片。3、移去血球計數(shù)板，換上酵母菌水浸片，先在低倍鏡下找到目的物，然后在高倍鏡下用目鏡測微尺來測量酵母菌菌體的長，寬各占幾格（不足一格的部分估計到小數(shù)點后一位數(shù)）。測出的格數(shù)乘上目鏡測微尺每格的校正值，即等于該菌的長和寬。選取10個不同大小酵母細胞進行大小測定并記錄結果（觀察到的是平均大?。?。 1、記錄目鏡測微尺的標定結果，以及所測量的酵母細胞