動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法

1、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本方法第1頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本概念實(shí)驗(yàn)動(dòng)物定義：經(jīng)人工培育和人工改造,對(duì)其攜帶的微生物和寄生蟲(chóng)實(shí)行控制、遺傳背景明確或者來(lái)源清楚，而用于科學(xué)研究、教學(xué)、生物制品或藥品生產(chǎn)、鑒定以及其它科學(xué)實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物第2頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分類(lèi)按遺傳學(xué)分類(lèi)：近交系、封閉群、雜交群。按微生物學(xué)分類(lèi)：普通級(jí)動(dòng)物、清潔級(jí)動(dòng)物、無(wú)特定病原體動(dòng)物、無(wú)菌動(dòng)物第3頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一普通級(jí)動(dòng)物：不攜帶主要人畜共患病病原和動(dòng)物烈性傳染病的病原。清潔級(jí)動(dòng)物：除普通動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜

2、帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原。第4頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一無(wú)特定病原體動(dòng)物：除清潔級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對(duì)科學(xué)實(shí)驗(yàn)干擾大的病原。無(wú)菌動(dòng)物：無(wú)可檢出的一切生命體。第5頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的護(hù)理和使用原則1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飼養(yǎng)和使用應(yīng)遵守國(guó)家有關(guān)的法律和規(guī)定。2、應(yīng)明確使用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的理由和目的。3、明確實(shí)驗(yàn)所使用動(dòng)物的種類(lèi)和數(shù)量，動(dòng)物的數(shù)量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)的要求。4、完善操作規(guī)程，避免或減輕因?qū)嶒?yàn)對(duì)動(dòng)物造成的不適和痛苦。包括使用適當(dāng)?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法；禁止不必要的重復(fù)。第6頁(yè)，共84

3、頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一5、嚴(yán)格按程序?qū)嵤?shí)驗(yàn)后動(dòng)物的處理，包括麻醉、止痛、實(shí)驗(yàn)后的護(hù)理或用麻醉方法處死。6、實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要求保證實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的良好生活條件，包括飼養(yǎng)環(huán)境、符合需求的飼料及細(xì)心的護(hù)理等。7、研究人員和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物操作人員應(yīng)接受實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的基本知識(shí)和操作技能等方面的培訓(xùn)。8、使用過(guò)程中要求保證周?chē)h(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員的安全。第7頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)過(guò)程的行為規(guī)范1、物理限制2、手術(shù)操作3、飲食的限制4、廢棄物和尸體處理第8頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一物理限制： 是指在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中（包括檢查、收集標(biāo)本、給藥

4、、治療或?qū)嶒?yàn)操作等），用手或工具限制動(dòng)物活動(dòng)的過(guò)程。根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容不同，限制時(shí)間有差異，但要求盡量縮短限制時(shí)間。有些動(dòng)物，如狗和靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物可以通過(guò)簡(jiǎn)單的訓(xùn)練達(dá)到目的.第9頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一物理限制的主要原則和要求包括：限制的工具不能作為常規(guī)的飼養(yǎng)工具。工具的設(shè)計(jì)應(yīng)合理，不要僅考慮實(shí)驗(yàn)的便利，主要考慮盡量減少動(dòng)物的不適，避免傷害。盡量減少限制的時(shí)間，以達(dá)到實(shí)驗(yàn)?zāi)康臑榛鶞?zhǔn)。在限制過(guò)程中，如果發(fā)生損傷或嚴(yán)重的行為改變，應(yīng)暫停或禁止限制，并給予處理或治療。保證實(shí)驗(yàn)人員和周?chē)藛T的安全。第10頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一手術(shù)操作有些實(shí)驗(yàn)

