DB11-T1806-2020實驗動物寄生蟲檢測

1、ICS 65.020.30CCS B 44DB11北京市地方標準DB11/ T 18062020DB11/T1460.32017，DB 11/T 1460.42018，DB 11/T1460.52018實驗動物 寄Th蟲檢測Laboratory animalParasitological testing2020-12-24發(fā)布2021-04-01實施北京市市場監(jiān)督管理局發(fā)布DB11/T 18062020目次前言II1范引文件1語定義1級2測2測7測8測11果12論報告12附錄A（范）實雞的織蟲13附錄B（范）實鵝的滴檢測14附錄C（范）實鴿的原檢測15附錄D（范）實魚的生檢測16參考17IDB

2、11/T 18062020前言本文件按照GB/T 1.12020標準化工作導則 第1部分:標準化文件的結構和起草規(guī)則的規(guī)定起草。DB11/T2DB11/T1053.22DB11/T1460.12017級及監(jiān)測 第DB11/T2DB11/T3DB1460.42018DB 11/T 1460.520185見6.2.5、6.2.6、6.2.7、6.2.8）。本文件由北京市科學技術委員會提出并歸口。本文件由北京市科學技術委員會組織實施。本文件起草單位：中國農業(yè)大學、中國食品藥品檢定研究院、國家衛(wèi)生健康委科學技術研究所、中國科學院水生生物研究所、中國動物疫病預防控制中心、首都醫(yī)科大學、浙江省醫(yī)學科學院、

3、中國醫(yī)學科學院醫(yī)學實驗動物研究所、北京康藍生物技術有限公司、北京市實驗動物管理辦公室、北京實驗動物行業(yè)協會、北京市標準化研究院、中國農業(yè)科學院哈爾濱獸醫(yī)研究所、北京華阜康生物科技股份有限公司、吉林大學。本文件及其所代替文件的歷次版本發(fā)布情況為：DB11/T828.22011DB11/T1053.22013DB11/T1460.12017DB11/T 1460.22017DB11/T 1460.32017、DB 11/T 1460.42018、DB 11/T 1460.52018；本次為第一次修訂。IIDB11/T 18062020實驗動物 寄Th蟲檢測范圍本文件規(guī)定了實驗動物的寄生蟲學等級分類

4、、檢測要求、檢測程序、檢測方法、檢測規(guī)則、結果判定、結論與報告。本文件適用于實驗小型豬、實驗豬、實驗牛、實驗羊、實驗狨猴、實驗長爪沙鼠、實驗雪貂、實驗貓、實驗雞、實驗鴨、實驗鵝、實驗鴿、實驗魚（斑馬魚和劍尾魚）的寄生蟲檢測。下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T 18448.1實動物體寄蟲測GB/T 18448.2實動物弓蟲測GB/T 18448.3實動物兔原檢方法GB/T 18448.4實動物卡肺子檢方法GB/T 18448.6實動物蠕檢方

5、法GB/T 18448.7實動物瘧蟲測GB/T 18448.9 18448.10GB/T 18642 豬旋毛蟲病診斷技術GB/T 18644GB/T 18647GB/T 23239NY/T 541NY/T 1466NY/T 1949孢蟲檢測術改抗染SN/T 1225白胞診斷法顯鏡查法SN/T 2975華睪囊蚴定SN/T 3485SN/T 3499下列術語和定義適用于本文件。3.1實驗物laboratoryanimal經人工飼育，對其攜帶的微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學研究、教學、生產和檢定以及其他科學實驗的動物。1DB11/T 18062020來源: GB 1492

6、52010, 3.13.2普通實動物conventional (CV) laboratoryanimal不攜帶所規(guī)定的人獸共患病病原、動物烈性傳染病病原和對科學實驗有重大干擾的病原的實驗動物。3.2.1無特定抗原抗體普通級實驗動物 specific antigen & antibody-free conventional (CV) laboratory animal普通級實驗動物中未免疫特定的疫苗，且經檢測不攜帶實驗要求排除的特定病原微生物抗原抗體的實驗動物，稱為無特定抗原抗體普通級實驗動物。3.3無特病體實動物specific pathogen free (SPF) laboratoryan

7、imal除普通級實驗動物應排除的病原外，不攜帶主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原3.4無菌實動物germ free (GF) laboratoryanimal無可檢出的一切生命體的實驗動物。根據對微生物和寄生蟲控制的程度，實驗動物分為普通級實驗動物、無特定病原體級實驗動物和無菌級實驗動物三個等級。對待檢實驗動物的精神狀態(tài)、行為、被毛、天然孔分泌物進行外觀檢查。寄Th12DB11/T 18062020表1實驗和驗型各級寄Th蟲測動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）旋毛蟲（Trichinella）豬囊尾蚴（Cysticerc

