GMP質(zhì)量體系029-人工牛黃檢驗標準操作規(guī)程

1、* * * * 制 藥 廠操作標準-質(zhì)量管理文件名稱人工牛黃檢驗標準操作規(guī)程編 碼SOP-QC-029-00頁 數(shù)5-1實施日期制 訂 人審 核 人批準人制訂日期審核日期批準日期制訂部門質(zhì)管部分發(fā)部門檢驗室目的: 規(guī)范人工牛黃檢驗的操作。適用范圍: 人工牛黃的檢驗。責任: 檢驗室檢驗人員按本規(guī)程操作，檢驗室主任對本規(guī)程的有效執(zhí)行承擔監(jiān)督檢查責任。程序： 本品為貝斯素、膽酸、豬去氧膽酸、膽紅素、膽固醇、無機鹽等配制而成。1.性狀：本品為黃色疏松的粉末，味苦，微甘。2.鑒別：2.1儀器及用具：干燥、超聲波清洗儀、分析天平、玻璃層析缸、顯色噴瓶、硅膠G薄層板、點樣器、量瓶、刻度吸管等。2.2試劑及試

2、液：硫酸、硝酸、甲醇、異辛烷正丁醚冰醋酸（8：5：5）、10%磷鉬酸乙醇液、冰醋酸甲苯水（10：7.5：0.3）、正丁醇冰醋酸乙醇水（4：2：1：1）、1%茚三酮乙醇液。2.3測定法2.3.1鑒別（1）取本品適量，分為二份，置點滴板上，一份加硫酸，數(shù)分鐘后，顯污綠色，另一份加硝酸即顯紅色。2.3.2鑒別（2）取本品加甲醇制成每1ml中含10mg的溶液超聲處理，使充分提取后，取上清液，作為供試品溶液。另取膽酸、豬去氧膽酸對照品，分別加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法標準操作規(guī)程（SOP-QC-082-00）試驗，吸取上述供試品溶液4l，對照品溶液2l，分別點于同一硅膠

3、G薄層板上，以異辛烷正丁醚冰醋酸（8：5：5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸的乙醇溶液，于105烘約5分鐘。供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。* * * * 制 藥 廠操作標準-質(zhì)量管理文件名稱人工牛黃檢驗標準操作規(guī)程編 碼SOP-QC-029-00頁 數(shù)5-22.3.3鑒別（3） （2）項下的供試品溶液，另取貝斯素對照品約30mg于10ml量瓶中，加甲醇適量超聲處理便充分提取后，用甲醇稀釋至刻度，靜置使澄清，取上清液作為對照品溶液，照薄層色譜法標準操作規(guī)程（SOP-QC-082-00）試驗，吸取上述供試品溶液及對照品溶液各8l，分別點于一硅膠G薄層板上，

4、以甲苯冰醋酸水（10：7.5：0.3）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸的乙醇溶液，于105烘約5分鐘。供試品色譜中在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點。2.3.4鑒別（4）取本品約100mg于10ml量瓶中，加水5ml，超聲處理使充分提取后，用甲醇稀釋至刻度，靜置使澄清，取上清液作為供試品溶液，另取貝斯素對照品約30mg置10ml量瓶中，同理處理，取上清液作為對照品溶液，照薄層色譜法標準操作規(guī)程（SOP-QC-082-00）試驗。吸取上述供試品及對照品溶液各2l，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正丁醇冰醋酸乙醇水（4：2：1：1）為展開劑，展開，取出，晾干，于105烘約10分

5、鐘噴以1%茚三酮乙醇液，于105烘約5分鐘，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點3.檢查3.1儀器及用具：干燥箱、玻璃層析缸、硅膠G薄層板、稱量瓶、刻度吸管。3.2試劑及試液：甲醇、異辛烷正丁醇冰醋酸（8：5：5）、10%磷鉬酸乙醇液。3.3測定法3.3.1水分：照水分測定法標準操作規(guī)程（SOP-QC-085-00）測定，水分不得過5.0%3.3.2豬去氧膽酸3.3.2.1對照品溶液的配制精密稱取豬去氧膽酸適量，用甲醇制成每1ml含1ml的溶液。* * * * 制 藥 廠操作標準-質(zhì)量管理文件名稱人工牛黃檢驗標準操作規(guī)程編 碼SOP-QC-029-00頁 數(shù)5-33.3.2.2供試品溶

