腸桿菌科及檢驗

1、第1第1頁腸桿菌科及檢驗本章考點：1.概述概念命名與分類原則共同特點自然與人體內(nèi)的分布微生物學(xué)檢查方法臨床意義2.埃希菌屬、沙門菌屬、志賀菌屬、變形桿菌屬、耶爾森菌屬生物學(xué)性狀微生物學(xué)檢查法臨床意義一、概述和通性一概念腸桿菌科是由多個菌屬組成，其生物學(xué)性狀相像，均為革蘭陰性桿菌。大多數(shù)腸道桿菌屬于正常菌群， 作為條件致病菌而引起疾病。其中包括常引起腹瀉和腸道感染的細(xì)菌埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、 耶爾森菌屬和常導(dǎo)致院內(nèi)感染的細(xì)菌枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、多源菌屬、沙雷菌屬、 變形桿菌屬、普羅威登菌屬和摩根菌屬，以及一些在肯定條件下偶可引起臨床感染的細(xì)菌。二分類依據(jù)伯杰系統(tǒng)細(xì)菌學(xué)手冊

2、1984 年將腸桿菌科的細(xì)菌分為20 個屬即埃希菌屬、志賀菌屬、沙門菌屬、枸櫞酸桿菌屬、克雷伯菌屬、腸桿菌屬、沙雷菌屬、哈夫尼亞菌屬、愛德華菌屬、普羅威登斯菌屬、 變形桿菌屬、摩根菌屑、耶爾森菌屬等。三生物學(xué)特性1.形態(tài)與染色革蘭陰性桿菌，其菌體大小為1.06.0m0.31.0 m。多數(shù)有周鞭毛，除外志賀菌屬、克雷伯菌屬、鼠疫耶爾森菌和EIEC 無鞭毛。均不形成芽胞，少數(shù)菌屬細(xì)菌可形成莢膜。培育：需氧或兼性厭氧，養(yǎng)分要求不高，在一般瓊脂培育基和麥康凱培育基上均能生長并形成中等大S 型菌落，液體培育基中呈混濁生長。革蘭陰性桿菌，其菌體大小為1.06.0m0.31.0 m。多數(shù)有周鞭毛，除外志賀菌

3、屬、克雷伯菌屬、鼠疫耶爾森菌和EIEC 無鞭毛。均不形成芽胞，少數(shù)菌屬細(xì)菌可形成莢膜。生化反響：發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣， 乳糖發(fā)酵試驗: 腸道非致病菌，腸道致病菌除外變形桿菌。腸桿菌科定科試驗主要工程是革蘭陰性桿菌、觸酶陽性，氧化酶陰性，硝酸鹽復(fù)原試驗陽性性?？乖瓨?gòu)造：包括菌體O抗原，鞭毛H抗原和外表抗原如Vi 抗原、K 抗原3 種。變異：包括菌落 SR 變異，鞭毛HO 變異和耐藥性或生化反響性質(zhì)的轉(zhuǎn)變。6。抵抗力：不強。加熱 60，30能耐膽鹽。四致病性腸桿菌科細(xì)菌種類多，可引起多種疾?。褐虏⌒阅c道桿菌：以腸內(nèi)感染為主，腹瀉為共顯病癥，引起急慢性腸道感染、食物中毒、旅游者腹瀉及腸熱癥等。條件致

4、病菌：為醫(yī)院感染主要病原菌，消滅移位感染。五微生物學(xué)檢驗分別培育：將糞便或肛拭標(biāo)本馬上接種在腸道菌選擇培育基上或先增菌后再分別；血、尿或膿汁等其他標(biāo)本原則上不使用選擇培育基。分別純菌后，依據(jù)菌落特點，結(jié)合革蘭染色及氧化酶反響結(jié)果作進一步 鑒定。鑒定和非發(fā)酵菌加以鑒別；腸桿菌科細(xì)菌的分群，多承受苯丙氨酸脫氨酶 和葡萄糖酸鹽試驗，將腸桿菌科的細(xì)菌分為苯丙氨酸脫氨酶陽性、葡萄糖酸鹽利用試驗陽性和兩者均為陰性反響三個類群；選擇生化反響 進展屬種鑒別。表 5-19-1腸桿菌科的初步分類菌屬名苯丙氨酸葡萄糖酸鹽變形桿菌屬普羅威登斯菌屬摩根菌屬克雷伯菌屬腸桿菌屬*沙雷菌屬哈夫尼亞菌屬埃希菌屬志賀菌屬沙門菌屬

