清眩丸醇提工藝的正交設計重復實驗法優(yōu)選

1、清眩丸醇提工藝的正交設計-重復實驗法優(yōu)選【摘要】目確實定清眩丸中原料藥川芎、白芷共同醇提的最正確提取工藝條件。方法采用高效液相色譜實現(xiàn)對浸膏中阿魏酸和歐前胡素的同時測定。以出膏率、歐前胡素得率、阿魏酸得率的綜合評分為指標，用正交設計-重復實驗法考察乙醇濃度和用量、提取時間、提取次數(shù)等因素對提取的影響，確定乙醇同時提取川芎和白芷中有效成分的最正確工藝條件。結果清眩丸中川芎與白芷同時醇提的最正確工藝為：85%乙醇，用量8倍，提取時間為1h，提取次數(shù)為3次。結論該法為清眩膠囊原料藥川芎與白芷提取工藝確實定提供實驗根據(jù)?！娟P鍵詞】清眩丸;提取工藝;阿魏酸;歐前胡素;正交實驗清眩丸由川芎、白芷、薄荷、荊

2、芥穗、石膏5味藥材加工而成，收載于?中國藥典?2022年版部。功能散風清熱，用于治療風熱、頭暈、目眩、偏正頭痛、鼻塞牙痛1，2。方中君藥川芎為傘形科藁本屬植物川芎LigustiuhuanxingHrt.的枯燥根莖，含有阿魏酸、川芎內酯、生物堿等成分，具有活血行氣、祛風止痛的成效;白芷為傘型科植物白芷Angeliadahuria(Fish.exHff.)Benth.etHk.f.的枯燥根，主要有效成分為香豆素類化合物，歐前胡素為其中之一，具有散風除濕、通竅止痛、消腫排膿的功能3，4。由于現(xiàn)有清眩丸大蜜丸產(chǎn)品的用藥量大、服用困難、衛(wèi)生指標低、含蜂蜜量大、吸潮性強、易霉變等缺點，本研究試圖改劑型為膠

3、囊劑，減少服藥量，進步藥品質量的可控性，使藥物穩(wěn)定性進步。本文將出膏率、歐前胡素得率、阿魏酸得率的綜合評分為正交工藝優(yōu)選的指標成分，考察乙醇濃度、乙醇用量、提取時間和提取次數(shù)等因素對清眩丸中川芎和白芷同時采取乙醇提取過程進展條件優(yōu)化。由于正交表L9(34)各列均被因素排滿，表中未留下空白列，也無歷史資料提供經(jīng)歷誤差，為防止增加試驗次數(shù)，不使用更大的正交表，故作重復試驗，估算試驗誤差，進展方差分析，以確定各因素的顯著性程度5，6，從而得出清眩丸醇提的最正確工藝參數(shù)。1儀器與試劑高效液相色譜系統(tǒng)，阿魏酸對照品(供含量測定用，中國藥品生物制品鑒定所)，歐前胡素對照品(供含量測定用，中國醫(yī)學科學研究院

4、別離純化而得)。白芷、川芎藥材購自杭州市華東醫(yī)藥公司，經(jīng)鑒定符合?中國藥典?部標準。甲醇為色譜純，乙醇為分析純。2方法2.1正交表設計根據(jù)藥材性質、浸提理論和預實驗結果，川芎和白芷的醇提工藝與乙醇濃度、乙醇用量、提取時間和提取次數(shù)等因素有親密關系。為選擇最正確提取工藝條件，采用L9(34)正交表，以出膏率、歐前胡素得率、阿魏酸得率的綜合評分為考察指標，每個實驗平行做兩次，共18組實驗數(shù)據(jù)，各因素程度見表1。表1因素程度2.2實驗方法2.2.1浸膏提取取同一批川芎和白芷藥材進展所有的正交實驗，每次分別稱取川芎和白芷藥材各50g，按正交實驗表L9(34)安排實驗，提取時間從溶劑開場回流計算，提取過

