1500L哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)線工藝描述 ―細(xì)胞培養(yǎng)部分 ―蛋白純化部分

1、P 45/451500L哺乳動(dòng)物細(xì)胞生產(chǎn)線工藝描述細(xì)胞培養(yǎng)部分蛋白純化部分Process Summary for 1500L Mammalian Cell Train目錄 TOC o 1-2 h z u HYPERLINK l _Toc332615136 Process Block Flow Diagram PAGEREF _Toc332615136 h 4 HYPERLINK l _Toc332615137 1Media Preperation PAGEREF _Toc332615137 h 5 HYPERLINK l _Toc332615138 1.1WeightCheck PAGEREF

2、 _Toc332615138 h 5 HYPERLINK l _Toc332615139 1.2Air filter FG1064無菌空氣過濾器 PAGEREF _Toc332615139 h 5 HYPERLINK l _Toc332615140 1.3Cool WFI Prep. PAGEREF _Toc332615140 h 5 HYPERLINK l _Toc332615141 1.4Small volume Media Prep. PAGEREF _Toc332615141 h 6 HYPERLINK l _Toc332615142 1.550L Media Prep. PAGERE

3、F _Toc332615142 h 6 HYPERLINK l _Toc332615143 1.6400L Media Prep. PAGEREF _Toc332615143 h 8 HYPERLINK l _Toc332615144 1.71200L Media Prep. PAGEREF _Toc332615144 h 10 HYPERLINK l _Toc332615145 2Cell Culture PAGEREF _Toc332615145 h 13 HYPERLINK l _Toc332615146 2.1Seed recovery PAGEREF _Toc332615146 h

4、13 HYPERLINK l _Toc332615147 2.2Seed Propagation PAGEREF _Toc332615147 h 13 HYPERLINK l _Toc332615148 2.310L wave Bioreactor PAGEREF _Toc332615148 h 13 HYPERLINK l _Toc332615149 2.460L Bioreactor PAGEREF _Toc332615149 h 13 HYPERLINK l _Toc332615150 2.5300L Bioreactor PAGEREF _Toc332615150 h 14 HYPER

5、LINK l _Toc332615151 2.61500L Bioreactor PAGEREF _Toc332615151 h 14 HYPERLINK l _Toc332615152 2.7組件清洗 PAGEREF _Toc332615152 h 14 HYPERLINK l _Toc332615153 2.8組件滅菌 PAGEREF _Toc332615153 h 14 HYPERLINK l _Toc332615154 3Harverst PAGEREF _Toc332615154 h 15 HYPERLINK l _Toc332615155 3.1Centrifuge PAGEREF

6、 _Toc332615155 h 15 HYPERLINK l _Toc332615156 3.2Filter PAGEREF _Toc332615156 h 15 HYPERLINK l _Toc332615157 3.3離心機(jī)及收獲管路清潔 PAGEREF _Toc332615157 h 15 HYPERLINK l _Toc332615158 3.4收獲罐SIP PAGEREF _Toc332615158 h 15 HYPERLINK l _Toc332615159 3.5收獲 PAGEREF _Toc332615159 h 15 HYPERLINK l _Toc332615160 3.

7、6收獲罐CIP PAGEREF _Toc332615160 h 16 HYPERLINK l _Toc332615161 3.8收獲罐冷卻 PAGEREF _Toc332615161 h 16 HYPERLINK l _Toc332615162 4UF PAGEREF _Toc332615162 h 17 HYPERLINK l _Toc332615163 4.1冷注射用水準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615163 h 17 HYPERLINK l _Toc332615165 4.3UF系統(tǒng)使用前消毒 PAGEREF _Toc332615165 h 19 HYPERLINK l _Toc

8、332615168 4.4UF 開始操作 PAGEREF _Toc332615168 h 20 HYPERLINK l _Toc332615181 5親和層析 PAGEREF _Toc332615181 h 21 HYPERLINK l _Toc332615182 5.1層析緩沖液(buffer2)準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615182 h 21 HYPERLINK l _Toc332615183 5.2層析緩沖液（buffer 3）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615183 h 22 HYPERLINK l _Toc332615187 5.3層析緩沖液（buffer 4）準(zhǔn)備

9、 PAGEREF _Toc332615187 h 23 HYPERLINK l _Toc332615189 5.4層析緩沖液（buffer 5）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615189 h 24 HYPERLINK l _Toc332615191 5.5層析緩沖液（buffer 6）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615191 h 25 HYPERLINK l _Toc332615192 5.6層析緩沖液（buffer 7）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615192 h 26 HYPERLINK l _Toc332615193 5.7親和層析操作 PAGEREF _Toc33

10、2615193 h 27 HYPERLINK l _Toc332615205 6病毒滅活 PAGEREF _Toc332615205 h 29 HYPERLINK l _Toc332615206 6.1產(chǎn)品pH酸性調(diào)節(jié)，開始低pH病毒滅活 PAGEREF _Toc332615206 h 29 HYPERLINK l _Toc332615207 6.23個(gè)小時(shí)以后將產(chǎn)品的pH調(diào)節(jié)到中性，病毒滅活結(jié)束。 PAGEREF _Toc332615207 h 29 HYPERLINK l _Toc332615208 6.3攪拌5分鐘取樣。 PAGEREF _Toc332615208 h 29 HYPERL

11、INK l _Toc332615209 6.4產(chǎn)品稀釋 PAGEREF _Toc332615209 h 29 HYPERLINK l _Toc332615210 6.5產(chǎn)品降溫 PAGEREF _Toc332615210 h 29 HYPERLINK l _Toc332615211 6.6product transfer line CIP（從purification hold tank到層析系統(tǒng)） PAGEREF _Toc332615211 h 29 HYPERLINK l _Toc332615212 6.7buffer transfer line CIP（從buffer hold tank（

