細胞凝集反應(yīng)和細胞膜通透性的觀察實驗原理及步驟

1、實驗二：細胞凝集反應(yīng)和細胞膜通透性的觀察【課前預(yù)習(xí)】1土豆凝集素的本質(zhì)及其使紅細胞凝集的原理？2在等滲溶液中細胞一定能維持正常形態(tài)嗎？3預(yù)測紅細胞在各種溶液中的溶血速度？【目的要求】1了解細胞糖被的特點和功能，了解植物凝集素的作用2了解細胞膜的滲透性及各類物質(zhì)進入細胞的速度【基本原理】細胞膜表面的有分支狀糖外被，細胞間的聯(lián)系、細胞的生長和分化、免疫反應(yīng)、腫瘤的發(fā)生等都和細胞表面的分支狀糖分子有關(guān)。凝集素（lectin）是一類含糖并能與糖分子專一結(jié)合的蛋白質(zhì)，它具有凝集細胞和刺激細胞分裂的作用。凝集素使細胞凝集是由于它與細胞表面的糖分子連接，在細胞表面間形成“橋”的結(jié)果，加入與凝集素互補的糖可以

2、抑制細胞的凝集。細胞膜是細胞與外界環(huán)境進行物質(zhì)交換的結(jié)構(gòu)?？蛇x擇性地讓某些物質(zhì)進出細胞，各種物質(zhì)出入細胞的方式是不同的，水是生物界最普遍的溶劑，水分子可以按照物質(zhì)濃度梯度從滲透壓低的一側(cè)通過細胞膜向滲透壓高的一側(cè)擴散，以至于在高滲環(huán)境中，動物細胞會失水而收縮；在低滲環(huán)境中，動物細胞會吸水膨脹直至破裂。本實驗將紅細胞分別放于各種等滲溶液中，由于紅細胞膜對不同溶質(zhì)的通透性不同，使得不同溶質(zhì)透入細胞的速度相差很大，有些溶質(zhì)甚至不能透入細胞。當(dāng)溶質(zhì)分子進入細胞后可引起滲透壓升高，水分子隨即進入細胞，使細胞膨脹，當(dāng)膨脹到一定程度時，紅細胞膜會發(fā)生破裂，血紅素溢出，此時，原來不透明的紅細胞懸液突然變成紅色

3、透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為紅細胞溶血。由于各種溶質(zhì)進入細胞的速度不同，所以不同的溶質(zhì)誘導(dǎo)紅細胞溶血的時間不同，相反可通過測量溶血時間來估計細胞膜對各種物質(zhì)通透性的大小。【實驗用品】1材料：土豆塊莖，雞（采血）2器材和儀器：顯微鏡、載片、蓋片、天平、滴管、小燒杯、移液管、離心管、試管和試管架3試劑：0.85生理鹽水、2雞紅細胞、PBS 緩沖液、Alsever 溶液、0.17M 氯化鈉、0.17M 氯化銨、0.17M醋酸胺、0.17M 硝酸鈉、0.12M 草酸銨、0.12M 硫酸鈉、0.32M 葡萄糖、0.32M 甘油、0.32M 乙醇、0.32M丙酮【方法步驟】1制備土豆凝集素液和紅細胞懸

4、浮液，制備無血清的雞紅細胞懸液，使凝集素液和紅細胞懸液混合，靜置后，在光鏡（低倍）下觀察凝集素使紅細胞凝集的現(xiàn)象。（以PBS 緩沖液加2血細胞作對照實驗）土豆凝集素的制備：稱取土豆去皮塊莖2g , 加10 mL PBS緩沖液，浸泡2h（浸出的粗提液中含有可溶性土豆凝集素） , 載玻片上滴一滴土豆凝集素,再滴一滴2紅細胞液,充分混勻靜置20 min , 低倍顯微鏡下觀察血球凝集現(xiàn)象。2觀察10%的雞紅細胞懸液，可見該懸液為一種不透明的紅色液體3觀察溶血現(xiàn)象 取一支試管，再加入4ml 蒸餾水，加入0.4ml 雞紅細胞懸液，混勻后注意觀察溶液顏色的變化，可見溶液由不透明的紅色變成透明的紅色液體（可將

5、試管貼靠在書上，隔著試管看書中的字，如發(fā)現(xiàn)溶血則文字可被看清）。4觀察雞紅細胞對不同物質(zhì)的通透性（1）取一支試管，和0.17M 的Nacl 溶液4ml，加入0.4ml 雞紅細胞懸液，輕輕搖勻，用上述方法觀察是否出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，如出現(xiàn)溶血，記下發(fā)生溶血所需要的時間（從加入4ml 溶液算起）（2）按上述方法分別加入下列9種溶液是否導(dǎo)致紅細胞溶血并記錄實驗結(jié)果。 0.17M 氯化銨 0.17M 硝酸鈉 0.17M 硫酸鈉 0.17M 醋酸胺 0.17M 草酸銨 0.17M 葡萄糖 0.17M 甘油 0.17M 乙醇 0.17M 丙酮【實驗結(jié)果】1土豆凝集素能使雞紅細胞凝集，PBS 對照液中紅細胞分散均勻 對照組：未凝血 實驗組：凝血2細胞膜滲透性實驗結(jié)果比較和分析試管編號 所加試劑和濃度 是否溶血 時 間 結(jié)果分析 1 2 3