化妝品原料和生產(chǎn)環(huán)境中污染菌的檢驗(yàn)

1、第一節(jié)化裝品原料的微生物檢驗(yàn)化裝品原料種類很多，性能各異，依據(jù)其性能和用途，大體上可分為基質(zhì)原料和添加劑關(guān)心原料。基質(zhì)原料是組成化裝品的主體或在該化裝品內(nèi)起主要功能的物質(zhì)，主要包括 油脂、蠟類、粉類、膠質(zhì)類、外表活性劑、防腐劑、抗氧化劑等。添加劑是賜予色、香及其他特定作用的物質(zhì)，大多為自然的含有養(yǎng)分成分或生物活性的物質(zhì)，這些成分又是微生物生 長(zhǎng)生殖的良好養(yǎng)分源，在肯定程度上成為微生物的培育基，因此，檢驗(yàn)原料中的微生物很重 要。一、指標(biāo)菌及特定菌的選擇一般原料的微生物指標(biāo)菌同化裝品成品即：菌落總數(shù)、糞大腸菌群、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、霉菌和酵母菌。粉類原料大多數(shù)是由土壤礦物質(zhì)加工而成，而土壤受

2、微生物污染 嚴(yán)峻。據(jù)資料報(bào)道，土壤中的致病菌有需氧的炭疽桿菌和厭氧的破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌 等，其檢出率很高，產(chǎn)氣莢膜桿菌幾乎達(dá)100%，惡性水腫桿菌64%，破傷風(fēng)桿菌 29%，肉毒桿菌 6%。這些致病菌能在土壤中生存較長(zhǎng)時(shí)間，例如炭疽桿菌的芽孢能生存15 年之久； 腸道致病菌可生存 100170d；結(jié)核桿菌能生存1 年左右；破傷風(fēng)桿菌芽孢和產(chǎn)氣莢膜桿菌也能長(zhǎng)期在土壤中生存。在滑石粉、高嶺土、碳酸鈣等粉類原料中，經(jīng)常檢出枯草桿菌、真菌等，因此，在粉類原料中可增加需氧芽孢桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌和破傷風(fēng)桿菌指標(biāo)。在某些 生物性原料如動(dòng)物內(nèi)臟及其提取物等可增加沙門氏菌指標(biāo)。二、樣品的預(yù)處理依據(jù)原料性質(zhì)

3、的不同，選用相應(yīng)的預(yù)處理方法，如油質(zhì)類原料可按油性或疏水性油包水化裝品處理，粉類原料按粉劑化裝品樣品處理等。三、檢驗(yàn)方法各種微生物的檢驗(yàn)方法均與化裝品成品檢驗(yàn)方法一樣，可參見化裝品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中微 生物檢驗(yàn)方法。原料與成品微生物檢驗(yàn)方法最根本的不同點(diǎn)是檢驗(yàn)原料所用的稀釋液和培育基中都不含有中和劑卵磷脂和吐溫-80。如檢驗(yàn)菌落總數(shù)用一般養(yǎng)分瓊脂培育基，綠膿桿菌增菌培育液可用一般肉湯，金黃色葡萄球菌增菌培育液用含 7.5%氯化鈉肉湯，稀釋液均用生理鹽水。四、培育基1養(yǎng)分瓊脂成分：蛋白胨20g瓊脂1520g牛肉膏5g氯化鈉5g蒸餾水1000mL制法：將上述成分混合后，加熱溶解，調(diào)PH 值為 7.47.6

4、,121、20min 高壓滅菌， 儲(chǔ)存于冷暗處備用。27.5%氯化鈉肉湯成分：肉湯100mL氯化鈉7.5g制法：將上述兩種成分混合均勻，分裝，115、20min 高壓滅菌。其次節(jié)化裝品生產(chǎn)用水的微生物檢驗(yàn)方法水在化裝品的生產(chǎn)中用量極大，是化裝品的主要成分之一，水的品質(zhì)對(duì)化裝品的質(zhì)量有著重大影響。化裝品生產(chǎn)用水的處理一般承受過(guò)濾吸附法、電滲析法、離子交換法等，對(duì)生產(chǎn)用水的微生物檢測(cè)指標(biāo)有菌落總數(shù)、糞大腸菌群、霉菌和酵母菌、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌。一、菌落總數(shù)菌落總數(shù)是指水樣在肯定條件下養(yǎng)分瓊脂培育基，37,24h需氧培育后 1mL 水樣中所含菌落數(shù)。檢驗(yàn)方法介紹如下。以無(wú)菌操作滅菌吸管吸取 1

