植物樣蔗糖,淀粉,可溶性總糖測(cè)定

1、蔗糖，淀粉，可溶性總糖測(cè)定0.1g 干樣100 目篩8ml 80%乙醇8030 min冷卻2022rpm 20min殘?jiān)僭O(shè)測(cè)定是植株樣品，要將上清液中加少量活性碳，過濾后再定容。8ml 80%乙醇8030 min冷卻2022rpm 20min殘?jiān)喜⑸锨逡?0ml8ml 80%乙醇8030 min冷卻蔗糖測(cè)定可溶性總糖測(cè)定2022rpm 20min殘?jiān)?0烘干0.9ml 提取液1.0ml 提取液+1.0ml 水冷卻0.1ml2N NaOH2ml 蒸餾水20min，不斷攪動(dòng)冷卻10min配制搖勻2ml 9.2N HClO410min 不斷振蕩6ml冷卻15min 沸水浴1ml0.1%間苯二酚3

2、ml 10N HCl2022rpm 25min殘?jiān)?ml 4.6N HClO410min 不斷振蕩6ml合并上清液50ml8060min冷卻過濾淀粉測(cè)定方法同可溶性總糖0.9ml蒸餾水+0.1ml2N NaOH+1ml 0.1%間笨二酚+3ml 10N HCl 作參比；2ml蒸餾水+4ml 棄去我們也是在使用同樣的方法做同樣的樣品。1：保證每管中參加的 5ml可以使用大肚管0.2%蒽酮硫酸溶液與 3.0ml可以使用 5ml的刻度管，但是必需標(biāo)定必需準(zhǔn)確！2：保證每管的反響時(shí)間是完全的6 分鐘3 秒人進(jìn)展協(xié)作。340 秒1 分鐘。4：從振蕩開頭計(jì)算，到吸取度測(cè)定完畢的時(shí)間至，必需把握在 30 分

3、鐘以內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定是20-40 分鐘。5：0.2%蒽酮硫酸溶液必需在試驗(yàn)前就配制好，由于硫酸的密度較大，建議在樣品配制好以前 1 小時(shí)配制好，參加試管時(shí)肯定要搖勻。6：為了保證試驗(yàn)的準(zhǔn)確度，建議每個(gè)樣品平行測(cè)定 3-4 管，這樣的話可以消退由于自己的操作失誤造成的試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確！以上幾點(diǎn)時(shí)我在試驗(yàn)中覺察并準(zhǔn)時(shí)留意的幾點(diǎn)閱歷，期望對(duì)樓主有所幫助！葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：準(zhǔn)確稱取0.1000g在8烘箱中烘2小時(shí)1000m0.1mg/ml20ml 具塞刻度試管中0.1mg/ml 葡萄糖母液ml蒸餾水(ml)葡萄糖(ml/管)0.02.00.00.41.60.040.81.20.081.20.80.121.

4、60.40.162.00.00.20以下操作同可溶性糖的測(cè)定蔗糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：準(zhǔn)確稱取0.1000g在8烘箱中烘2小時(shí)1000m0.1mg/ml10ml 具塞刻度試管中0.1mg/ml 葡萄糖母液ml0.00.10.30.50.70.9以下操作同可蔗糖的測(cè)定蒸餾水(ml)0.90.80.60.40.20.0蔗 糖(ml/管)0.00.010.030.050.070.09計(jì)算可溶性糖含量mg/g=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算得葡萄糖的mg 數(shù)稀釋倍數(shù)樣品重g蔗糖含量mg/g=淀粉含量mg/g=從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算得蔗糖的mg 數(shù)稀釋倍數(shù)樣品重g從標(biāo)準(zhǔn)曲線上算得葡萄糖的mg 數(shù)稀釋倍數(shù)0.9樣品重g試驗(yàn)24 植物組

5、織中可溶性糖與淀粉的測(cè)定植物體內(nèi)的碳素養(yǎng)分狀況以及農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)性狀指標(biāo)，本試驗(yàn)學(xué)習(xí)幾種定量測(cè)定可溶性糖和淀粉的方法。一、苯酚法測(cè)定可溶性糖【原理】植物體內(nèi)的可溶性糖主要指能溶于水及乙醇的單糖和寡聚糖 在10100g 范圍內(nèi)其顏色深淺與糖的含量成正比，且在485nm 波長(zhǎng)下有最大吸取峰，故可用比色法在此波長(zhǎng)下測(cè)定。苯酚法可用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的測(cè)定，方法簡(jiǎn)潔， 靈敏度高，根本不受蛋白質(zhì)存在的影響，并且產(chǎn)生的顏色穩(wěn)定160min以上?！緝x器與用具】分光光度計(jì)；電爐；鋁鍋；20ml 刻度試管；刻度吸管5ml 1支，1ml 2支；記號(hào)筆；吸水紙適量。【試劑】190苯酚溶液 90g苯酚A10ml