5、需要對(duì)動(dòng)物進(jìn)行手術(shù)，即打開(kāi)或刺穿動(dòng)物的身體，對(duì)動(dòng)物的物理或生理機(jī)能產(chǎn)生較大的損害，同時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員也容易被血液/體液污染或被器械、針頭刺傷，存在潛在生物污染的威脅，因此必須做到：操作一定要使用適當(dāng)?shù)逆?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛或麻醉方法。禁止不必要的重復(fù)操作。不提倡利用一個(gè)動(dòng)物進(jìn)行多個(gè)手術(shù)實(shí)驗(yàn)，但是，為充分利用動(dòng)物資源，經(jīng)動(dòng)物倫理委員會(huì)許可，在可能的條件下可以實(shí)施。嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作規(guī)程，防止發(fā)生血液/體液外濺和針刺傷，避免生物污染。手術(shù)后的動(dòng)物、標(biāo)本以及所用器具材料等必須按規(guī)定程序妥善處置。第11頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一飲食的限制 實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物原則上要求隨時(shí)飲食，如果一些實(shí)驗(yàn)需要?jiǎng)游锵?/p>

6、制食物或水的攝入量，應(yīng)保證動(dòng)物存活所需要的最低需求量。根據(jù)研究的目的，食物的限量應(yīng)經(jīng)過(guò)科學(xué)的論證，其限量的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)容易操作，如正常攝入量的百分比或動(dòng)物體重的百分比。對(duì)于水分的限量攝入，一定要防止動(dòng)物發(fā)生脫水現(xiàn)象，并要保持動(dòng)物的膳食平衡。第12頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一廢棄物和尸體處理1動(dòng)物尸體的處理 安樂(lè)處死后的動(dòng)物尸體，取材完畢后，經(jīng)121 30min高壓滅菌處理后，集中送環(huán)保部門(mén)處理。動(dòng)物生物安全三級(jí)（animal biosafety level 3, ABSL-3）實(shí)驗(yàn)室及以上級(jí)的實(shí)驗(yàn)室的感染動(dòng)物尸體需經(jīng)室內(nèi)和雙扉兩道高壓滅菌，才能移出實(shí)驗(yàn)室。2. 動(dòng)物咽拭

7、子的處理 用于病原分離和PCR檢測(cè)的咽拭子，按照各自的要求處理后，進(jìn)行病毒分離和PCR檢測(cè)，剩余的標(biāo)本經(jīng)121，30min高壓消毒處理。3. 病原分離培養(yǎng)物的處理 病原分離的培養(yǎng)物，不論是陽(yáng)性還是陰性結(jié)果，均需經(jīng)121，30min高壓消毒處理。 第13頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基本原則盡量選擇研究對(duì)象的功能、代謝、結(jié)構(gòu)及疾病與人類(lèi)相似的動(dòng)物；解剖、生理特點(diǎn)符合實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊螅粚?shí)驗(yàn)動(dòng)物不同品種品系的特點(diǎn)；選擇標(biāo)準(zhǔn)化實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；符合實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇的一般原則；經(jīng)濟(jì)性原則；要考慮到動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的外推；注意有關(guān)國(guó)際規(guī)范。第14頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，1

8、5點(diǎn)31分，星期一動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基本技術(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的抓取、保定與給藥1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的編號(hào)和分組2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉34實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血第15頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一大鼠豚鼠家兔犬一、抓取、保定與給藥小鼠第16頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一小鼠的捉持1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部將小鼠提起，放在飼養(yǎng)合的面罩上。用左手拇指和食指迅速、準(zhǔn)確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。翻轉(zhuǎn)左手掌，以左手掌心和中指夾小鼠背部的皮膚，使小鼠整個(gè)呈一條直線。用左手拇指和食指迅速、準(zhǔn)確地捏住小鼠的兩耳后及頸背部的皮膚，將小鼠提起。第17頁(yè)，共84頁(yè)，2022

9、年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一大鼠的捉持首先戴好防護(hù)手套用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部將大鼠提起，放在大鼠飼養(yǎng)盒的面罩上。 左手順勢(shì)按、卡在大鼠軀干背部，稍加壓力向頭頸部滑行。以左手拇指和食指捏住大鼠兩耳后部的頭頸皮膚，其余三指和手掌握住大鼠背部皮膚，完成抓取固定。第18頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一豚鼠的捉持先用左手輕輕扣、按住豚鼠背部。順勢(shì)抓緊其肩胛上方皮膚，拇指和食指環(huán)箍其頸部。用右手輕輕托住其臀部，即可將豚鼠抓取固定。第19頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一兔的捉持用右手抓住兔頸部的被毛和皮膚，輕輕把兔提起。用左手托住兔的臀部