12、VE1214）到purification hold tank） PAGEREF _Toc332615212 h 29 HYPERLINK l _Toc332615213 7陽離子層析 PAGEREF _Toc332615213 h 30 HYPERLINK l _Toc332615214 7.1層析緩沖液（buffer 9）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615214 h 30 HYPERLINK l _Toc332615218 7.2層析緩沖液（buffer10）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615218 h 31 HYPERLINK l _Toc332615221 7.3層析緩沖

13、液（buffer11）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615221 h 32 HYPERLINK l _Toc332615223 7.4陽離子層析操作 PAGEREF _Toc332615223 h 33 HYPERLINK l _Toc332615233 8陰離子層析 PAGEREF _Toc332615233 h 35 HYPERLINK l _Toc332615234 8.1層析緩沖液（buffer 12）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615234 h 35 HYPERLINK l _Toc332615237 8.2層析緩沖液（buffer14）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc3

14、32615237 h 36 HYPERLINK l _Toc332615239 8.3陰離子層析操作 PAGEREF _Toc332615239 h 37 HYPERLINK l _Toc332615248 9UF PAGEREF _Toc332615248 h 38 HYPERLINK l _Toc332615249 9.1冷注射用水準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615249 h 38 HYPERLINK l _Toc332615252 9.2超濾置換緩沖液（buffer15）準(zhǔn)備 PAGEREF _Toc332615252 h 39 HYPERLINK l _Toc332615254

15、 9.3UF系統(tǒng)使用前消毒 PAGEREF _Toc332615254 h 40 HYPERLINK l _Toc332615259 9.4UF 開始操作 PAGEREF _Toc332615259 h 41 HYPERLINK l _Toc332615269 10除菌過濾 PAGEREF _Toc332615269 h 42 HYPERLINK l _Toc332615270 10.1除菌過濾操作 PAGEREF _Toc332615270 h 42 HYPERLINK l _Toc332615272 10.2超濾系統(tǒng)清洗 PAGEREF _Toc332615272 h 42Process

16、Block Flow Diagram WCB and Inoculumn Prep.Media PreperationAnion ExchangeCation ExchangeHarvestBuffer HoldingVirus InactivationCell CultureNFUF Affinity ChromatographyProductSterile FiltrationUF Buffer Preperation Cell Culture Process DescriptionMedia Preperation WeightCheck將倉庫稱量準(zhǔn)確的物料經(jīng)外包裝處理后通過物料通道進(jìn)入

17、培養(yǎng)基配制間重量確認(rèn)數(shù)據(jù)上傳，位置靠近CCS HMIAir filter FG1064無菌空氣過濾器 SIPOff-line integrity test:關(guān)閉V03，將housing從主管路上拆下來，用新濾芯替換舊的濾芯，按照SOP用合適的純化水潤濕后再進(jìn)行完整性測試。測試完成后再將其安裝到主管路上。SIP：從純蒸汽主管路進(jìn)行在位SIP,疏水閥，壓力表，冷空氣排放/1，冷凝水排放：XV 02一直疏水，XV13，XV24，XV37開一段時(shí)間疏水，根據(jù)溫度自動(dòng)決定是開ST/01。2，過濾器SIP：打開過濾器手動(dòng)閥V03，CCS提醒過濾器排氣閥V07開一段時(shí)間，打開XV25，經(jīng)過102到103圖冷

18、凝水排放點(diǎn)，XV18是自動(dòng)閥（此閥在SIP及取水時(shí)有反饋，安全互鎖），CCS有小量WFI取用PHASE。Operation管道低壓氣體保壓打開PA自動(dòng)閥門，進(jìn)行通氣，SIP完后，打開XV23，打開氣體吹干管道，關(guān)閉相關(guān)閥門。Cool WFI Prep.使用前沖洗WFI flushing，WFI進(jìn)到三個(gè)培養(yǎng)基配制罐的管路清洗是通過WFI沖洗到罐，然后直排。管道通入空氣保壓* note：所有WFI的使用點(diǎn)XV02涉及到的PHASE應(yīng)與WFI管路SIP的PHASE互鎖SIP熱交換器獨(dú)立滅菌PHSAE ：SIP時(shí)夾套冷卻水不排放。關(guān)冷卻水進(jìn)閥XV04，回水自動(dòng)控制閥控制disabled，但TCV01控

19、制閥開到100%，冷卻水回水閥XV10（手動(dòng)閥）持續(xù)開。確認(rèn)XV25關(guān)閉，然后通純蒸汽SIP，打開XV14，XV26，XV01，SIP直到103增加的冷凝水排放點(diǎn)。熱交換器回水應(yīng)保持一定反壓，防止夾套內(nèi)冷卻水蒸發(fā)過快干掉。熱交換器與其到對(duì)應(yīng)配制罐的管道一同SIP的PHASE:在2的基礎(chǔ)上，再打開XV05，XV06，XV17，蒸汽最后進(jìn)入細(xì)胞罐冷凝排放（101），102及103類似（SIP可選擇1200L，400L，50L這3個(gè)罐任意1個(gè)，2個(gè)，3個(gè)組合）。4，SIP完成后，通入空氣吹干WFI CoolingSIP結(jié)束后開始冷卻WFI前，Enable回水自動(dòng)控制閥TCV01控制，再開冷卻水進(jìn)閥（

