DB1308-T007-1999馬鈴薯莖尖脫毒技術(shù)規(guī)程

1、B23DB承德市地方標(biāo)準(zhǔn)DB1308/T007-1999馬鈴暮莖尖脫毒技術(shù)規(guī)程1999-07-1C 發(fā)布1999-C7T5 實施承律市技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布本標(biāo)準(zhǔn)由圍場滿族蒙古族自治縣技術(shù)監(jiān)督局提出。 本標(biāo)準(zhǔn)由圍場滿族蒙古族自治縣農(nóng)業(yè)局.負(fù)貴起草。 本標(biāo)準(zhǔn)附錄A為本標(biāo)準(zhǔn)附錄。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：丁明亞、譚宗久隋友、陳福祥本標(biāo)準(zhǔn)自1999年7月15日實施。4.14.1無曹室滅蔭：同3.2承養(yǎng)市抜術(shù)監(jiān)督局承養(yǎng)市抜術(shù)監(jiān)督局199-07T0批準(zhǔn)1997-07-15 實施承徳市地方標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程剛 w/Tog 殮本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了馬鈴薯莖尖脫毒種薯生產(chǎn)中莖尖剝膏、脫毒苗培養(yǎng)、繁 殖等技術(shù)要求。本標(biāo)準(zhǔn)適用于馬鈴暮對培種及其各種

2、野生資源的脫毒。2.1母液配制按MS培養(yǎng)基配方.將大量元素加-A： 1 0倍.彼量元素、有機成份、. 生長調(diào)節(jié)熙 鐵鹽加大20倍滿容重瓶精補配制定容,分別編號為母液 毋液2、母液3、毋液4、母液5放入冰箱.4C保存?zhèn)溆谩?.2培養(yǎng)基液配制根據(jù)焙養(yǎng)基配方分別取母液按量加入定容，毎升加入20g為糖，攪樣 紬,PH值調(diào)為5.8,毎升培養(yǎng)萋液中加入7g瓊脂,加熱。2.3培養(yǎng)基分裝將制備好的培養(yǎng)基混趁熱分裝在洗刷于凈、高溫（200-220D滅菌 后的三角瓶中.毎瓶2 Oml.試管口以消毒棉塞或封口膜封緊。2.4高圧滅曹將分裝好培養(yǎng)羞的三角緘裝矛無菌銹中以L羈/血2的沃力逬行高壓 滅首2。分鐘，降壓后衆(zhòng)出

3、平放于無菌案形成固體培養(yǎng)基備用。11308/T00719993.1莖尖組組剝得取材：在田閶選帶有該品種典型峙紀(jì)植株結(jié)的塊莖.經(jīng)熱處理進(jìn)行鈍化催芽. .芽長到長3-5cm時剪下做組.級剝專哲料.3.2無菌室滅菌:無菌室應(yīng)用前應(yīng)用70 %酒精蚤試地板及趙凈工作臺.幷 用5 7 %的來蘇水刈天北板墻壁噴霧.紫外線燈照射2 4小時（初次用 照射4 8小時）。3.3剝膏材料消毒將芽剝?nèi)ネ饷鎺讓尤~片.放于燒杯中.用.沙布封口.放于自來水下沖 洗30分鐘。然后在無菌室內(nèi).用9 5%酒精浸泡下，放入5%漂白粉或 次氯映鈉溶液中浸泡5分鐘.再用無菌水沖洗3-5次。3.4莖尖組織剝商在無菌室中，超凈工作臺上.將消

4、毒好的材料在4 0倍雙筒解剖鏡下 迸行剝離，剝?nèi)ビ宗?切取帶1-2個葉原基的莖尖組織.0.2mm左右移置 到故有培養(yǎng)基的三角瓶或試管中的培養(yǎng)基上.每瓶只放一個莖尖組乳 3.5培養(yǎng)將放有莖尖組級的器皿放于日溫2。2 5 C.夜溫不低于i 5*C. 光照20003000勒克新條件下的組培室中培養(yǎng).莖尖組織變綠（成祝 后轉(zhuǎn) 移培養(yǎng)成組培苗。首長到6個葉片左右切段擴(kuò)繁株系。0B1308/TOO7-1S994.2韁培笛株系擴(kuò)約將組雄苗希號,按號逬行株系擴(kuò)斜擴(kuò)繁在無菌室 規(guī)凈工作臺上理行.每株苗訓(xùn)成4-5段.毎段一個莖節(jié)禮一片葉一個腋芽. 置三角瓶基上墻養(yǎng).經(jīng)2 0天成苗樗檢。5.1系簞樣，累-2個整株迸

5、行病濤檢蒲。采用叫TUSA法檢澳PVX* M, MV,釆用往返電澈技術(shù)檢瀰PSTV。5.殖夂檢測2-3次。E 3心檢測結(jié)果，棒品中仍褶清PVX、PVY、PUVPSTVW#的為不舍格.裁將其對成編號的組堵苗灣汰.或作交溫處再處理見附錄A）。而PVX、PVL PUV和JSV瑞?專都是零的為脫爵舍格.其對應(yīng)編號的組墻苗問滁為脫壽核心苜，待繼續(xù)擴(kuò)嫌。6.1無曹室滅菌：同3.2。6.2切段擴(kuò)繁：同4.2（可不用編號）。6.3培養(yǎng)：同3.5,怛因敬置增大.要加襲管理。切段后首先將斌放在清贛射光源，并*日光補充光滌的培養(yǎng)架上培雅3夭左右見根、葉腋處蔽 芽萌生，再移到陽光黑射的培養(yǎng)強上。為使見光妁勻要經(jīng)常上下移動或 轉(zhuǎn)動方向。培養(yǎng)2Q天左右長8個左右葉片.逬行再次切段擴(kuò)攀。6.4擴(kuò)繁對預(yù)計數(shù)量，做為基礎(chǔ)苗供原原種生產(chǎn)聞微型種暮生產(chǎn)使執(zhí)附 錄A術(shù)AR如果剝離苗經(jīng)病毒檢測.仍褶有病毒，又沒有更 好的原剝離的材料時，可采取變溫處理再脫毒。A2、把脫毒未合格的剝離苗，繼續(xù)培養(yǎng)，苗長到4- 5cm 時進(jìn)行變溫處理。A3.把裝