6、液的配制精密稱取供試品適量，用適量甲醇轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，并稀釋至刻度，密塞，振搖，使樣品中豬去氧膽酸溶解，放置，制成每1ml含10mg的溶液，取上清液作為對照品溶液。3.3.2.3檢查法照薄層色譜法標準操作規(guī)程（SOP-QC-082-00）試驗，精密量取供試品溶液4l及對照品溶液2l，交點于同一硅膠G薄層板上，以異辛烷正丁醇冰醋酸（8：5：5）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇液，于105烘約5分鐘，供試品色譜中，豬去氧膽酸斑點的顏色應(yīng)深于或等于對照品色譜。4.含量測定4.1儀器及用具：紫外分光光度計，分析天平、具塞試管、棕色量瓶、水浴鍋、刻度吸管等。4.2試劑及試液：60%

7、冰醋酸溶液、新配制的糠醛溶液（1100）、硫酸溶液（取硫酸50ml與蒸餾水65ml混合制成）4.3測定法4.3.1膽酸4.3.1.1標準溶液的制備取在105干燥至恒重的膽酸對照品12.5mg，精密稱定，置25ml量瓶中，加60%冰醋酸溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻，即得（每1ml含膽酸0.5mg）。4.3.1.2標準曲線的繪制精密量取標準溶液0.2、0.4、0.6、0.8與1.0ml，分別置于帶塞試管中，均用60%冰醋酸溶液稀釋成1.0ml，加新配制的糠醛水溶液（1100）各1.0ml，在冰浴中放置5分鐘，加硫酸溶液（取硫酸50ml與蒸餾水65ml混合制成）13ml，混勻，在70水浴中加熱10

8、分鐘，迅速移至冰浴中，放置2分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，照紫外分光光度法標準操作規(guī)程（SOP-QC-079-00）測定，在605nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。* * * * 制 藥 廠操作標準-質(zhì)量管理文件名稱人工牛黃檢驗標準操作規(guī)程編 碼SOP-QC-029-00頁 數(shù)5-44.3.1.3供試品測定取本品約0.1g，精密稱定，加60%冰醋酸溶液數(shù)ml，充分研磨，移入50ml量瓶中，殘渣再加60%冰醋酸溶液，研磨后，全部移入量瓶中，再用60%冰醋酸溶液稀釋至刻度，搖勻，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液各1ml，分別置于甲、乙兩個帶塞試管中，于甲管中加新配制的糠醛水

9、溶液各1ml，乙管中加水1ml作空白，按標準曲線的繪制項下的方法自“在冰浴中放置5分鐘”起，依法測定吸收度。按標準曲線計算含量，即得。本品膽酸（C24H40O5）含量按干燥品計算，不得少于13.0%。4.3.1.4計算公式式中：C表示按標準曲線換算出的供試品濃度； W表示供試品的取樣量。4.3.1.5允許偏差：3%4.3.2膽紅素4.3.2.1對照品溶液的制備取膽紅素標準品約10.0mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿80ml超聲處理使充分溶解，加氯仿稀釋至刻度，作為對照品儲備液（0.1mg/ml）精密吸取對照品儲備液10.0ml，置50ml棕色量瓶中，加氯仿稀釋至刻度，即為對照品溶液（約20l /ml）4.3.2.2標準曲線的繪制精密吸取膽紅素對照品溶液4.0、5.0、6.0、7.0、8.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，用氯仿稀釋至刻度，搖勻，照紫外分光光度法標準操作規(guī)程（SOP-QC-079-00）測定，在453nm處測定吸收度，以吸收度為縱坐標，濃度為橫坐標，繪制標準曲線。4.3.2.3供試品測定取樣品80mg，精密稱定，置100ml棕色量瓶中，加氯仿80ml超聲處理，使充分溶解，加氯仿稀釋至刻度，搖勻，濾過，棄去初濾液， * * * * 制 藥 廠操作標準-質(zhì)量管理文件名稱人工牛黃檢驗標準操作規(guī)程編 碼SOP-QC-029-00頁 數(shù)5-5取續(xù)濾液