20、自動(dòng)閥）XV04。打開XV02 接通WFI，進(jìn)行WFI出水溫度自動(dòng)控制，若溫度不合格，則通過103增加的冷凝水排放點(diǎn)直排。等WFI水溫合格后，再打開通道閥門XV05，XV06，XV17進(jìn)罐（101），102及103類似。Small volume Media Prep.WFI獲取WFI熱交換其除有3條硬管連接3個(gè)media配制罐外，還有一個(gè)用水點(diǎn)用于人工獲取冷WFI。單獨(dú)的取水PHASE,安全角度考慮，在此管道有蒸汽或水時(shí)尤其要注意。通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排。向桶中注入足量合適溫度的WFI。配制在20L配制桶內(nèi)稱取90%所需量WFI后，開啟攪拌，向桶內(nèi)慢慢

21、加入稱量好的meida粉劑，加各種營養(yǎng)成分，調(diào)pH，定容，攪拌完成后，取樣中控檢測。Ph,溫度及重量可實(shí)時(shí)上傳，中控檢測指標(biāo)及攪拌，等可手動(dòng)輸入上傳確認(rèn)。PH計(jì)位置可根據(jù)配制量5L20L進(jìn)行高度調(diào)整。有防止粉末飛揚(yáng)保護(hù)罩。將配液桶及攪拌槳等用純化水清洗，泡堿，WFI沖洗干凈準(zhǔn)備pH計(jì)，酸堿等通過稱重向另一配液桶中注入9095%的WFI開啟攪拌將稱好的培養(yǎng)基倒入桶中調(diào)節(jié)PH，記錄溫度。因?yàn)槭鞘謩?dòng)調(diào)節(jié)，所以注意pH調(diào)節(jié)泵開關(guān)與罐pH值顯示距離要近，可邊看邊調(diào)。取樣手動(dòng)清洗清洗在清洗間手工清洗，除熱原，WFI Rinse等50L Media Prep.Filters installation and

22、 integrity test呼吸器氣體濾芯FG1061Media初過濾芯（初過濾器旁邊預(yù)留電源插頭，方便移動(dòng)蠕動(dòng)泵使用）Tank RinseHot WFI Rinse（此時(shí)熱交換器溫控disble）若距離前一次CIP后放置時(shí)間不長，則需要Hot WFI Rinse，。打開XV01，XV02，XV03通過噴淋球進(jìn)罐，然后通過底閥XV04，XV05，XV13，XV16，V08直排。在啟動(dòng)前確認(rèn)排氣過濾器下的閥門XV10關(guān)閉與此程序連鎖。Media prep. Tank SIP為降低微生物負(fù)荷時(shí)選用SIP范圍為：一路從蒸汽主管道XV14（101圖），XV21（103圖）至疏水點(diǎn)XV20，V10.另

23、一路蒸汽從XV06，XV07，XV03進(jìn)罐（102圖），排氣分兩路，一路通過呼吸器到冷凝水點(diǎn)，（初始開XV26排冷空氣），另一路通過罐底閥XV04，XV05，XV13， XV16 ，V08至排污管道。WFI Filling罐頂呼吸器開啟，打開XV10，XV12進(jìn)vent管路排氣（間歇開冷凝水排點(diǎn)閥門排冷凝水）。通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排出水水溫穩(wěn)定后向罐內(nèi)注入所要求水量的9095%，打開WFI水點(diǎn)XV02（101）。XV 01，XV02，XV 03。稱重方式表示攪拌開啟（攪拌與罐內(nèi)最小量互鎖，報(bào)警）Solid Material Addition關(guān)閉罐頂呼吸

24、器，XV10關(guān)閉將稱量好的固體物料袋與投料口連接，通過投料口向罐內(nèi)投料（投料口V04開啟與呼吸器互鎖），關(guān)閉投料口等粉塵完全入水后，打開呼吸器，拆除物料袋Liquid Material Addition通過蠕動(dòng)泵PU1061向罐內(nèi)泵入所需要的液體或酸堿，手動(dòng)調(diào)節(jié)pH.能邊看pH值邊開關(guān)蠕動(dòng)泵，設(shè)備留蠕動(dòng)泵電源插座蠕動(dòng)泵速度可調(diào)，泵1，泵2，泵3，共3臺(tái)泵(分在3臺(tái)移動(dòng)式推車上)Mixing設(shè)定攪拌速度，攪拌時(shí)間，自動(dòng)攪拌，至物料完全溶解溫度，攪拌，重量記錄，上傳至CCSVolume Fixing通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排，見WFI Filling補(bǔ)充WFI

25、至終體積Sampling取樣檢測滲透壓及其它生化指標(biāo) Media Transfer to bagV05閥門后都是軟管連接，F(xiàn)L-1061為不銹鋼過濾器，帶完整性測試口，可單個(gè)或2個(gè)串聯(lián)設(shè)計(jì)開始將media過濾進(jìn)袋Media稱重CIP罐體清洗見1200L Media Prep.應(yīng)在排污管增加一排污口，供沖洗過濾管路殘留液使用。在拆下過濾器前，將過濾管道連接到排污口，用空氣將罐內(nèi)管道內(nèi)及濾器內(nèi)的殘留液壓干，然后再拆下V05及過濾器進(jìn)行手工清洗。400L Media Prep.Filters installation and integrity test呼吸器氣體濾芯FG1062Media初過濾芯（

26、初過濾器旁邊預(yù)留電源插頭，方便移動(dòng)蠕動(dòng)泵使用）Tank Rinse Hot WFI Rinse（此時(shí)熱交換器溫控disble）若距離前一次CIP后放置時(shí)間不長，則需要Hot WFI Rinse。打開XV01，XV02，XV03通過噴淋球進(jìn)罐，然后通過底閥XV04，XV05，XV13，XV16，V08直排。Quadro Ytron ZC管路與Tank 及Tank附屬管路一起交替RinseTransfer Line hot WFI Rinse （此時(shí)熱交換器溫控disble）傳輸管的WFI Rinse最好可以選擇既能與罐的Tank RinseP同時(shí)（組合輪流），又可以獨(dú)立。運(yùn)行之前，確定初過濾芯已

