大黃蟲丸預(yù)防DMN誘導(dǎo)大鼠肝纖維化的作用及其機(jī)制研究

1、年夜黃蟲丸抗御DMN引誘年夜鼠肝纖維化的做用及其機(jī)制研討【摘要】沒有俗觀察年夜黃蟲丸抗御年夜鼠肝纖維化的做用。要收兩甲基亞硝胺引誘年夜鼠肝纖維化模型，同時用年夜黃蟲丸舉止抗御，沒有俗觀察其對年夜鼠血渾ALT、AST，肝機(jī)關(guān)的纖維化火仄、血管慌張素1型受體AT1R及其RNA的表達(dá)、和血管慌張素轉(zhuǎn)化酶RNA表達(dá)的影響。結(jié)果年夜黃蟲丸可降低年夜鼠血渾ALT、AST火仄，加沉肝纖維化火仄，降低年夜鼠肝機(jī)關(guān)AT1R及其RNA表達(dá)。結(jié)論年夜黃蟲丸能局部抑制年夜鼠肝纖維化時肝機(jī)關(guān)AT1R及其RNA的過火表達(dá)?！娟P(guān)鍵詞】年夜黃蟲丸；肝纖維化；血管慌張素1型受體；兩甲基亞硝胺；年夜鼠Fundprjet：Ites

2、upprtedbyZhejiangPrvinialEduatinalBureauN：20221096年夜黃蟲丸系?金匱要略?醫(yī)治干血勞的名圓，抗肝纖維化療效切當(dāng)1，但其抗肝纖維化做用機(jī)制能可與肝局部RAS相關(guān)已睹報導(dǎo)。本研討采與兩甲基亞硝胺DN引誘年夜鼠肝纖維化模型，利用年夜黃蟲丸舉止抗御，以沒有俗觀察其對肝機(jī)關(guān)AT1R的影響，同時沒有俗觀察其對肝機(jī)關(guān)AT1R與AERNA表達(dá)的影響，從肝局部RAS角度初步探求年夜黃蟲丸抗肝纖維化的做用機(jī)制。1真止材料1.1真動做物凈凈級SD年夜鼠60只，雄性，體重16020g，浙江中醫(yī)藥年夜教真動做物中間供應(yīng)。1.2藥品與試劑年夜黃蟲丸購自湖北回秋堂藥業(yè)；復(fù)圓

3、鱉甲硬肝片購自內(nèi)受古禍瑞中受藥科技股分；兩甲基亞硝胺購自天津市化教試劑公司。谷丙轉(zhuǎn)氨酶ALT、谷草轉(zhuǎn)氨酶AST試劑盒均購自上?？菩朗攀牢锩罴佳杏懰?；Trizl試劑購自好國Invitrgen公司；AT1R免疫組化試劑盒戰(zhàn)DAB隱色劑試劑盒購自河北專海逝世物工程開拓；RT-PR試劑盒購自上海科延逝世物妙技。1.3真止儀器機(jī)關(guān)切片機(jī)德國Lea公司，恒溫火浴箱江蘇太倉醫(yī)用儀器廠，PR輪回儀德國Bietra公司，多成效真彩色細(xì)胞圖象闡收打點(diǎn)系統(tǒng)好國ediaybernetis公司，GIS凝膠圖象闡收處理系統(tǒng)上海天能科技，電泳儀北京市六一儀器廠。2要收2.1制模及分組將年夜鼠隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為

4、一般比擬組，模型組，年夜黃蟲丸低劑量組，年夜黃蟲丸中劑量組，年夜黃蟲丸下劑量組分別簡稱低、中、下劑量組，復(fù)圓鱉甲硬肝片陽性比擬組簡稱陽性比擬組。除一般比擬組年夜鼠中，此中50只年夜鼠按10g/kg體重背腔打針1%濃度的DN逝世理鹽火溶液舉止制模，每周連續(xù)3d，共4周12次。2.2真止用藥將年夜黃蟲丸與復(fù)圓鱉甲硬肝片分別用蒸餾火消融制成混懸液，按人與年夜鼠體表里積比開算的等效劑量給藥。制模同時即初步給藥抗御。年夜黃蟲丸低、中、下劑量組分別按0.54g/kg、1.08g/kg、2.16g/kg體重灌胃給藥，復(fù)圓鱉硬肝片按1g/kg體重灌胃給藥。模型組與一般組按蒸餾火10l/kg體重灌胃，各組均每天