5、枸櫞酸桿菌屬愛德華菌屬耶爾森菌屬*有例外KIA和尿素-靛基質(zhì)-動力MIU 復(fù)合培育基管中，并依據(jù)其六項反響結(jié)果，將細(xì)菌初步定屬。最終鑒定：腸桿菌科各屬細(xì)菌的最終鑒定是依據(jù)生化反響的結(jié)果定屬、種，或再用診斷血清做凝集反響才能作出最終推斷。第2頁第 第 6頁二、埃希菌屬一概念埃希菌屬包括 5 個種，即大腸埃希菌、蟑螂埃希菌、弗格森埃希菌、赫爾曼埃希菌和傷口埃希菌。臨床最常見的是大腸埃希菌。大腸埃希菌俗稱大腸桿菌，大多數(shù)菌株是人類和動物腸道正常菌群。二生物學(xué)特性性狀形態(tài)與染色：為革蘭陰性短桿菌，1.03.0m0.40.7m。多數(shù)有周鞭毛，能運動。有菌毛、莢膜及微莢膜。培育特性：一般養(yǎng)分肉湯中呈渾濁生

6、長。一般養(yǎng)分瓊脂上呈灰白色的光滑型菌落。血瓊脂平板上，少數(shù)菌株產(chǎn)生溶血環(huán)。在伊紅美藍(lán)瓊脂上，由于發(fā)酵乳糖，菌落呈藍(lán)紫色并 有金屬光澤。麥康凱和SS 瓊脂中的膽鹽對其有抑制作用，耐受菌株能生長并形成粉紅色菌落。生化反響：吲哚、甲基紅、V-P、枸櫞酸鹽試驗IMViC 試驗為+-腸桿菌屬多為-+?？耸想p糖鐵瓊脂KIA上斜面和底層均產(chǎn)酸產(chǎn)氣，H2S 陰性。動力、吲哚、尿素MIU培育基的生化反響為+-?？乖瓨?gòu)造：大腸埃希菌的抗原由菌體抗原O、外表抗原K和鞭毛抗原H三種構(gòu)成。現(xiàn)已 知有 171 種O 抗原，100 種 K 抗原和 56 種H 抗原。一個菌株的抗原類型由特別的0、K 和H 抗原的代碼表0：K

7、：H0111：K58B4：H2。二致病性主要是侵襲力、內(nèi)毒素、腸毒素等致病因素引起各種炎癥如膽囊炎、泌尿系感染、肺炎、生兒腦膜炎、傷口感染、菌血癥及腹瀉等。內(nèi)毒素還可引起發(fā)熱、休克、DIC腸道外感染：主要由正常菌群條件致病，以泌尿系統(tǒng)感染常見，高位嚴(yán)峻尿道感染與特別血清型大腸埃希菌有關(guān)。如菌血癥、膽囊炎、腹腔內(nèi)膿腫。腸道感染：致病性大腸埃希菌有以下五個病原群。腸產(chǎn)毒型大腸埃希菌ETEC：引起霍亂樣腸毒素腹瀉水樣瀉。腸致病型大腸埃希菌EPEC：主要引起嬰兒腹瀉。腸侵襲型大腸埃希菌EIEC：可侵入結(jié)腸黏膜上皮，引起志賀樣腹瀉能產(chǎn)生粘液膿血便。腸出血型大腸埃希菌EHEC：又稱產(chǎn)志賀樣毒素VT大腸埃希

8、菌SLTEC 或 UTEC，其中 O157：H7 可引起出血性大腸炎和溶血性尿毒綜合征HUS。臨床特征為嚴(yán)峻的腹痛、痙攣，反復(fù)出血性腹瀉，伴發(fā)熱、嘔吐等。嚴(yán)峻者可進展為急性腎衰竭。腸粘附集聚型大腸埃希菌EAggEC：也是近報道的一種能引起腹瀉的大腸埃希菌。3.CDC 將大腸埃希氏菌O157：H7 列為常規(guī)檢測工程EHEC 的血清型50 種，最具代表性的是 O157：H7。在北美很多地區(qū)，O157：H7 占腸道分別病原菌的其次或第三位，是從血便中分別到的最常見的病原菌，分別率占血便的40%，6、7、8 三個月O157：H7 感染的發(fā)生率最高。且 0157 是 4 歲以下兒童急性腎功衰的主要病原菌

9、，所以CDC 提出應(yīng)將大腸埃希氏菌0157：H7 列為常規(guī)檢測工程。三微生物學(xué)檢驗?zāi)X脊液、痰、分泌液等。檢驗方法及鑒定涂片與鏡檢：膿汁及增菌培育物覺察單一革蘭陰性桿菌，可初步報告染色、形態(tài)、性狀供臨床用藥參考。分別培育：糞便標(biāo)本可用弱選擇鑒別培育基進展分別，膿汁等可用血平板分別，取可疑菌落進展形態(tài)觀看及生化反響。鑒定 1初步鑒定：依據(jù)菌落特征，涂片染色的菌形及染色反響，取純培育物作生化反響。凡符合KIA：AA 或 KA、產(chǎn)氣或不產(chǎn)氣、H S-；MIU：動力+或-、吲哚+、脲酶-；氧化酶-，IMViC:+-，可鑒定為大2腸埃希菌。2致病性大腸埃希菌:EPEC 的鑒定：EIEC 的鑒定：應(yīng)與志賀菌