27、經(jīng)取出，確定細(xì)胞罐端media過濾芯已經(jīng)取出來，并且過濾器帽子已經(jīng)蓋好向CCS請求確認(rèn)細(xì)胞罐端的MFILT CIP 開啟，確認(rèn)后再確認(rèn)transfer panel 連接正確， 1，打開XV 01，XV02， XV09 ，XV26，然后經(jīng)過transfer panel到300L細(xì)胞罐/400LNT，清洗是once through 從細(xì)胞罐過濾器drain。通氣吹干：從氣體濾器FG1064的潔凈空氣，經(jīng)WFI熱交換器到進(jìn)罐及管路，注意控制罐的呼吸器的開關(guān)控制罐壓（見圖中黃色路徑mark標(biāo)注）。Media prep. Tank SIP為降低微生物負(fù)荷時(shí)選用SIP范圍為：一路從蒸汽主管道XV14（10

28、1圖），XV21（103圖）至疏水點(diǎn)XV20，V10.另一路蒸汽從XV06，XV07，XV03進(jìn)罐（102圖），排氣分兩路，一路通過呼吸器到冷凝水點(diǎn)，（初始開XV26排冷空氣），另一路通過罐底閥XV04，XV05，XV13， XV16 ，V08至排污管道。WFI Filling罐頂呼吸器開啟，打開XV10，XV12進(jìn)vent管路排氣（間歇開冷凝水排點(diǎn)閥門排冷凝水）。通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排出水水溫穩(wěn)定后向罐內(nèi)注入所要求水量的2030%（淹沒攪拌槳葉），打開WFI水點(diǎn)XV02（101），XV 01，XV02，XV 03。稱重方式表示攪拌開啟（攪拌與罐內(nèi)最小

29、量互鎖，報(bào)警）Solid Material Addition將稱量好的固體物料袋與Quadro Ytron ZC 裝置吸粉管道相連WFI出水冷卻到設(shè)定溫度用Quadro Ytron ZC步驟1、打開WFI水點(diǎn)XV02（101）。XV 01，XV02，XV 03,WFI注水入罐至淹沒攪拌槳（例0.2V,通過sprayball,2、將Quadro Ytron ZC裝置進(jìn)水管6及回流管5與配置罐對(duì)應(yīng)的5和6接口連接，開XV01， XV02， XV09， XV 28后，邊加粉邊加水，用WFI將粉經(jīng)均質(zhì)機(jī)沖入罐中（例0.20.5V）通過HM1061。3繼續(xù)注水將管道內(nèi)粉水充入罐中（例0.50.95V）通

30、過HM1061 4最后再定容（通過sprayball）400L配制罐與1200L配制罐共用一臺(tái)移動(dòng)式Quadro Ytron ZC裝置Liquid Material Addition通過蠕動(dòng)泵PU1062向罐內(nèi)泵入所需要的液體或酸堿，手動(dòng)調(diào)節(jié)pH.能邊看pH計(jì)值邊開關(guān)蠕動(dòng)泵，設(shè)備留蠕動(dòng)泵電源插座。蠕動(dòng)泵速度可調(diào)，泵1，泵2，泵3，共3臺(tái)泵(分在3臺(tái)移動(dòng)式推車上)Mixing設(shè)定攪拌速度，攪拌時(shí)間自動(dòng)攪拌，至物料完全溶解溫度，攪拌，重量記錄，上傳至CCSVolume Fixing通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排補(bǔ)充WFI至終體積 Sampling取樣檢測滲透壓及其

31、它生化指標(biāo)Media Transfer to Bioreactor/NT向CCS確認(rèn)Media終過濾芯安裝完成向CCS確認(rèn)Media終過濾芯Integrity test完成向CCS確認(rèn)Media終過濾芯SIP完成向CCS確認(rèn)選擇細(xì)胞罐300A，300B，400A,400B向CCS確認(rèn)transfer panel已正確連接對(duì)應(yīng)的細(xì)胞罐/NT media fill Phase已執(zhí)行通入潔凈空氣，控制本配制罐罐壓，罐壓可設(shè)置。開啟XV15， XV13向罐里通氣，通過XV14控制罐壓。執(zhí)行Media Transfer PHASE,將media壓入細(xì)胞罐中， transfer的培養(yǎng)基重量要求可設(shè)置降壓M

32、edia Transfer to bag本步驟為選用，有可能配制100l-200L緩沖液在transfer panel 上再增加一路可以接袋子的之路，并且相應(yīng)的應(yīng)在排污管增加一排污口，供沖洗過濾管路殘留液使用。在拆下過濾器前，將過濾管道連接到排污口，用空氣將罐內(nèi)管道內(nèi)及濾器內(nèi)的殘留液壓干，然后再拆下過濾器進(jìn)行手工清洗。確認(rèn)見1.6.11Post-transfer Operation關(guān)閉細(xì)胞罐進(jìn)料閥，通過CCS確認(rèn)。然后在以1.6.11相同的路徑Drain excess media; Depress在初過濾housing上手動(dòng)連接純化水袋，用PW沖洗transferline，然后drainrem

33、ove cartridges and place blinds at filter housings; 0.2 micron filter integrity test（off-line）配制罐CIP見1200L Media Prep.1200L Media Prep.Filters installation and integrity test呼吸器氣體濾芯FG1063Media初過濾芯（初過濾器旁邊預(yù)留電源插頭，方便移動(dòng)蠕動(dòng)泵使用）Tank Rinse Hot WFI Rinse（此時(shí)熱交換器溫控disble）若距離前一次CIP后放置時(shí)間不長，則需要Hot WFI Rinse。打開XV02