6、溶解，在室溫下可保存數(shù)月；29%苯酚溶液 取3ml 90%苯酚溶液，加蒸餾水至30ml，現(xiàn)配現(xiàn)用；3濃硫酸1.8；41%蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 將分析純蔗糖在801.000g移入100ml容量瓶中，參加0.5ml濃硫酸，用蒸餾水定容至刻度；510g/ml蔗糖標(biāo)準(zhǔn)液 11ml參加100ml【方法】標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作取20ml 刻度試管11支，從010分別編號(hào)，按表24-1參加溶液和水。表24-1各試管加溶液和水的量管 號(hào)12345678910100g/ml蔗糖液(ml)00.20.40.60.81.0水(ml)2.01.81.61.41.21.0蔗糖量(g)020406080100然后按挨次向試管內(nèi)參加1ml

7、9%苯酚溶液，搖勻，再?gòu)墓芤赫婵焖賲⒓?ml 濃硫酸，搖勻。比色液總體積為8ml，在恒溫下放置30min，顯色。然后以空白為參比，在485nm 波長(zhǎng)下比色測(cè)定，以糖含量為橫坐標(biāo)，光密為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)準(zhǔn)直線方程?？扇苄蕴堑奶崛∪》f植物葉片，擦凈外表污物，剪碎混勻，稱取0.100.30g，共3份，或干材料。分別放入3支刻度試管中，參加510ml 蒸餾水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min提取2次25ml容量瓶中，反復(fù)沖洗試管及殘?jiān)ㄈ葜量潭?。測(cè)定吸取0.5ml樣品液于試管中次1.5m，同制作標(biāo)準(zhǔn)曲線的 按下式計(jì)算測(cè)試樣品中糖含量?？扇苄蕴呛?mg/g)=式中 C標(biāo)準(zhǔn)方程求得糖

8、量(g)；a吸取樣品液體積(ml)； V提取液量(ml)；n 稀釋倍數(shù)；組織重量。二、蒽酮法測(cè)定可溶性糖【原理】糖在濃硫酸作用下，可經(jīng)脫水反響生成糠醛或羥甲基糠醛,生成的糠醛或羥甲基糠醛可與蒽酮反響生成藍(lán)綠色糠醛衍生物，在肯定范圍內(nèi),顏色深淺與糖含量成正比，故可用于糖的定量。 由于反響液中的濃硫酸可把多糖水解成單糖而發(fā)生反響， 此外，不同的糖類與蒽酮試劑的顯色深度不同，果糖顯色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露 定單一糖類時(shí)則可避開此種誤差。糖類與蒽酮反響生成的有色物質(zhì)在可見光區(qū)的吸取峰為 630nm，故在此波長(zhǎng)下進(jìn)展比色?！緝x器與用具】同方法一。【試劑】1g，溶于50ml 乙酸乙酯中，貯于棕色瓶

9、中，在黑暗中可保存數(shù)星期，如有結(jié)晶析出，可微熱溶解。濃硫酸1.8?！痉椒ā繕?biāo)準(zhǔn)曲線的制作0.5ml 蒽酮乙酸乙酯試劑和5ml 1min出后自然冷卻至室溫，以空白作參比，在630nm 糖含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，并求出標(biāo)準(zhǔn)線性方程?？扇苄蕴堑奶崛⊥椒ㄒ黄浯尾?。顯色測(cè)定0.5ml于20ml刻度試管中次以下步驟與標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定一樣，測(cè)定樣品的光密度。計(jì)算可溶性糖的含量，計(jì)算公式同方法一。三、3,5-二硝基水楊酸比色法測(cè)定復(fù)原糖【原理】3,5-二硝基水楊酸溶液與復(fù)原糖各種單糖和麥芽糖溶液共熱后被復(fù)原成棕紅色的氨540nm 波長(zhǎng)下測(cè)定棕紅色物質(zhì)的消光度值，查標(biāo)準(zhǔn)曲線，便可求出樣品中復(fù)原糖的含量?！緝x器