10、家兔的固定方式有腹臥式和仰臥式兩種 第20頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一犬的捉持實(shí)驗(yàn)者先撫摩，逐步接近，勿使其驚恐或?qū)⑵浼づ?用粗棉繩兜住狗的下頜，并在上頜打結(jié)（勿太緊）。 如犬不合作，則先用一根特制長(zhǎng)柄狗頭夾，從后面夾住犬頸，限制犬頭部活動(dòng)，再按上述方法捆住犬嘴。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的捉拿.MPG第21頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一灌胃給藥大小鼠1、將灌胃針連接在注射器上，吸入一定量的藥液。左手捉持動(dòng)物，使頭部向上。右手持針，把灌胃針頭的前端放進(jìn)動(dòng)物的口腔，順著上腭部插入咽部，順咽后壁輕輕往下推。用右手食指將針?biāo)聣?，將注射器中的藥液灌?/p>

11、動(dòng)物的胃中。劑量：小鼠約10g體重。最大體積為1.0ml/只 大鼠約1-2 ml100g體重，最大體積為5.0ml/只第22頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一灌胃給藥兔將兔放進(jìn)固 定架內(nèi)，灌胃者用左手拇指和中指擠壓兔兩頰，將下頜擠開(kāi)使兔被動(dòng)張口。 右手將開(kāi)口器從一側(cè)口角插入口腔并固定。胃管經(jīng)開(kāi)口器的孔插入，向前推進(jìn)約15cm，可達(dá)胃內(nèi)。在插管時(shí)應(yīng)將胃管另一端泡在水中確認(rèn)沒(méi)有冒氣泡，即可用注射器經(jīng) 胃管注入藥液。豚鼠灌胃同家兔第23頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一皮下注射給藥大小鼠頸背部、腋下、腹側(cè)和后肢的皮下注射針頭取一銳角角度刺入皮下。將針頭

12、輕輕向左右 擺動(dòng)，易擺動(dòng)則表示已 刺入皮下。再輕輕抽吸， 如無(wú)回血，可緩慢地將 藥物注入皮下第24頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一靜脈注射給藥大小鼠將大小鼠放在金屬籠或小鼠固定器 中，通過(guò)金屬籠或大小鼠固定器的孔拉出鼠尾巴用左手捏住鼠尾巴中下部，用75 酒精棉球反復(fù)擦拭尾部注射時(shí)，以左手拇指和中指捏住鼠尾兩側(cè)，用食指從下面托起尾，右手持4號(hào)針頭的注射器，使針頭與 靜脈平行（小于30度角）大鼠亦可用舌下靜脈注射第25頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一靜脈注射給藥犬前肢皮下頭靜脈或后肢小隱靜脈注射 。先將注射部位毛剪去 。在靜脈血管的近心端，用乳膠

13、管扎緊肢體，使血管充盈，注射器針頭向靜脈血管的近心端方向穿刺 ?；爻樽⑸淦麽?biāo)?，如有回血，則證明針尖在血管內(nèi)，即可推注藥液。 第26頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一靜脈注射給藥兔兔放在固定架內(nèi)，酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳緣靜脈充盈。 用左手食指和中指夾住兔的耳緣靜脈的近端，拇指繃緊靜脈的遠(yuǎn)端，無(wú)名指和小指放在耳郭下作墊。右手拿注射器，針尖的斜面朝上，將針 頭從遠(yuǎn)心端插入血管回抽有血即可注射，拔針后用棉球止血豚鼠可用足背靜脈注射實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的給藥.MPG第27頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一不同種類(lèi)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物一次給藥能耐受的最大容量（ml）動(dòng)物名稱

14、灌 胃皮內(nèi)注射皮下注射肌肉注射腹腔注射靜脈注射小鼠1.00.11.50.210.8大鼠5.00.15.00.524.0兔1000.2102.0510貓1500.2102.0510猴3000.3503.01020犬2500.31004.0-100第28頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一人與動(dòng)物用藥量換算一般可按下列比例換算： 人用藥量為1，小鼠、大鼠為25-50倍，兔、豚鼠為15-20倍，犬貓為5-10倍。 此外，可以采用人與動(dòng)物的體表面積計(jì)算法來(lái)?yè)Q算。第29頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采血 5231尾尖采血眼眶靜脈叢采血斷頭采