34、， XV05， XV06，XV17通過噴淋球進(jìn)罐，然后通過底閥XV47，XV49，XV30， XV31,XV34進(jìn)入排污管路。Quadro Ytron ZC管路與Tank 及Tank附屬管路一起交替RinseTransfer Line hot WFI Rinse （此時(shí)熱交換器溫控disble）傳輸管的WFI Rinse最好可以選擇既能與罐的Tank RinseP同時(shí)（組合輪流），又可以獨(dú)立。運(yùn)行之前，向CCS確定初過濾芯已經(jīng)取出，細(xì)胞罐那邊的終端過濾芯已經(jīng)取出來，并且過濾器帽子已經(jīng)蓋好向CCS請求確認(rèn)細(xì)胞罐端的MFILT CIP 開啟，確認(rèn)后再確認(rèn)XV43或者XV44開啟正確，確認(rèn)后開XV0

35、2，XV05，XV06，XV16經(jīng)過軟管到Quadro Ytron ZC進(jìn)口，出口連接到XV28，XV29清洗是once through 從細(xì)胞罐過濾器drain通氣吹干：從氣體濾器FG1064的潔凈空氣，經(jīng)WFI熱交換器到進(jìn)罐及管路，注意控制罐的呼吸器的開關(guān)控制罐壓（見圖中黃色路徑mark標(biāo)注）。Media prep. Tank SIP為降低微生物負(fù)荷時(shí)選用SIP范圍為：一路從蒸汽主管道XV14（101圖），XV21（103圖）至疏水點(diǎn)XV20，V10.另一路蒸汽從XV27，XV07，XV17進(jìn)罐（101圖），排氣分兩路，一路通過呼吸器到冷凝水點(diǎn)，（初始開XV48排冷空氣），另一路通過罐底閥

36、XV47，XV49，XV30， XV31 ，XV 34，V08至排污管道。WFI Filling罐頂呼吸器開啟，打開XV20，XV22進(jìn)vent管路排氣（間歇開冷凝水排點(diǎn)閥門排冷凝水）。通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排出水水溫穩(wěn)定后向罐內(nèi)注入所要求水量的2030%（淹沒攪拌槳葉），打開WFI水點(diǎn)XV02（101），XV 05，XV06，XV17。稱重方式表示攪拌開啟（攪拌與罐內(nèi)最小量互鎖）Solid Material Addition將稱量好的固體物料袋與Quadro Ytron ZC 裝置吸粉管道相連。WFI出水冷卻到設(shè)定溫度用Quadro Ytron ZC步

37、驟1、打開WFI水點(diǎn)XV02（101）。XV 05，XV06，XV17,WFI注水入罐至淹沒攪拌槳（例0.2V,通過sprayball,2、將Quadro Ytron ZC裝置進(jìn)水管9及回流管10與配置罐對(duì)應(yīng)的9和10接口連接，打開XV02， XV05， XV06， XV16，XV50后，開動(dòng)Quadro Ytron ZC 裝置邊加粉邊加水，用WFI將粉經(jīng)均質(zhì)機(jī)沖入罐中（例0.20.5V）通過HM1061。3繼續(xù)注水將管道內(nèi)粉水充入罐中（例0.50.95V）通過HM1061， 4最后再定容（通過sprayball）與400L配制罐共用一臺(tái)移動(dòng)式Quadro Ytron ZC裝置Liquid M

38、aterial Addition通過蠕動(dòng)泵PU1063向罐內(nèi)泵入所需要的液體或酸堿，手動(dòng)調(diào)節(jié)pH. 能邊看ph計(jì)值邊開關(guān)蠕動(dòng)泵，設(shè)備留蠕動(dòng)泵電源插座。蠕動(dòng)泵速度可調(diào)，泵1，泵2，泵3，共3臺(tái)泵(分在3臺(tái)移動(dòng)式推車上)Mixing設(shè)定攪拌速度，攪拌時(shí)間自動(dòng)攪拌，至物料完全溶解溫度，攪拌，重量記錄，上傳至CCSVolume Fixing通過熱交換器控制WFI出水溫度，初始出水水溫不穩(wěn)定的WFI，直排補(bǔ)充WFI至終體積 Sampling取樣檢測滲透壓及其它生化指標(biāo) Media Transfer to Bioreactor向CCS確認(rèn)Media終過濾芯安裝完成向CCS確認(rèn)Media終過濾芯Integr

39、ity test完成向CCS確認(rèn)Media終過濾芯SIP完成向CCS確認(rèn)選擇的是細(xì)胞罐1500A，1500B（XV43和XV44有開關(guān)反饋確認(rèn)信號(hào)）對(duì)應(yīng)的細(xì)胞罐media fill Phase已執(zhí)行通入潔凈空氣，控制本配制罐罐壓，罐壓可設(shè)置。開啟XV21， XV20向罐里通氣，通過XV22控制罐壓。執(zhí)行Media Transfer PHASE,將media壓入細(xì)胞罐中，transfer的培養(yǎng)基重量要求可設(shè)置降壓Post-transfer Operation關(guān)閉細(xì)胞罐進(jìn)料閥，通過CCS確認(rèn)。然后在以1.7.11相同的路徑Drain excess media; Depress在初過濾housing

40、上手動(dòng)連接純化水袋，用PW沖洗transferline，然后drainremove cartridges and place blinds at filter housings; 0.2 micron filter integrity test off-lineCIPMedia prep. Tank CIP：（請參照路線圖1.7.2，但是從CIPS來）配制后進(jìn)行CIP，所有配制罐底部都有vortex breaker，防止旋窩時(shí)氣體進(jìn)入下游工藝管道。CIP程序：1、CIP系統(tǒng)通過罐頂噴淋球清洗，回CIPR，排干；2、清洗液通過CIP清洗，循環(huán)3、純化水循環(huán)，排干4、酸液循環(huán)，排干5、純化水循環(huán)，