5、mL 充分混勻的水樣，加到滅菌的平皿內(nèi)，注入約15mL已溶化并冷卻到 45左右的養(yǎng)分瓊脂培育基，并馬上旋轉(zhuǎn)平皿，使水樣與培育充分混勻。每次檢驗(yàn)時(shí)應(yīng)做一平行接種，同時(shí)另用一個(gè)平皿只傾注養(yǎng)分瓊脂培育基作為空白對(duì) 照。待冷卻凝固后，翻轉(zhuǎn)平皿，使其底面朝上，置于361培育箱內(nèi)培育24h,進(jìn)展菌落計(jì)數(shù)，即為 1mL 水樣中的菌落總數(shù)，以CFU/mL報(bào)告結(jié)果。二、糞大腸菌群糞大腸菌群是作為糞便污染指標(biāo)菌提出的，是指一群在 44.5培育 24h 能發(fā)酵乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣、需氧和兼性厭氧的革蘭氏陰性無(wú)芽孢桿菌。糞大腸菌群數(shù)的凹凸，說(shuō)明白糞便污染程度，也反映了對(duì)人體安康潛在危害性的大小，是評(píng)價(jià)化裝品生產(chǎn)用水衛(wèi)生質(zhì)量的

6、重要指標(biāo)之一。因生產(chǎn)用水的干凈度較高，可承受濾膜法檢測(cè)，馬上水樣通過(guò)孔徑為 0.45m 的濾膜過(guò)濾，細(xì)菌被阻留在膜上，將濾膜貼在MFC 培育基上，44.5培育后，計(jì)數(shù)典型菌落。MFC 培育基成分：胰胨10g膽鹽 3 號(hào)Bile salt No.3或混合膽鹽1.5g多胨5g酵母浸膏3g瓊脂15g氯化鈉5g苯胺藍(lán)0.2g乳糖12.5g蒸餾水1000mL配制方法：在 1000mL 蒸餾水中先參加玫紅酸10g/L的氫氧化鈉溶液c(NaOH)=0.2mol/L10mL, 混勻后，取 500mL 參加瓊脂煮沸溶解，于另外 500mL 蒸餾水中，參加除苯胺藍(lán)以外的其他試劑，加熱溶解，倒入已溶解的瓊脂，混勻調(diào)

7、整 PH 值為 7.4,參加苯胺藍(lán)煮沸，快速離開熱源， 待冷卻至 60左右，制成平板，不行高壓滅菌。制好的培育基應(yīng)存放于210環(huán)境下，不超過(guò) 96h。EC 培育基成分：胰蛋白胨20g磷酸氫二鉀4g乳糖5g磷酸二氫鉀1.5g膽鹽 3 號(hào)Bile salt No.3或混合膽鹽1.5g氯化鈉5g蒸餾水1000mL配制方法將上述成分溶解于蒸餾水中，115高壓滅菌 20min,冷卻至 60左右時(shí)，傾注平皿，備用。檢驗(yàn)方法：濾膜和濾器的滅菌 將濾膜放入燒杯中，參加蒸餾水，置于沸水浴中煮沸滅菌 3 次，每次15min,前兩次煮沸后需更換水洗滌 23 次，以除去殘留溶劑；濾器可用點(diǎn)燃的酒精棉球火焰滅菌，也可用

8、高壓滅菌。水樣過(guò)濾 用無(wú)菌鑷子夾取滅菌濾膜的邊緣，貼放在濾床上，固定好濾器，100mL水樣，在負(fù) 0.5atm(1atm=101.325kPa)下抽濾。將濾膜截留細(xì)菌面朝上，貼放在MFC 培育基上中間不得有氣泡，將平皿倒置于44.5培育箱中培育 24h。糞大腸菌群菌落為藍(lán)色，非糞大腸菌群菌落為灰色至奶油色。將可疑菌落接種于EC 培育基上，44.5培育 24h,如產(chǎn)氣則證明為糞大腸菌群。結(jié)果計(jì)算糞大腸菌群數(shù)CFU/100mL經(jīng)證明糞大腸菌群菌落數(shù)100/過(guò)濾的水樣體積mL三、霉菌和酵母菌霉菌和酵母菌廣泛分布于自然界中，也可存在于水中，可引起化裝品變質(zhì)發(fā)霉，有些霉菌還可產(chǎn)生有毒毒素，所以把握生產(chǎn)用