15、血腹主動(dòng)脈采血4心臟采血腹主動(dòng)脈采血6靜脈采血第30頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法：固定動(dòng)物并露出鼠尾，將尾部在45的溫水中浸泡數(shù)分鐘（或以二甲苯棉球涂擦），使尾部血管擴(kuò)張。將鼠尾擦干，用銳器切去尾尖0.30.5cm，讓血液滴入盛器或直接以血紅蛋白吸管吸取。對(duì)象：大、小鼠特點(diǎn)：小量采血，可以多次采血。 1尾尖采血第31頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法：用左手捉鼠，拇指及中指抓住頭頸部皮膚，食指按于眼后，使眼球輕度突出，眼底球后靜脈叢淤血。右手持取內(nèi)徑為的玻璃毛細(xì)管（臨用前折斷成1-1.5cm長(zhǎng)的毛細(xì)管段，浸入1肝素溶液中，干燥后用）

16、刺入深度小鼠23mm，大鼠45mm。當(dāng)感到有阻力時(shí)再稍后退，得到所需要的血量后，拔出。 對(duì)象：大、小鼠等。特點(diǎn)：中等血量（0.20.3ml，小鼠；0.51.0ml，大白鼠），避免動(dòng)物死亡。2眼眶靜脈叢采血第32頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法：左手以拇指和食指保持動(dòng)物的頭頸部，使其頭略下傾，右手持剪刀猛力剪斷鼠頸，讓血液滴入盛器。 對(duì)象：大、小鼠等。特點(diǎn)：需要血量較大（小白鼠可采血0.81.0ml，大白鼠可采血5.08.0ml） ，且不需要繼續(xù)保存動(dòng)物生命時(shí)用本法。3斷頭采血 第33頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法：動(dòng)物要麻醉后進(jìn)行，

17、用針管在腹主動(dòng)脈分叉處，與血管平行刺入。對(duì)象：大、小鼠等。特點(diǎn)：需要血量較大，且不需要繼續(xù)保存動(dòng)物生命時(shí)用本法。4腹主動(dòng)脈采血第34頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法：將動(dòng)物背位固定，在左胸第2至第4肋間剪毛一塊，用碘酒和酒精消毒。然后用配有7號(hào)針頭的10ml注射器，在心跳最明顯處作穿刺。針頭刺入心臟后即見(jiàn)血液流入注射器；或邊刺邊抽，直至血液流入注射器。取得所需血量后，迅速將針頭拔出，這樣心肌上的穿刺孔較易閉合。 對(duì)象：兔、豚鼠等。特點(diǎn)：采血量較大，繼續(xù)保存動(dòng)物生命。5心臟采血第35頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法：將家兔放在固定箱內(nèi)，

18、剪去擬采血耳殼上的毛，用電燈照射加熱或用二甲苯棉球涂擦耳殼，使耳部血管擴(kuò)張。用粗針頭刺破耳緣靜脈或以刀片在血管上切一小口，讓血液自然流出，滴入已放有抗凝劑的盛器中。采血完畢，用干棉球壓住出血口，以待止血。如一時(shí)不易止血，可用木夾夾住耳殼1020分鐘。 對(duì)象：犬在前肢靜脈、后肢小隱靜脈采血；小型豬為耳大靜脈、后肢靜脈特點(diǎn)：采血量較大，繼續(xù)保存動(dòng)物生命。6靜脈采血第36頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物被毛去除方法 拔毛法：用拇指和食指拔去被毛的方法 剪毛法：用剪刀緊貼皮膚剪去被毛剃毛法：用剃毛刀剃去動(dòng)物被毛。脫毛法：用化學(xué)藥品脫去動(dòng)物被毛。第37頁(yè)，共84頁(yè)，