41、排干6、堿液循環(huán)，排干7、WFI潤洗，回CIPR，排干8、air blowTransfer Line CIP：（請參照路線圖1.7.3，但是從CIPS來）運(yùn)行之前，確定初過濾芯已經(jīng)取出，細(xì)胞罐那邊的終端過濾芯已經(jīng)取出來，并且過濾器帽子已經(jīng)蓋好。向CCS請求確認(rèn)細(xì)胞罐端的MFILT CIP 開啟，確認(rèn)后再確認(rèn)XV43或者XV44開啟正確，確認(rèn)后開XV02，XV05，XV06，XV16經(jīng)過軟管到Quadro Ytron ZC進(jìn)口，出口連接到XV28，XV29清洗是once through，以細(xì)胞罐端過濾器為高點(diǎn)兩邊drain Tank Air Blow:罐體是由從呼吸器進(jìn)的單獨(dú)一路熱air吹到底部

42、后，進(jìn)排氣管路出。而管道的吹干是有CIP系統(tǒng)的空氣吹干。Cell Culture 本區(qū)域所有設(shè)備的狀態(tài)信息，報(bào)警信息，重要參數(shù)信息等需要上傳到CCS系統(tǒng)Seed recovery復(fù)蘇：從WCB保藏間取細(xì)胞株，用轉(zhuǎn)移桶經(jīng)物流進(jìn)接種室，在接種室生物安全柜里進(jìn)行操作，離心，加培養(yǎng)基，生物安全柜準(zhǔn)備，培養(yǎng)：在CO2培養(yǎng)箱里種子復(fù)蘇培養(yǎng)結(jié)束Seed Propagation接種：從T25瓶接種至T75瓶，加培養(yǎng)基培養(yǎng):在接種室進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)，T75,搖瓶取樣：轉(zhuǎn)移：在生物安全柜里轉(zhuǎn)移至無菌袋。結(jié)束10L wave Bioreactor準(zhǔn)備：電極校正，補(bǔ)料配制，安裝等Media Transfer in：進(jìn)

43、培養(yǎng)基，初始設(shè)定接種:將擴(kuò)增好的種子細(xì)胞接入10L wave bioreactor。Biowelder培養(yǎng)：取樣：移種：將種子接種至下一級(jí)細(xì)胞罐結(jié)束60L Bioreactor準(zhǔn)備：準(zhǔn)備：電極校正，補(bǔ)料配制滅菌以及過濾器完整性檢測等SIP：罐體及相應(yīng)管道在位SIPMedia Transfer in：進(jìn)培養(yǎng)基，初始設(shè)定接種:將擴(kuò)增好的種子細(xì)胞接入10L wave bioreactor。Biowelder培養(yǎng)：取樣：移種：將種子接種至下一級(jí)細(xì)胞罐CIP：利用sartorius配置的CIP系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞罐在位清洗，加熱潔凈空氣將罐體吹干結(jié)束300L Bioreactor準(zhǔn)備：電極校正，補(bǔ)料配制滅菌，安

44、裝以及過濾器完整性檢測等SIP：罐體及相應(yīng)管道在位SIPMedia Transfer in：進(jìn)培養(yǎng)基，初始設(shè)定接種:將擴(kuò)增好的種子細(xì)胞接入10L wave bioreactor。Biowelder培養(yǎng)：取樣：移種：將種子接種至下一級(jí)細(xì)胞罐CIP：利用sartorius配置的CIP系統(tǒng)進(jìn)行細(xì)胞罐在位清洗，加熱潔凈空氣將罐體吹干結(jié)束1500L Bioreactor準(zhǔn)備：電極校正，補(bǔ)料配制滅菌，安裝以及過濾器完整性檢測等SIP：罐體及相應(yīng)管道在位SIPMedia Transfer in：進(jìn)培養(yǎng)基，初始設(shè)定Nutrient Transfer in：進(jìn)補(bǔ)料營養(yǎng)液，初始設(shè)定接種:將擴(kuò)增好的種子細(xì)胞接入10

45、L wave bioreactor。Biowelder培養(yǎng)：取樣：收獲：通過罐壓將細(xì)胞培養(yǎng)液離心至收獲罐中。CIP：利用sartorius配置的CIP系統(tǒng)進(jìn)行1500L細(xì)胞罐及400L Nutrient Tank的清洗；潔凈空氣吹干所有管路，管路選擇，時(shí)間；加熱潔凈空氣將罐體吹干結(jié)束組件清洗補(bǔ)料瓶，桶，電極，軟管、microsparger，過濾器housing等組件運(yùn)至清洗間手工清洗。超聲波清洗機(jī)組件滅菌在滅菌間滅菌柜滅菌Harverst Centrifuge準(zhǔn)備：離心機(jī)操作水有壓力控制并alarm上傳至CCS.用純化水補(bǔ)水，并用儲(chǔ)罐自動(dòng)補(bǔ)水，開離心機(jī)前要保證壓力正常，操作水可以自循環(huán)。開啟離