10、與用具】25ml 血糖管或刻度試管；大離心管或玻璃漏斗；100ml 燒杯；100ml 三角瓶；100ml 容量瓶；刻度吸管1m2m10m；沸水?。浑x心機(jī)過濾法不用此設(shè)備光光度計(jì)?！驹噭?1mg/ml 100mg 分析純葡萄糖8烘至恒重，100ml 搖勻，冰箱中保存?zhèn)溆谩?3,5-二硝基水楊酸試劑：6.3g 3,5-二硝基水楊酸和262ml 2mol/L NaOH 溶液，加到500ml 含有185g 酒石酸鉀鈉的熱水溶液中，再加5g 結(jié)晶酚和5g 亞硫酸鈉，攪拌溶解。冷卻后加蒸餾水定容至1000ml，貯于棕色瓶中備用?！痉椒ā恐谱髌咸烟菢?biāo)準(zhǔn)曲線取7支具有25ml 刻度的血糖管或刻度試管，編號(hào)，

11、按表24-2所示的量，準(zhǔn)確參加濃度為1mg/ml 的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液和3,5-二硝基水楊酸試劑。將各管搖勻，在沸水浴中加熱5min，取出后馬上放入盛有冷水的燒杯中冷卻至室溫， 再以蒸餾水定容至25ml 刻度處，用橡皮塞塞住管口，顛倒混勻如用大試管，則向每管參加21.5ml 蒸餾水，混勻。在540nm 波長(zhǎng)下，用0號(hào)管調(diào)零，分別讀取16號(hào)管的消光值。以消光值為縱坐標(biāo)，葡萄糖mg 為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，求得直線方程。表24-2各試管加溶液和試劑的量管 號(hào)0123456葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液(ml)00.20.40.60.81.01.22.01.81.61.41.21.00.83,5-二硝基水楊酸試劑ml1.5

12、1.51.51.51.51.51.5相當(dāng)葡萄糖量(mg)00.20.40.60.81.01.2樣品中復(fù)原糖的測(cè)定樣品中復(fù)原糖的提取：準(zhǔn)確稱取3g 食用面粉，放在100ml 的燒杯中，先以少量蒸50ml 50恒溫水浴中保溫20min，使復(fù)原糖浸出。離心或過濾，用20ml 蒸餾水洗殘?jiān)?，再離心或過濾，將兩次離心的上清液或?yàn)V液全部收集在100ml的容量瓶中，用蒸餾水定容至刻度，混勻，作為復(fù)原糖待測(cè)液。顯色和比色：取3支25ml 刻度試管，編號(hào)，分別參加復(fù)原糖待測(cè)液2ml，3,5-二硝基水楊酸試劑1.5ml，其余操作均與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線一樣，測(cè)定各管的消光值。分別在標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出相應(yīng)復(fù)原糖mg數(shù)，按下式計(jì)

13、算復(fù)原糖百分含量：復(fù)原糖%=式中 C標(biāo)準(zhǔn)曲線方程求得的復(fù)原糖mgV提取液的體積ml； 顯色時(shí)吸取樣品液體積ml； 樣品重g。四、淀粉含量的測(cè)定【原理】 的作用下，使單糖脫水生成糠醛類化合物，利用苯酚或蒽酮試劑與糠醛化合物的顯色反響， 即可進(jìn)展比色測(cè)定?！緝x器與用具】100ml4，50ml20.5ml1，2.0ml3，5ml4；分光光度計(jì)；記號(hào)筆。【試劑】1濃硫酸1.8；429.2mol/L HClO ；432蒽酮試劑：同蒽酮法9苯酚，同方法一；4淀粉標(biāo)準(zhǔn)液：準(zhǔn)確稱取100mg 純淀粉，放入100ml 容量瓶中，加6070ml 熱蒸餾水，放入沸水浴中煮沸0.5h，冷卻后加蒸餾水稀釋至刻度，則每

14、ml 含淀粉1mg，吸取此液5.0ml，加蒸餾水稀釋至50mlml含淀粉100g 的標(biāo)準(zhǔn)液。【方法】標(biāo)準(zhǔn)曲線制作取小試管11支從010編號(hào)，按表24-3參加溶液和蒸餾水。以下步驟按苯酚法或蒽酮法均可，見方法一或方法二，繪制相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。表24-3各試管參加標(biāo)準(zhǔn)液和蒸餾水量管 號(hào)12345678910淀粉標(biāo)準(zhǔn)液(ml)00.40.81.21.62.0ml2.01.61.20.80.40mg04080120160200樣品提取將提取可溶性糖以后的殘?jiān)迫?0ml 容量瓶中，加20ml 熱蒸餾水，放入沸水浴中煮沸15min，再參加9.2mol/L 高氯酸2ml 提取15min，冷卻后，混勻，用濾紙過濾，并用蒸餾水定容2500r/min10mi。測(cè)定 可承受苯酚法或蒽酮顯色法測(cè)定。按下式計(jì)算淀粉的含量。淀粉水解時(shí)，在單糖殘基上加了1分子水，因而計(jì)算時(shí)所得的糖量乘以0.9才為扣除參加水量后的實(shí)際淀粉含量。