19、2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)與分組（一）編號(hào)： 1、單色涂染法：在每組動(dòng)物不超過(guò)l0只或一個(gè)實(shí)驗(yàn)不超過(guò)40只的情況下適用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠。 常用染色劑：3-5苦味酸溶液， 可染成黃色。第38頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一 方法步驟： (1)涂染原則：從左到右、從上到下。 (2)左前肢為l號(hào)、左側(cè)腹部2號(hào)、 左后肢3號(hào)。 (3)兩耳后部4號(hào)、背中部5號(hào)、 后肢背部6號(hào)。 (4)右前肢7號(hào)、 右側(cè)腹部8號(hào)、 右后肢9號(hào)。 (5)尾巴根為10號(hào)。（6）額部為20號(hào)第39頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一 2、

20、雙色涂染法： 在每組動(dòng)物不超過(guò)100只的情況下用。 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠、小鼠。 常用染色劑： (1)3-5苦味酸溶液，可染成黃色。 作為“個(gè)”位數(shù)。 (2) 0.5%中性紅或品紅溶液，可染 成紅色。作為“十”位數(shù)。 第40頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一方法步驟： (1) 用兩種顏色同時(shí)進(jìn)行染色標(biāo)記。 (2) 用苦味酸(黃色)染色標(biāo)記作為個(gè)位數(shù)。(3) 用品紅(紅色)染色標(biāo)記作為十位數(shù)，（4）左前肢為10號(hào)、 左側(cè)腹部20號(hào)、 左后肢30號(hào)， 兩耳后部40號(hào)、 背部50號(hào)、 后肢背部60號(hào)， 右前肢70號(hào)、 右側(cè)腹部 80號(hào)、 右后肢90號(hào) 第100號(hào)不作染色標(biāo)記。 第4

21、1頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一3、穿耳孔法 用專(zhuān)用耳空器在動(dòng)物耳朵不同部位打一小孔或缺口表示一定號(hào)碼的方法，原則是：左耳代表十位，右耳代表個(gè)位。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：兔、犬、豬4、標(biāo)牌法 一般掛在動(dòng)物的頸部、耳朵、腳上或 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：犬、猴5、烙印法直接把標(biāo)記編號(hào)烙印在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物身體上的方法，尤如蓋印章一樣。第42頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一 左耳 右耳1012 52050耳緣編號(hào)第43頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一一般來(lái)說(shuō)，大、小鼠多采用染色法，豚鼠、家兔宜使用耳孔法，犬、猴、貓較適合掛牌法，犬還可用烙印法。第44頁(yè)，共

22、84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一四、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物編號(hào)與分組（二）分組：1、組別的要求： 正常對(duì)照組 模型組 陽(yáng)性藥組 藥物不同劑量組第45頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一（1）正常對(duì)照組 要求不加任何處理，指在正常條件下進(jìn)行觀察和對(duì)照，給藥組如是灌胃給藥，對(duì)照組應(yīng)用灌胃溶劑。 目的對(duì)比觀察模型是否成功；觀察被試藥能否使病理改變恢復(fù)正常。（2）陽(yáng)性藥對(duì)照組 要求所選藥必須是藥典所有的或國(guó)家批準(zhǔn)的藥，如用西藥，則采用公認(rèn)的，療效可靠的。 目的說(shuō)明所用方法的可靠性；對(duì)比新藥的優(yōu)劣和特點(diǎn)。（3）模型對(duì)照組 要求除不用藥外，其他處理同給藥組，模型要符合中醫(yī)證或病

23、的模型。 目的對(duì)比觀察受試藥的藥理作用。第46頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一（4）藥物組一般應(yīng)設(shè)三個(gè)劑量組，大動(dòng)物，操作特殊困難者可設(shè)兩個(gè)劑量組；能夠測(cè)出LD50的受試藥物，動(dòng)物試驗(yàn)給藥劑量一般為1/101/5 LD50；很多中藥制劑毒性甚小，無(wú)法測(cè)出LD50者，一般常用人用劑量（g或mg生藥/kg體重）來(lái)折算動(dòng)物用量；正式實(shí)驗(yàn)時(shí)常以等效劑量作為中劑量或小劑量，大、中、小劑量差以23的等比級(jí)數(shù)為宜； 第47頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一完全隨機(jī)分組 完全隨機(jī)分組時(shí)將試驗(yàn)對(duì)象完全按隨機(jī)原則分組。它的設(shè)計(jì)、分組、和統(tǒng)計(jì)處理都比較簡(jiǎn)單，但試驗(yàn)效