5、程保持溶劑回流狀態(tài)，提取藥液濃縮成稠膏，冷凍枯燥得干浸膏粉，稱重，計算出膏率。2.2.2色譜條件的選擇色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗：色譜柱為漢邦18柱;流動相為0.5%醋酸水與乙腈不同比例梯度洗脫，010in，0.5%H3H水溶液與H3N比為7525，1017in，0.5%H3H水溶液與H3N比為7030，1730in，0.5%HA水溶液與H3N比為2575;流速：0.8lin-1;阿魏酸、歐前胡素檢測波長分別為323，254n;柱溫為25，與相鄰峰的別離度大于1.5。對照品溶液的制備：取阿魏酸對照品適量，精細稱定，加甲醇制成每毫升含0.002g的溶液，即可;取歐前胡素對照品適量，精細稱定，加甲醇

6、制成每毫升含0.001g的溶液，即可。供試品溶液的制備：每個浸膏樣品取0.02g，精細稱定，定容至10l容量瓶中超聲15in至溶解。測定法：分別精細汲取供試品溶液及對照品溶液各10l，注入高效液相色譜儀中，以峰面積按外標法計算含量，即得。轉貼于論文聯(lián)盟.ll.2.2.3方法可行性研究標準曲線與線性關系考察：精細稱取阿魏酸對照品1.00g，歐前胡素0.50g分別置于50l量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，定容至50l。再分別各取1l置于10l容量瓶內定容至刻度。按上述色譜條件，分別依次進樣1，3，9，15，30l，分別注入高效液相色譜儀中，并測其相應的峰面積，依次為阿魏酸11452，4215

7、3，101679，130957，223008，440134，以對照品進樣量為橫坐標X，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線，得阿魏酸的回歸方程和線性范圍?；貧w方程為：Y=7392957.9494799X-1950.2555721，R2=0.9999;歐前胡素：4785，18565，47024，59944，101333，202206，以峰面積(Y)對進樣量(X)進展回歸處理，得回歸方程為：Y=6802736.7013373X-1386.8142645，R2=0.9999。2.3數(shù)據(jù)處理與方差分析采用出膏率、歐前胡素得率及阿魏酸得率3項考察指標綜合評分的方法優(yōu)選醇提工藝(見表2)。評分標準：按指標主次

8、，規(guī)定阿魏酸得率占40分，阿魏酸得率為82.26gg-1取總分值40分，阿魏酸得率為0gg-1時取0分;規(guī)定歐前胡素得率也占40分，歐前胡素得率為69.52gg-1取總分值40分，歐前胡素得率為0gg-1時取0分;出膏率占20分，根據(jù)實驗出膏率的變動范圍規(guī)定出膏率為10%取總分值20分，大于等于30%取0分。根據(jù)提取率實驗數(shù)據(jù)，分別計算各因素的離差平方和及第2類離差。因為本實驗為重復試驗，并且正交表中無空白列，故直接以第2類離差作為誤差估計值來檢驗各因素的顯著性。直觀分析表和方差分析表如表3和表4所示。表2正交實驗設計L9(34)表3直觀分析表4方差分析由方差分析可知，因素A和B為有極顯著意義

9、的因素，A，B應取提取率高的程度，按表3的K值，A取A3，B取B2;因素和D按實際結果并考慮藥材耗能等，取1，D取D3。故清眩丸中川芎和白芷同時醇提的最正確工藝條件為A3B21D3。2.4工藝驗證工藝挑選完成后，按上述條件和方法，對最正確提取工藝進展試驗驗證。實驗結果說明，采用最優(yōu)工藝參數(shù)與正交表中第8個實驗結果類似，它的綜合評分為各實驗最高。3結論以出膏率、歐前胡素得率、阿魏酸得率的綜合評分為指標，采用正交設計-重復試驗法，考慮工業(yè)中能源節(jié)約原那么，清眩丸中川芎白芷共同醇提的最優(yōu)方案為：A3B21D3，即乙醇濃度85%，乙醇倍量為8倍，提取時間為1h，提取次數(shù)為3次?！緟⒖嘉墨I】1國家藥典委員會.中國藥典，部S.北京：化學工業(yè)出版社，2022.2谷學新，毛彥杰，岳敏，等.清眩丸質量標準初探J.中國藥學雜志，2022，39(10)：786.3劉文，韓笑，王學勇.超臨界2萃取白芷中歐前胡素的研究J.中國藥學雜志，2022，38(2)：99.4魏玉平，劉俊，顏小林，等.白芷治療頭痛