9、水中的霉菌和酵母菌極為重要。在固體培育基上，霉菌呈放射狀生長(zhǎng)，孢子有各種顏色；酵母菌在培育基外表多呈圓形 凸起，邊緣整齊，外表光滑潮濕，在培育基深部生長(zhǎng)的酵母菌多呈鐵餅形、三角形或多角形， 在虎紅培育基上呈粉紅色。檢驗(yàn)方法：吸取 1mL 水樣、1/10 稀釋水樣各 1mL,分別注入滅菌平皿中，每個(gè)稀釋度各用2 個(gè)平皿，注入溶化并冷卻至 45的虎紅培育基，充分搖勻，凝固后倒置于 28培育箱培育 72h, 計(jì)數(shù)平板內(nèi)生長(zhǎng)的霉菌和酵母菌數(shù)，如有霉菌集中生長(zhǎng)，可于48h 時(shí)將此平板取出計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法霉菌和酵母菌菌落數(shù)CFU/mL：每個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)四、綠膿桿菌檢驗(yàn)方法將過(guò)濾器和濾膜滅菌備用

10、。過(guò)濾 100mL 水樣，將截留細(xì)菌的濾膜置 90mL 肉湯培育基中，置 37培育 1824h,如有綠膿桿菌生長(zhǎng)，培育液多呈黃綠色或藍(lán)綠色，外表有一層薄菌膜。分別培育、染色鏡檢、氧化酶試驗(yàn)、綠膿菌素試驗(yàn)、硝酸鹽復(fù)原產(chǎn)氣試驗(yàn)、明膠液化試驗(yàn)、42生長(zhǎng)試驗(yàn)操作過(guò)程可見化裝品綠膿桿菌檢驗(yàn)方法。結(jié)果報(bào)告被檢水樣經(jīng)增菌分別培育后，經(jīng)證明為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿菌 素試驗(yàn)陽(yáng)性，即可報(bào)告被檢水樣中每 100mL 中檢出綠膿桿菌；或綠膿菌素試驗(yàn)陰性而液化明膠、硝酸鹽復(fù)原產(chǎn)氣和42生長(zhǎng)試驗(yàn)三者皆為陽(yáng)性時(shí)，也可報(bào)告被檢水樣中檢出綠膿桿菌； 反之，可報(bào)告 100mL 水樣中未檢出綠膿桿菌。五、金黃色葡萄球菌檢驗(yàn)

11、方法將過(guò)濾器和濾膜滅菌備用。過(guò)濾 100mL 待檢水樣，將截留細(xì)菌的濾膜置于 90mL 7.5% 氯化鈉肉湯培育基中， 置于 37培育箱培育 24h。用接種環(huán)挑取增菌培育液，劃線接種在 Baird-Parker 氏培育基或血瓊脂培育基上 ，置 37培育箱培育 2448h。如有典型菌落生長(zhǎng)，可進(jìn)展染色鏡檢、甘露醇發(fā)酵試驗(yàn)、血漿凝固酶試驗(yàn)詳見化裝品中金黃色葡萄球菌的檢驗(yàn)方法。結(jié)果報(bào)告凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長(zhǎng)，經(jīng)染色鏡檢，證明為革蘭氏陽(yáng)性 葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗(yàn)陽(yáng)性，可報(bào)告 100mL 水樣中檢出金黃色葡萄球菌；否則報(bào)告 100mL 水樣中未檢出金黃色葡萄球菌。第三節(jié)生

12、產(chǎn)車間空氣中的微生物檢測(cè)化裝品生產(chǎn)車間的空氣干凈度直接關(guān)系到化裝品的質(zhì)量，所以建立常規(guī)的車間空氣質(zhì)量監(jiān)測(cè)系統(tǒng)，準(zhǔn)時(shí)進(jìn)展空氣凈化，可有效保證化裝品到達(dá)衛(wèi)生要求?？諝庵屑?xì)菌總數(shù)是空氣微生物污染最主要的指標(biāo)菌之一，常用的檢測(cè)方法有撞擊法采樣檢測(cè)和自然沉降法采樣檢測(cè)。一、撞擊法承受固體撞擊式空氣微生物采樣器采樣，通過(guò)抽氣動(dòng)力，使空氣高速通過(guò)狹縫或小孔， 懸浮在空氣中的帶菌粒子因慣性作用而撞擊到培育基平板上，經(jīng) 37、48h 培育后，計(jì)算出每立方米空氣中所含的細(xì)菌菌落數(shù)。所需儀器和設(shè)備有撞擊式空氣微生物采樣器及其他檢驗(yàn)微生物常用設(shè)備。所用培育基為一般養(yǎng)分瓊脂培育基。檢測(cè)步驟選用對(duì)空氣中細(xì)菌捕獲率大于95