24、率較低。 例：將30只SD 大鼠隨機(jī)分配到甲、乙、丙3組。 使用excel對(duì)試驗(yàn)對(duì)象完全隨機(jī)分組的操作步驟如下: （二）分組的方法第48頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號(hào)、隨機(jī)號(hào)、分組號(hào)，隨后在A2、A3中分別鍵入1、2，然后拖動(dòng)鼠標(biāo)利用excel的自動(dòng)填充功能完成130的編號(hào)。 2.在B2單元格鍵入“=RAND()”后回車(chē)產(chǎn)生一個(gè)隨機(jī)數(shù)字，然后同樣利用其自動(dòng)填充功能在B2B31生成一列隨機(jī)數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)是會(huì)隨著單元格的操作而變化的。故需選中“B2”至“B31”單元格區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進(jìn)行選擇性

25、粘貼。 第49頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一3.選中A 列、B 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”,在彈出的對(duì)話框中,選擇以隨機(jī)數(shù)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,按“確定”按扭,則按B 列隨機(jī)數(shù)字的大小完成A 列、B 列的排序。 4.分別在C2C11、C12C21 和C22C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標(biāo)同時(shí)選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”命令,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。（見(jiàn)表1）第50頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一隨機(jī)區(qū)組分組 隨機(jī)區(qū)

26、組分組是按照一定條件，將幾個(gè)條件相同的試驗(yàn)對(duì)象分為一個(gè)區(qū)組，然后在每個(gè)區(qū)組內(nèi)部按隨機(jī)化原則，將每個(gè)對(duì)象分配到各組。 例：將SD大鼠32只，體重180g220g,按體重大小配成8 個(gè)單位組,每個(gè)單位組中的4 只大鼠隨機(jī)分配接受A、B、C、D 4 種處理,試給出隨機(jī)化分組的結(jié)果 1.在單元格A1、B1、C1中分別鍵入編號(hào)、區(qū)組號(hào)、隨機(jī)號(hào)，隨后在A2A3中分別鍵入1、2，然后拖動(dòng)鼠標(biāo)利用excel的自動(dòng)填充功能完成132的編號(hào)。 2.在C2單元格鍵入“=RAND()”后回車(chē)產(chǎn)生一個(gè)隨機(jī)數(shù)字，然后同樣利用其自動(dòng)填充功能在C2C33生成一列隨機(jī)數(shù)。需注意的是這里產(chǎn)生的隨機(jī)數(shù)是會(huì)隨著單元格的操作而變化的。

27、故需選中“C2”至“C33”單元格區(qū)域,復(fù)制所選中的區(qū)域,并以數(shù)據(jù)格式進(jìn)行選擇性粘貼。 第51頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一3.選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“區(qū)組”為“主要關(guān)鍵字”排序“, 隨機(jī)數(shù)”為“次要關(guān)鍵字”排序,然后,單擊“確定”按鈕,即完成以區(qū)組單位的隨機(jī)數(shù)字排序4.分別在C2C11、C12C21 和C22C31 單元格中,依次鍵入“1”、“2”、“3”;用鼠標(biāo)同時(shí)選中A、B、C 列,單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”命令,在彈出的“排序”對(duì)話框中,選擇以“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象

28、的分組編號(hào)。5. 在“D1”中鍵入“分組號(hào)”,在“D2”、“D3”、“D4”和“D5”中分別依次鍵入“1”、“2”、“3”和“4”,對(duì)余下的各個(gè)區(qū)組,同樣依次輸入“1”、“2”、“3”和“4”,作為同一區(qū)組內(nèi)4 對(duì)象的分組號(hào)。第52頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一 6. 單擊菜單欄“數(shù)據(jù)”“排序”,在彈出的對(duì)話框中,選擇“編號(hào)”為排序的“主要關(guān)鍵字”,單擊“確定”按鈕,這樣就可以得到各個(gè)實(shí)驗(yàn)對(duì)象的分組編號(hào)。（見(jiàn)表2）第53頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一分層分組法：將動(dòng)物先按雌雄分層，然后分別稱體重，將體重相同的放在一起，不同體重的動(dòng)物放在不