8、us）無特定病原體體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）旋毛蟲（Trichinella）豬囊尾蚴（Cysticercus）球蟲（Coccidia）小袋纖毛蟲（Balantidium）賈第蟲（Giardia）阿米巴原蟲（Amoeba）隱孢子蟲（Cryptosporidium）蠕蟲（Helminths）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。2表2實驗和驗各級Th蟲測動物等級寄生蟲實驗牛檢測要求實驗羊檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）棘球蚴（Echinococcus）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectop

9、arasites）棘球蚴（Echinococcus）弓形蟲（Toxoplasma）球蟲（Coccidia）新孢子蟲（Neospora）梨形蟲（Piroplasma）賈第蟲（Giardia）錐蟲（Trypanosome）蠕蟲（Helminths）隱孢子蟲（Cryptosporidium）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性；“”表示需要時檢測項目，要求陰性。3DB11/T 180620203表3實驗猴等寄Th蟲測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Tox

10、oplasma）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）球蟲（Coccidia）瘧原蟲（Plasmodium）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項目，要求陰性。4表4實驗爪鼠等寄Th蟲檢項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）纖毛蟲（Ciliates）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）卡氏肺孢子蟲（Pneumocystis carinii）兔腦原蟲（Encephalitozoon cuniculi）無菌

11、級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。54DB11/T 18062020表5實驗貂等寄Th蟲測項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）蠕蟲（Helminths）球蟲（Coccidia）鞭毛蟲（Flagellates）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。6表6實驗各級Th檢項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis

12、）無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）弓形蟲（Toxoplasma）華支睪吸蟲（Clonorchis sinensis）纖毛蟲（Ciliates）鞭毛蟲（Flagellates）蠕蟲（Helminths）兔腦原蟲（Encephalitozoon cuniculi）球蟲（Coccidia）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。7表7實驗、驗、驗和實鴿等寄Th蟲測項目動物等級寄生蟲實驗雞檢測要求實驗鴨檢測要求實驗鵝檢測要求實驗鴿檢測要求普通級體外寄生蟲（Ectoparasites）蠕蟲（Helminths）弓形蟲（Toxoplasma）7DB11/T 180620

13、20表7實雞實鴨實驗和驗各級Th蟲測目續(xù)）動物等級寄生蟲實驗雞檢測要求實驗鴨檢測要求實驗鵝檢測要求實驗鴿檢測要求無特定病原體級體外寄生蟲（Ectoparasites）蠕蟲（Helminths）弓形蟲（Toxoplasma）住白細胞蟲（Leucocytozoon）阿米巴原蟲（Ameba）隱孢子蟲（Cryptosporidium）組織滴蟲（Histomonas）球蟲（Coccidia）毛滴蟲（Trichomonas）瘧原蟲（Plasmodium）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性；“”表示需要時檢測項目，要求陰性。8表8實驗各級Th檢項目動物等級寄生蟲檢測要求普通級微孢子蟲（Ps

14、eudoloma neurophilia）卵圓鞭毛蟲（Piscinoodinium pillulare）多子小瓜蟲（Ichthyophthirius multifiliis）頭槽絳蟲（Bothriocephalidae）無特定病原體級微孢子蟲（Pseudoloma neurophilia）卵圓鞭毛蟲（Piscinoodinium pillulare）多子小瓜蟲（Ichthyophthirius multifiliis）頭槽絳蟲（Bothriocephalidae）斜管蟲（Chilodonella）車輪蟲（Trichodina）杯體蟲（Apiosoma）粘孢子蟲（Myxozoan）指環(huán)蟲（Dac

15、tylogyrus）絨毛偽毛細線蟲（Pseudocapillaria tomentosa）三代蟲（Gyrodactylus）駝形線蟲（Camallanidae）錨頭鳋（Lernaea）無菌級任何可檢出的生命體注：“”表示必檢項，要求陰性。8DB11/T 18062020外觀檢查1外觀檢查編號編號麻醉麻醉毛發(fā)、羽毛或皮屑血液新鮮糞便毛發(fā)、羽毛或皮屑血液新鮮糞便檢測檢測結果判定結果判定判定結論判定結論圖1實驗物Th檢程序NY/T 541樣本進行進一步檢測。7DB11/T 18062020外觀檢查外觀檢查編號編號麻醉麻醉體表寄生蟲檢查和取材體表寄生蟲檢查和取材剖檢及體內寄生蟲檢查和取材剖檢及體內寄生

16、蟲檢查和取材解剖鏡和顯微鏡檢查解剖鏡和顯微鏡檢查結果判定結果判定判定結論判定結論圖 2 實驗魚寄Th蟲學檢測程序98DB11/T 18062020表9驗型寄Th蟲學測法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1旋毛蟲GB/T 18642弓形蟲GB/T 18448.2豬囊尾蚴GB/T 18644球蟲GB/T 18647小袋纖毛蟲GB/T 18448.10賈第蟲GB/T 18448.10阿米巴原蟲GB/T 18448.9隱孢子蟲NY/T 1949蠕蟲GB/T 18448.610表10實驗和驗寄Th蟲檢測法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1棘球蚴NY/T 1466弓形蟲GB/T