13、%且性能穩(wěn)定、便于消毒的撞擊式空氣采樣器。選擇有代表性的位置設(shè)置采樣點(diǎn)，將采樣器按操作說(shuō)明安裝、消毒，依據(jù)空氣污 染狀況確定采樣量，進(jìn)展采樣。采樣完畢后，將帶菌平板倒置于 37培育箱內(nèi) 48h,計(jì)數(shù)菌落數(shù)，依據(jù)采樣流量和采樣時(shí)間，換算成每立方米空氣中的菌落數(shù)，以CFU/m3報(bào)告結(jié)果。二、自然沉降法自然沉降法是利用空氣微生物粒子的重力作用，在肯定時(shí)間內(nèi)將微生物粒子收集到帶有培育基的平皿內(nèi)，在適宜的溫度下培育生長(zhǎng)成為菌落并進(jìn)展生物學(xué)觀看、計(jì)數(shù)和評(píng)價(jià)。本方法較撞擊法經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便，不需特別采樣器，但此方法的檢測(cè)結(jié)果受空氣氣流和帶菌顆粒大小的影響較大，所收集的只是一局部較大的微生物粒子，采樣條件難以把握。檢

14、測(cè)步驟依據(jù)待測(cè)空間大小及通風(fēng)口的位置選擇有代表性的點(diǎn)采樣，通常設(shè) 5 個(gè)或 3 個(gè)采 樣點(diǎn)，采樣高度為 1.21.5m,采樣點(diǎn)應(yīng)離墻 1m 以上，并避開空調(diào)、門窗等空氣流通處。將直徑9cm 的養(yǎng)分瓊脂平板置于采樣點(diǎn)處，翻開皿蓋，暴露1030min依據(jù)空氣的干凈度后，蓋上皿蓋，翻轉(zhuǎn)平板，置于 37培育箱內(nèi) 48h,計(jì)數(shù)每皿的菌落數(shù)，計(jì)算出平均菌落數(shù)，以CFU/m3報(bào)告結(jié)果。此結(jié)果不能同撞擊法結(jié)果換算。第四節(jié)化裝品生產(chǎn)設(shè)備及環(huán)境物體外表微生物檢驗(yàn)一、生產(chǎn)設(shè)備的采樣儲(chǔ)存罐、灌裝機(jī)、輸送管道等，用滅菌生理鹽水棉拭子，在上述設(shè)備內(nèi)側(cè)相對(duì)面各25cm2(5cm5cm)面積范圍，來(lái)回均勻涂抹，并轉(zhuǎn)動(dòng)拭子，剪

15、去手接觸部位后，將棉拭子放入 10mL 生理鹽水試管內(nèi)振打 80 次，依據(jù)細(xì)菌的污染程度，可作適當(dāng)稀釋，取2mL 分別注入兩塊平皿，每皿 1mL,傾注一般養(yǎng)分瓊脂，置 37培育 48h，進(jìn)展活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算被檢設(shè)備外表污染細(xì)菌的數(shù)量，如檢驗(yàn)機(jī)器的溝縫等處時(shí)，將機(jī)器拆卸，直接用棉拭子涂抹，涂抹面積可因被檢物的外形及大小而定。生產(chǎn)設(shè)備外表污染細(xì)菌菌落總數(shù)CFU/cm2平均菌落數(shù)稀釋度采樣面積cm210凡接觸化裝品原料和半成品的設(shè)備、工具、管道必需用無(wú)毒、無(wú)害、抗腐蝕材料制作， 內(nèi)壁應(yīng)當(dāng)光滑，便于清潔和消毒。全部生產(chǎn)設(shè)備、工具在使用前后應(yīng)當(dāng)徹底清潔、消毒。二、操作臺(tái)采樣在臺(tái)面對(duì)角線高兩點(diǎn)工人操作處，各 25 cm2 面積，用滅菌生理鹽水棉拭子，來(lái)回均勻涂抹，并轉(zhuǎn)動(dòng)拭子，剪去手接觸部位后，將棉拭子放入10mL 生理鹽水試管內(nèi)振打 80 次， 依據(jù)細(xì)菌的污染程度，可作適當(dāng)稀釋，取2mL 分別注入兩塊平皿，每皿 1mL，傾注一般養(yǎng)分瓊脂，置 37培育 48h，進(jìn)展活菌計(jì)數(shù)，計(jì)算操作臺(tái)外表污染細(xì)菌的數(shù)量。操作臺(tái)外表污染細(xì)菌