29、同的動(dòng)物盒中，按實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)要求分別放在各組動(dòng)物盒中，使每只動(dòng)物都有相同的機(jī)會(huì)分配到各組，如此分組的結(jié)果，各實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物平均體重基本一致。 第54頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一抽簽法：如有小鼠40只，要隨機(jī)分為四組，可將小鼠從1-40編號(hào)，將準(zhǔn)備的號(hào)簽也編1-40號(hào)，然后將號(hào)簽充分混合后，隨機(jī)各抽10個(gè)號(hào)，然后對(duì)號(hào)將小鼠分配到各個(gè)組去； 第55頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一摸球法：如實(shí)驗(yàn)所需設(shè)四組，即可用40只雌雄各半的小鼠，將小鼠按體重大小排列，雄性鼠編為1-20號(hào)，雌性鼠編為21-40號(hào)，然后用紅、黃、藍(lán)、綠四種彩球表示甲、乙、丙、丁四組，

30、將數(shù)量相等四種顏色的球放入一個(gè)口袋里，充分混合后，每次摸取都要徹底混合，每次摸出一個(gè)，然后放回袋中，若第一次摸出是紅球，就將第一鼠放入甲組，第二次摸出的綠球，就將第二號(hào)放入丁組，第三次摸出的又是紅球，因已出現(xiàn)過(guò)紅球，可不計(jì)再放回口袋，重新摸取，第四次摸出的籃球，將第三號(hào)鼠放入丙組，第四號(hào)鼠不必再摸球決定，剩下的乙組就是第四號(hào)鼠，如此類(lèi)推，將鼠分配完畢。 第56頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一五、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的麻醉動(dòng)物麻醉是消除動(dòng)物手術(shù)疼痛，便于實(shí)驗(yàn)操作，保證動(dòng)物安全，為手術(shù)創(chuàng)造良好的條件。動(dòng)物全身麻醉分四期：1.第一期：隨意興奮期，出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)與運(yùn)動(dòng)失調(diào)；2.第二期：不隨意興

31、奮期，由意識(shí)完全喪失至規(guī)則的自動(dòng)呼吸開(kāi)始時(shí)止。3.第三期：外科麻醉期，4.第四期：延髓麻醉期，進(jìn)入此期，麻醉已嚴(yán)重過(guò)量。第57頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一麻醉方法與麻醉藥麻醉方法：全身麻醉和局部麻醉，通過(guò)吸入、注射（靜脈、皮下、肌肉、腹腔）、口服、灌胃等方法使動(dòng)物麻醉。常用麻醉藥物：乙醚（吸入），戊巴比妥鈉、硫賁妥鈉、氯胺酮（靜脈），普魯卡因、利多卡因（局麻）第58頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一常用麻醉藥的劑量及注射途徑種類(lèi)戊巴比妥硫賁妥鈉鹽酸氯胺酮水合氯醛烏拉坦mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg途徑mg/kg小鼠35

32、50IVIP2550I.V.IP22-44IM400IP-大鼠2550IVIP2040IVIP22-44IM300IP0.75IP豚鼠3040IVIP2055IVIP22-44IM200-300IP1.5IP家兔3040IVIP20IV22-441.0IVIP狗30IV25IV125IV1.0IV豬45kg30-2015IVIV10-95IVIV10-1510-15IMIM第59頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一麻醉注意事項(xiàng)麻醉前應(yīng)準(zhǔn)確稱體重；注意麻醉劑量，麻醉劑量與動(dòng)物品種、健康狀況有關(guān)；麻醉過(guò)程中注意觀察動(dòng)物的反應(yīng)情況；注意保溫，在寒冷冬季，麻醉劑在注射前應(yīng)加熱至動(dòng)