17、18448.2隱孢子蟲NY/T 1949球蟲GB/T 18647梨形蟲SN/T 3485新孢子蟲SN/T 3499賈第蟲GB/T 18448.10錐蟲GB/T 23239蠕蟲GB/T 18448.611表11實驗猴Th學測法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2瘧原蟲GB/T 18448.7蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲GB/T 18448.10球蟲GB/T 186479DB11/T 1806202012表12實驗爪鼠Th學測方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2兔腦原蟲GB/T 18448.3蠕蟲GB/T

18、 18448.6鞭毛蟲和纖毛蟲GB/T 18448.10卡氏肺孢子蟲GB/T 18448.413表13實驗貂Th學測法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2蠕蟲GB/T 18448.6鞭毛蟲GB/T 18448.10球蟲GB/T 1864714表14實驗寄Th蟲檢方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲GB/T 18448.1華支睪吸蟲SN/T 2975弓形蟲GB/T 18448.2鞭毛蟲和纖毛蟲GB/T 18448.10蠕蟲GB/T 18448.6兔腦原蟲GB/T 18448.3球蟲GB/T 1864715表15實驗、驗、驗和實鴿Th檢方法寄生蟲檢測方法體外寄生蟲

19、GB/T 18448.1弓形蟲GB/T 18448.2球蟲GB/T 1864710DB11/T 18062020表 15驗、驗實驗和驗寄Th蟲測方（）寄生蟲檢測方法阿米巴原蟲GB/T 18448.9蠕蟲GB/T 18448.6隱孢子蟲NY/T 1949住白細胞蟲SN/T 1225組織滴蟲附錄 A毛滴蟲附錄 B瘧原蟲附錄 CD每3個月應至少檢測1次。抽樣按寄生蟲和微生物采樣要求聯合抽樣。抽樣月齡符合表16的要求。表16實驗物樣動物種類抽樣月齡實驗小型豬6實驗豬2實驗牛6實驗羊2實驗狨猴6實驗長爪沙鼠2實驗貓6實驗雪貂6實驗雞1實驗鴨1實驗鵝1實驗鴿1實驗魚應選擇 3 月齡以上的成魚，必要時同時取

20、飼養(yǎng)環(huán)境水樣用于檢測；應在不同的水環(huán)境內隨機抽樣。抽樣方法按照NY/T 541的規(guī)定執(zhí)行。11DB11/T 1806202010010053017表17實驗物樣群體大小（只/頭/羽）抽樣數量（只/頭/羽）10051005001050015樣品和送檢單一同送達具備檢測能力的實驗室，送檢單應寫明檢品名稱、品系、等級、數量及檢測項目等內容。血清樣品經間接血凝實驗（Indirect Hemagglutination Assay IHA ）、酶聯免疫吸附測定（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA）或間接免疫熒光（Indirect Fluorescence Ass

21、ay，IFA） 檢測，血清抗體陰性判為合格。經檢測，未檢出蟲體、蟲卵，判為合格。（PolymeraseChain Reaction, PCR）檢測經檢測，未見陽性結果判為合格。結論按照檢測規(guī)則，檢測指標均合格，依據表1表8，判為符合相應等級的實驗動物。1表報告根據檢測結果出具檢測報告。12DB11/T 18062020附錄A（規(guī)范性）實驗雞的組織滴蟲檢測DNAdNTPA. 2.1 外觀檢查從精神狀態(tài)、行為、被毛和天然孔分泌物對實驗雞進行外觀檢查。A. 2.2 剖檢和病理檢查剖檢實驗雞，進行病理學大體觀察。觀察肝臟是否腫大，表面是否有黃褐色壞死灶；觀察盲腸是否腫脹，腸腔內是否有干酪樣物。A. 2

22、.3 蟲體檢查宜采用以下三種方法：取剖檢的實驗雞盲腸，除去內容物后取盲腸粘膜表面的刮取物于載玻片上，滴加40的生理鹽水稀釋，顯微鏡下觀察是否有活動的組織滴蟲蟲體存在。取剖檢的實驗雞的肝組織涂片進行姬氏染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。取剖檢的實驗雞的肝臟和盲腸組織制作組織切片并進行H.E.染色，顯微鏡下觀察是否有組織滴蟲蟲體存在。A2.4 核酸檢測取剖檢的實驗雞肝臟或盲腸組織樣品，提取基因組DNA，用針對火雞組織滴蟲18SRGnBnk:G00098.5-GGACCTGG 3;5-CTCGTCGGCATAGTTTAAGGTAGG-3）進行PCR檢測，擴增產物進行凝膠電泳并測序分析。若有火雞組織滴蟲感染，典型病理變化為肝臟腫大，呈深紫褐色，表面有大小不一的黃褐色壞死灶，壞死灶中央稍有下陷，有的壞死灶周圍有出血帶；盲腸外觀明顯腫大，觸之堅硬，呈香腸狀，粗細不均，