煙草的組織培養(yǎng)技術

1、煙草的組織培育技術一、目的與要求驗證“植物細胞全能性”理論 。學習用生長調整劑對植物器官發(fā)生的誘導方法。二、 試驗原理植物組織培育是指在無菌條件下，分別、并在培育基中培育離體植物組織器官或細胞植物細胞的全能性，即植物體的每個活細胞都有一樣的遺傳組成，在適當條件下具有生殖出完整植株的力量。植物組織當中原本已經(jīng)分化的細胞，組織、器官一旦脫離原有的機體環(huán)境，分化的細胞通過脫分化再分化重生長發(fā)育成完整的植株。了無序構造的細胞團。再分化：經(jīng)過脫分化的細胞或組織再次獲得分化成不同功能的細胞、組織、器官或完整植物體。三、 材料和用具材料：無菌煙草葉盤已經(jīng)誘導成芽，擬南芥。剖刀、大、小鑷子、30ml 燒杯、5

2、00ml 燒杯、藥勺、玻璃棒、培育瓶、平皿、試紙，報紙等。試劑：MS培育基、0.5mol/LNaOH、1mol/LHCl。四、 操作步驟一誘導培育基配制1MS 儲液儲液配置見附表3/441 4 瓶培育基1 組的配置方案。表1誘導培育基配制表成分 蒸餾水MS 母液蔗糖用蒸餾水粗略定容至pH值瓊脂實際稱取量120 ml15 mL4.5 g 100ml5.8g加蔗糖3v。蔗糖是碳源，同時起到維持滲透壓的作用。pH 過低，高溫處里時間過長，都可能會使培育基不凝。加瓊脂0.7-0.8v瓊脂粉是固化劑、支持物。二滅菌12015min。30min。無菌間棚頂紫外燈，翻開超凈臺風機，關掉超凈工作臺上的紫外燈。

3、三70%酒精棉球擦拭雙手、培育瓶和超凈臺面。待手上的酒精干了，點燃酒精燈。將培育瓶的蓋子旋松，但不要翻開，放到無菌風道側面?zhèn)溆谩?-2 塊，插入培育基。用酒精燈火焰上灼燒瓶口，瓶蓋數(shù)秒阻斷微生物進入必太緊。精燈火焰，以免火焰?zhèn)?。進出無菌間關好緩沖間的推拉門。4 周，25，16 8 70%-80%。其次周生長狀況1：1 號擬南芥種子開頭膨脹，略微膨大，但是并未發(fā)芽，無明顯變化。 長。1：生長狀態(tài)較好，發(fā)育較快，已經(jīng)占據(jù)了整個培育瓶的空間，莖稈粗大，葉片綠色略帶黃色，根系較興旺，伸張至整個培育瓶的培育基。 基的外表，暴露在空氣中。第三周生長狀況擬南芥 1：同其次周時的狀態(tài)，無明顯變化。以滲透到萌發(fā)的芽中。1：生長狀況與其次周時一樣。有限的培育瓶生長空間與培育基中有限的營養(yǎng)物質，限制了煙草苗的進一步生長。但染料的顏色略微變淺?；念伾?，最初的深紅色此時已成了淺紅，顏色變化較大。第四周生長狀況擬南芥 1：照舊無萌芽，只是種子更加膨大。芽的萌發(fā)于連續(xù)生長。物質的表現(xiàn)，需要移種到外部環(huán)境中。顏色加深。思考題什么是細胞全能性？或特性。具有以下兩大特點：養(yǎng)分的物質，激素和其他適宜的外界條件下，才能表現(xiàn)其全能性。如成纖維細胞在離包括特定轉錄因子或小分子化合物的誘導下，可被重編程為誘導多能干細胞C，并發(fā)育成的個體。依據(jù)動物細胞全能性大小，可分為全能性細胞如動物早期胚胎細胞能性如原腸胚細胞，專能