33、物體溫水平；靜脈注射時(shí)，速度要均勻，不宜太快。注射速度過(guò)快是引起動(dòng)物死亡的重要因素之一；如麻醉深度不夠，必須經(jīng)過(guò)一定時(shí)間后，才能補(bǔ)充麻醉劑，如戊巴比妥鈉至少須在第1次注射5分鐘以后，苯巴比妥鈉至少須經(jīng)過(guò)30分鐘以上。一般情況下，補(bǔ)加劑量1次不得超過(guò)原注射量的1.41.5；第60頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一麻醉注意事項(xiàng)動(dòng)物在麻醉狀態(tài)體溫容易下降，手術(shù)中和手術(shù)后要采取保暖措施；及時(shí)處理麻醉過(guò)量的動(dòng)物，使用10%的咖啡因，按0.1ml/kg靜脈注射或用10%的可拉明按0.20.5 ml/kg靜脈或肌肉注射。第61頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一

34、六、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的采尿方法代謝籠法導(dǎo)尿法壓迫膀胱法第62頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一七、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物處死方法 頸椎脫臼處死法 斷頭處死法 擊打頭蓋骨處死法 放血處死法空氣栓塞處死法過(guò)量麻醉處死法第63頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一八、試驗(yàn)記錄的標(biāo)準(zhǔn)化與規(guī)范化實(shí)驗(yàn)紀(jì)錄的定義 指在檢測(cè)、研究過(guò)程中，應(yīng)用實(shí)驗(yàn)、觀察、調(diào)查或資料分析等方法，根據(jù)實(shí)際情況直接記錄或統(tǒng)計(jì)形成的各種數(shù)據(jù)、文字、圖表、聲像等原始資料。第64頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄規(guī)范化的目的 保證實(shí)驗(yàn)記錄真實(shí)、規(guī)范、完整，提高檢測(cè)或研究的質(zhì)量。實(shí)驗(yàn)記錄

35、的基本要求 真實(shí)、及時(shí)、準(zhǔn)確、完整、防止漏記和隨意涂改。不得偽造、編造數(shù)據(jù)。第65頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄的用紙 本研究機(jī)構(gòu)統(tǒng)一 帶頁(yè)碼標(biāo)號(hào) 幅面一致 保持完整第66頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄應(yīng)包括的內(nèi)容實(shí)驗(yàn)名稱 實(shí)驗(yàn)?zāi)康膶?shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)起止時(shí)間實(shí)驗(yàn)人員實(shí)驗(yàn)環(huán)境實(shí)驗(yàn)材料實(shí)驗(yàn)步驟觀察指標(biāo)實(shí)驗(yàn)結(jié)果結(jié)果分析操作者、復(fù)核者簽名負(fù)責(zé)人檢查、簽署意見(jiàn)第67頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一基本要求 原始性 真實(shí)性 完整性 可溯源性第68頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄的書(shū)寫(xiě)豎

36、用橫寫(xiě)，不用鉛筆；用字規(guī)范、字跡工整；縮寫(xiě)正確，譯注原文；術(shù)語(yǔ)單位，符合標(biāo)準(zhǔn)。第69頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄的保存避免水浸、墨污、卷邊保持整潔完好無(wú)破損、不丟失第70頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄的歸檔實(shí)驗(yàn)負(fù)責(zé)人和記錄人在記錄后簽名課題負(fù)責(zé)人或上一級(jí)研究人員定期檢查實(shí)驗(yàn)記錄，并簽署檢查意見(jiàn)研究工作結(jié)束后整理歸檔第71頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)記錄中易出現(xiàn)的問(wèn)題實(shí)驗(yàn)名稱： 1子實(shí)驗(yàn)缺課題名稱或缺實(shí)驗(yàn)名稱。 2未指明代號(hào)的解釋權(quán)由誰(shuí)負(fù)責(zé)。第72頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，15點(diǎn)31分，星期一實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)或方案3缺或不完整。4 無(wú)設(shè)計(jì)者和（或）審批者簽名。5 設(shè)計(jì)的理由不充分。6修正后未陳述理由并署名。第73頁(yè)，共84頁(yè)，2022年，5月20日，