46、心機(jī)至穩(wěn)定確認(rèn)：與細(xì)胞罐正確連接，安裝離心后過濾器，離心機(jī)穩(wěn)定Operation：數(shù)據(jù)上傳Filter安裝：將新過濾芯安裝到housing中，V05接至離心機(jī)純化水儲(chǔ)罐上的PW取樣閥，啟動(dòng)PHASE（開啟XV25閥門）沖洗至設(shè)定時(shí)間后，排干。清洗：清洗前從主管路上拆除過濾殼，換上蓋帽安裝。過濾管路與離心機(jī)一起清洗，過濾殼手動(dòng)清洗，離心機(jī)及收獲管路清潔準(zhǔn)備：按照2.1及2.2準(zhǔn)備好收獲管路及離心機(jī)通過CIP系統(tǒng)用0.5M 熱堿液對(duì)收獲管路及離心機(jī)進(jìn)行循環(huán)30min通過CIP系統(tǒng)用室溫WFI對(duì)收獲管路及離心機(jī)進(jìn)行沖洗，直至回流pH值為進(jìn)口WFI的pH值，排干。停離心機(jī)通過CIP系統(tǒng)用空氣對(duì)收獲管路

47、及離心機(jī)進(jìn)行吹干。收獲罐SIP蒸汽進(jìn)口經(jīng)疏水V01，V09冷凝排點(diǎn)后，分2路進(jìn)罐，第一路開XV17,XV02，蒸汽從罐頂部噴淋球進(jìn)罐；第二路開XV18，XV21，XV19。分兩路出。第一路為到罐底冷凝排點(diǎn)，第二路經(jīng)呼吸器到冷凝排點(diǎn)XV43（XV26排冷凝氣體）。SIP完后，管路通過熱空氣進(jìn)行air blow：開XV09,XV08,熱空氣從呼吸器進(jìn)入罐體，XV14，XV44，XV06，XV33，從罐底部冷凝排點(diǎn)XV35排出，設(shè)置熱空氣吹掃時(shí)間，將罐內(nèi)吹干后保壓。收獲準(zhǔn)備：準(zhǔn)備好離心機(jī)、過濾器、收獲罐，選擇1500A or 1500B收獲，細(xì)胞罐加壓將細(xì)胞液離心進(jìn)收獲罐細(xì)胞罐泄壓向細(xì)胞罐加入100

48、L緩沖液后，重復(fù)2.5.2及2.5.3管路排干收獲罐CIP用CIP系統(tǒng)將收獲罐進(jìn)行在位CIP,CIP supply從罐頂噴淋球進(jìn)，從底部排出到CIP return回。完成后，管道用CIP自帶的空氣吹干。罐體吹干是利用從呼吸器進(jìn)入空氣，罐底疏水排放的路徑完成。離心機(jī)及收獲管道CIP（此即為離心機(jī)的CIP）參照2.3收獲罐冷卻通過向1600Lharvest tank夾套通入乙二醇來給罐內(nèi)溶液降溫，溫度，攪拌，重量等參數(shù)要上傳至CCS.Purification Process DescriptionUF冷注射用水準(zhǔn)備將buffer prep tank（VE1211）上pH計(jì)進(jìn)行校準(zhǔn)，校準(zhǔn)完了，將pH

49、計(jì)重新安裝到配液罐上。確認(rèn)罐內(nèi)無液體后進(jìn)行重量調(diào)零。安裝AIR Filter FG（1215），然后進(jìn)行完整性測試,請CCS確認(rèn)。AIR Filter FG（1215）SIP，SIP完了以后通入壓縮空氣，保持管路內(nèi)正壓。安裝0.45m的緩沖液過濾器（FL1211）熱注射用水沖洗（房間內(nèi)注射用水總閥是公用系統(tǒng)部分，控制屬于工藝），或進(jìn)行SIP（1）熱注射用水沖洗熱交換器管路（2）熱注射用水沖洗buffer prep tank(VE1211)（3）熱注射用水沖洗buffer transfer line安裝0.22m緩沖液過濾器（FL1212），安裝完畢以后進(jìn)行完整性測試。CCS請確認(rèn)TP1215是

50、否切換正確，buffer transfer line開始SIP：從兩個(gè)過濾器之間進(jìn)入蒸汽，從buffer hold tank（VE1214）旁路疏水管路排放。buffer hold tank（VE1214）SIPWFI溫度調(diào)節(jié) 往buffer prep tank（VE1211）加入冷注射用水 buffer prep tank加壓 緩沖液從buffer prep tank（VE1211）輸送到buffer hold tank（VE1214） 泄壓 熱注射用水沖洗buffer prep tank 熱注射用水沖洗buffer transfer line從buffer hold tank（VE1214

51、）旁路排污管路排放。置換液(buffer1)準(zhǔn)備CCS確認(rèn)TP1214切換是否正確。buffer transfer line開始SIP：從兩個(gè)過濾器之間進(jìn)入蒸汽，從buffer hold tank（VE1213）旁路疏水管路排放。 buffer hold tank（VE1213）SIP 往buffer prep tank（VE1211）加入80%需要配置緩沖液體積的冷注射用水 稱取物料 往配液罐內(nèi)加料 定容 調(diào)節(jié)pH 加壓 物料轉(zhuǎn)移 泄壓 熱注射用水沖洗buffer prep tank（VE1211） 熱注射用水沖洗buffer transfer line從buffer hold tank（V

52、E1213）旁路排污管路排放。UF系統(tǒng)使用前消毒product transfer line SIP（從收獲罐到超濾罐管路SIP）buffer transfer line SIP（從buffer hold tank（VE1214）到UF TANK（VE1121）管路SIPbuffer transfer line SIP（從buffer hold tank（VE1213）到UF TANK（VE1121）管路SIP將0.5N NaOH手動(dòng)加入到UF TANK(VE1121)中堿液加完以后啟動(dòng)超濾系統(tǒng)，用0.5N NaOH將超濾系統(tǒng)中的保存液（0.1N NaOH）全部頂出。沖頂完畢后，將超濾系統(tǒng)的回流