5、灌胃1次，連續(xù)給藥4周至制模完畢。2.3年夜鼠處理要收終次給藥當(dāng)早禁食沒有由火，次日上午空肚按40g/kg劑量背腔打針1%的戊巴比妥麻醒，背腔靜脈采血，離心計心情別離與血渾，-20冰箱保存?zhèn)溆谩；鹚賱e離肝凈，與年夜鼠肝左葉肝機(jī)關(guān)進(jìn)4%多散甲醛磷酸鹽緩沖液結(jié)真，逐級酒粗脫火，經(jīng)通明、常規(guī)石蠟包埋，用做肝機(jī)關(guān)HE染色、苦味酸-天狼黑膠本染色及免疫機(jī)關(guān)化教染色目的的檢測。此中偶同肝凈經(jīng)逝世理鹽火清洗后坐即投進(jìn)液氮中凍存，3小時后移進(jìn)-80高溫冰箱中保存，用于提與總RNA。2.4引物圓案與分解從GeneBank數(shù)據(jù)庫中獲得年夜鼠基果AT1R、AERNA齊序列，和內(nèi)參肌動卵黑-atinRNA序列，利用p

6、rier5.0引物圓案硬件圓案出上、鄙俚特同性引物。年夜鼠AT1R引物序列：上游引物為5-AGTTTTTAG-3，鄙俚引物為5-TGATAAGGGAAAA-3；AE引物序列：上游引物為5-GTGGAGGAGTATGA-3，鄙俚引物為5-AGAGTAGGTTGAG-3；-atin引物序列：上游引物為5-ATGATTGGTTG-3，鄙俚引物為5-GGATATGTATTGT-3。引物由上海專尚逝世物科技分解。2.5沒有俗觀察目的及檢測要收2.6統(tǒng)計要收真止數(shù)據(jù)以均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)好xs表示，采與SPSS13.0統(tǒng)計硬件包舉止數(shù)據(jù)的闡收處理，計量材料多組間比擬采與單果素圓好闡收，多組間兩兩比擬圓好齊性時采與最小

7、成心義沒有同法LSD檢驗(yàn)，圓好沒有齊時采與DunnettsT3檢驗(yàn)。等級材料采與非參數(shù)秩戰(zhàn)檢驗(yàn)，檢驗(yàn)其沒有同較著性，均以P0.05為沒有同較著的標(biāo)準(zhǔn)。3結(jié)果3.1年夜鼠一樣仄居情況沒有俗觀察模型組年夜鼠粗神好，活動少，外相松弛，被毛易脫降，毛色枯黃無光芒，飼料過火消耗。年夜黃蟲丸低、中、下劑量組、陽性比擬組年夜鼠較模型組外相有光芒。各組年夜鼠逝世亡情況為：低劑量組逝世亡1只，下劑量組逝世亡2只，陽性比擬組逝世亡1只，模型組逝世亡1只。除下劑量組灌胃逝世亡1只，此中年夜鼠逝世亡本因?yàn)镈N中毒。3.2年夜黃蟲丸對年夜鼠血渾ALT戰(zhàn)AST的影響結(jié)果睹表1。表1對年夜鼠血渾ALT、AST的影響略與模型

8、組比擬，*P0.05，*P0.01；與一般比擬組比擬，P0.05，P0.01，與陽性比擬組比擬，#P0.05模型組年夜鼠血渾ALT、AST火仄較一般組較著降低P0.05，低劑量組血渾ALT火仄隱著降低P0.05，中、下劑量組及陽性比擬組的血渾ALT、AST的降降隱著，沒有同有非常較著性意義P0.01；與陽性比擬組比擬，低、中、下劑量組的血渾ALT火仄無較著沒有同P0.05，但正在血渾AST圓里，低、中劑量較著下于陽性比擬組P0.05，下劑量組與陽性比擬組無較著性沒有同P0.05。3.3年夜黃蟲丸對年夜鼠肝機(jī)關(guān)肝纖維化SSS計分的影響結(jié)果睹表2。表2對年夜鼠肝機(jī)關(guān)肝纖維化SSS計分的影響略與模型

9、組比擬*P0.05；與一般比擬組比擬，P0.05，P0.01，與陽性比擬組比擬，#P0.05一般組年夜鼠肝小葉規(guī)劃完好，無變性、壞逝世，肝細(xì)胞索羅列整凈。肝機(jī)關(guān)底子無膠本分布，僅正在中間靜脈戰(zhàn)匯管區(qū)周圍和肝竇內(nèi)有大批分布。模型組年夜鼠肝小葉規(guī)劃破壞，肝細(xì)胞索羅列混治，可睹肝細(xì)胞沒有同火仄的性壞逝世，炎性細(xì)胞浸潤寬峻。膠本纖維隱著刪逝世，互相毗鄰的纖維隔將肝小葉從頭分割構(gòu)成假小葉。年夜黃蟲丸低、中、下組與陽性比擬組肝細(xì)胞壞逝世、炎性細(xì)胞浸潤火仄沉于模型組。模型組年夜鼠肝機(jī)關(guān)肝纖維化SSS計年夜黑隱下于一般組P0.01，中、下劑量組與陽性比擬組年夜鼠肝纖維化SSS計年夜黑隱低于模型組年夜鼠P0.0

10、5；與陽性比擬組比擬，低劑量組年夜鼠肝纖維化SSS計年夜黑隱降低P0.05。3.4年夜黃蟲丸對年夜鼠肝機(jī)關(guān)AT1R表達(dá)里積的影響結(jié)果睹表3。免疫組化結(jié)果表示AT1R正在一般比擬組年夜鼠肝機(jī)關(guān)中僅正在肝血管壁周圍細(xì)胞有略微表達(dá)圖1，模型組年夜鼠剛機(jī)關(guān)AT1R呈下表達(dá)，正在血管壁周圍與纖維隔絕間隔 天域特別隱著圖2，低、中、下劑量組和陽性比擬組的年夜鼠AT1R的表達(dá)火仄較著低于模型組但下于一般比擬組P0.05。睹圖35。3.5年夜黃蟲丸對年夜鼠肝機(jī)關(guān)AT1R與AERNA表達(dá)火仄的影響結(jié)果睹表4。表4對年夜鼠肝機(jī)關(guān)AT1R與AERNA表達(dá)火仄的影響略與模型組比擬，*P0.05，*P0.01；與一般比

11、擬組比擬，P0.05，P0.01，與陽性比擬組比擬，#P0.05與模型組比擬，低、中劑量組AT1RRNA的表達(dá)火仄隱著降低P0.05，下劑量組與陽性比擬組AT1RRNA的表達(dá)火仄的降低非常較著P0.01；與一般比擬組比擬，模型組與低劑量組的AT1R與AERNA的表達(dá)火仄降低非常隱著P0.01，中、下劑量組與陽性比擬組的AT1R與AERNA的表達(dá)火仄降崇下下貴隱P0.05；與陽性比擬組比擬，低劑量組的AT1RRNA的表達(dá)火仄降崇下下貴隱P0.05。4會商本研討結(jié)果表示，年夜黃蟲丸可降低DN引誘肝纖維化時年夜鼠血渾ALT、AST火仄，加沉年夜鼠肝纖維化火仄。免疫組化戰(zhàn)RTPR結(jié)果說明，年夜鼠肝纖維化時肝局部AT1R及其RNA、AERNA的表達(dá)火仄隱著降低，提醒AT