53、和透過端全部連接到UF TANK(VE1121)中，進(jìn)行循環(huán)30分鐘。將罐內(nèi)和超濾系統(tǒng)中的堿液全部排放完。（罐重量為0時(shí)結(jié)束）UF TANK（VE1121）CIPbuffer hold tank （VE1214）加壓 開啟buffer transfer line（從buffer hold tank（VE1214）到UF TANK（VE1121）,往UF TANK（VE1121）中加注射用水。（罐內(nèi)重量超過300L停止加水，少于150繼續(xù)加入） 罐內(nèi)體積超過100L時(shí)，開啟超濾系統(tǒng)用注射用水清洗，直到排放管路上的電導(dǎo)率儀顯示電導(dǎo)符合要求結(jié)束清洗。結(jié)束后關(guān)閉buffer transfer line

54、以及將罐內(nèi)的注射用水全部排放完。 UFTANK（VE1121）SIPUF 開始操作buffer hold tank （VE1213）加壓開啟buffer transfer line（從buffer hold tank（VE1213）到UF TANK（VE1121），往UF TANK（VE1121）中加入置換液用罐內(nèi)置換液將超濾系統(tǒng)中的注射用水頂出。harvest tank（VE1111）加壓產(chǎn)品濃縮：開啟product transfer line （從harvest tank 到UF TANK），UF TANK（VE1121）開始接受產(chǎn)品。設(shè)定超濾入口壓力為1.0bar接受范圍（0.8bar-

55、1.2bar），回流壓力為0.4bar接受范圍（0.3-0.5bar）當(dāng)超濾罐液體超過30L罐攪拌開啟，液體超過100L,開啟超濾系統(tǒng)將產(chǎn)品進(jìn)行濃縮。超濾罐內(nèi)液體超過300L，關(guān)閉product transfer line。液體少于150L，重新開啟product transfer line。重復(fù)開關(guān)product transfer line，將harvest tank中的產(chǎn)品全部轉(zhuǎn)移到UF TANK中。 harvest tank產(chǎn)品全部轉(zhuǎn)移完畢（罐內(nèi)重量為0時(shí)轉(zhuǎn)移完畢），harvest tank CIP 緩沖液置換： 開啟buffer transfer line（從VE1213到UF TAN

56、K）保持超濾罐內(nèi)體積在160-180L之間VE1213中置換液剩余約60L 終濃縮將產(chǎn)品濃縮到100L 產(chǎn)品回收將回流閥門全開約用60L置換緩沖液將超濾系統(tǒng)中的產(chǎn)品全部回收到超濾罐內(nèi)（緩沖液儲(chǔ)罐中的置換液全部頂完，產(chǎn)品回收結(jié)束） buffer hold tank（VE1213）CIP。 product transfer line CIP（從harvest tank 到超濾罐管路CIP） buffer transfer line CIP(從VE1213到UF TANK)，此處CIP即為熱注射用水沖洗。 取樣：產(chǎn)品回收到超濾罐內(nèi)以后，攪拌5分鐘取樣進(jìn)行檢測。親和層析層析緩沖液(buffer2)準(zhǔn)備

57、 buffer transfer line開始SIP（從VE1211到VE1212管路）： buffer hold tank（VE1212）SIP 往buffer prep tank（VE1211）加入80%需要緩沖液體積的冷注射用水 稱取物料 投料 定容 調(diào)節(jié)pH 加壓 物料轉(zhuǎn)移(從VE1211到VE1212)（buffer prep tank（VE1211）罐重量為0時(shí)，轉(zhuǎn)移結(jié)束） 泄壓 熱注射用水沖洗buffer prep tank（VE1211） 熱注射用水沖洗buffer transfer line從buffer hold tank（VE1213）旁路排污管路排放。層析緩沖液（buf

58、fer 3）準(zhǔn)備 將buffer prep tank（VE1221）上pH計(jì)儀進(jìn)行校準(zhǔn) 校準(zhǔn)完了，將pH計(jì)重新安裝到配液罐上。確認(rèn)罐內(nèi)無液體后進(jìn)行重量調(diào)零。 安裝0.45m緩沖液過濾器（FL1221）。 熱注射用水沖洗（1）熱注射用水沖洗buffer prep tank(VE1221)（2）熱注射用水沖洗buffer transfer line（從VE1221到VE1222） 安裝0.22m緩沖液過濾器（FL1222），安裝完畢以后進(jìn)行完整性測試。 buffer transfer line開始SIP：從兩個(gè)過濾器之間進(jìn)入蒸汽，從buffer hold tank（VE1222）旁路疏水管路排放。

59、 buffer hold tank（VE1222）SIP 往buffer prep tank（VE1221）加入緩沖液配置體積的80%冷注射用水 稱取物料 投料 定容 緩沖液pH調(diào)節(jié) buffer prep tank加壓 物料輸送：緩沖液從buffer prep tank（VE1221）輸送到buffer hold tank（VE1222）,( buffer prep tank（VE1221）罐重量為0時(shí)，轉(zhuǎn)移結(jié)束) 泄壓 熱注射用水沖洗buffer prep tank（VE1221） 熱注射用水沖洗buffer transfer line（從VE1221到VE1222，從VE1222旁路排放

60、）層析緩沖液（buffer 4）準(zhǔn)備 buffer transfer line開始SIP： 從兩個(gè)過濾器之間進(jìn)入蒸汽，從buffer hold tank（VE1223）旁路疏水管路排放。 buffer hold tank（VE1223）SIP 往buffer prep tank（VE1221）加入緩沖液配置體積的80%冷注射用水 稱取物料 投料 定容 緩沖液pH調(diào)節(jié) buffer prep tank加壓 物料輸送：緩沖液從buffer prep tank（VE1221）輸送到buffer hold tank（VE1223）,( buffer prep tank（VE1221）罐重量為0時(shí)，轉(zhuǎn)移