10、相鑒別，兩者的主要鑒別試驗可用醋酸鈉和葡萄糖銨利用試驗及粘質(zhì)酸鹽產(chǎn)酸三種試驗。大腸埃希菌均為陽性，而志賀菌均為陰性。ETEC 毒素的檢測：承受改進Elek 法測定LT 并承受乳鼠胃內(nèi)灌注法檢測ST。EHECEAEC 的鑒定：檢測細(xì)菌對HEP-2 細(xì)胞或Hela 細(xì)胞的粘附性。大腸埃希菌是超廣譜-內(nèi)酰胺酶ESBLs 的主要產(chǎn)酶株，該酶由質(zhì)粒介導(dǎo)。對 ESBLs 產(chǎn)酶株所致感染需要承受碳青酶烯類或內(nèi)酰胺類抗生素酶抑制劑或頭霉菌素類進展治療。腸道內(nèi)感染還需做血清分型、毒素測定或毒力試驗。食物、飲料、水等衛(wèi)生 細(xì)菌學(xué)檢查，主要進展大腸菌群指數(shù)檢測。三、志賀菌屬志賀菌屬是人類細(xì)菌性痢疾最常見的病原菌，通

11、稱痢疾桿菌。依據(jù)生化反響與血清學(xué)試驗該屬細(xì)菌分 為痢疾、福氏、鮑氏和宋內(nèi)志賀菌四群。CDC 分類系統(tǒng)1989將生化性狀相近的A、B、C 群歸為一群，統(tǒng)稱為A、B、C 血清群，將鳥氨酸脫羧酶和-半乳糖苷酶均陽性的宋內(nèi)志賀菌單列出來。我國以福氏和宋內(nèi)志賀菌引起的菌痢-最為常見。一生物學(xué)特性形態(tài)與染色：革蘭陰性短小桿菌，23m0.50.7m，無莢膜，無芽胞，無鞭毛，有菌毛。培育特性：需氧或兼性厭氧，液體培育基中呈渾濁生長，在一般瓊脂平板和SS 培育基上形成中等大小、半透亮的光滑型菌落，宋內(nèi)志賀菌可形成扁平、粗糙的菌落。生化反響：志賀菌屬的細(xì)菌 KIA：KA、產(chǎn)氣-+、H S-，MIU：動力-、吲哚+

12、-、尿酶-，氧化酶2-，不產(chǎn)生賴氨酸脫羧酶，氧化酶試驗陰性?？乖瓨?gòu)造：志賀菌屬只有O 抗原而無鞭毛抗原，個別菌型及分別菌株有K 抗原。二致病性致病物質(zhì)：侵襲力：菌毛粘附于腸粘膜上皮細(xì)胞，誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)吞。內(nèi)毒素：破壞腸粘膜；腸壁通透性；腸壁植物神經(jīng)腹痛，腹瀉，里急后重，粘液膿血便。外毒素志賀毒素，ST：腸毒素活性；細(xì)胞毒活性；神經(jīng)毒活性所致疾?。杭?xì)菌性痢疾，簡稱菌痢。1.急性菌痢。中毒性菌痢。慢性菌痢。傳染源為病人和帶菌者，經(jīng)糞口傳播。三微生物學(xué)檢驗1.標(biāo)本采集盡可能在發(fā)病早期及治療前采集穎糞便，選擇膿血便或粘液便，必要時可用肛拭子采集。檢驗方法及鑒定分別培育：取糞便粘液或膿血局部或肛拭標(biāo)本接種G

13、N 肉湯增菌及再進展分別培育。一般同時接種強弱選擇性不同的兩個平板。強選擇鑒別培育基可用沙門、志賀菌選擇培育基SS；弱選擇培育 基可用麥康凱或中國藍(lán)培育基。培育1824h 后選取可疑菌落進展以下鑒定。鑒定34 支 35 培育 1824h，KIA：KAH S-，2MIU：動力-、吲哚+-、尿酶-，并結(jié)合摸干脆玻片凝集試驗陽性結(jié)果可鑒定為志賀菌屬。最終鑒定可用動力和氧化酶試驗加以鑒別，志賀菌均為陰性，而類志賀鄰單胞菌為陽性。傷寒沙門菌硫化氫和動力陽性，能與沙門菌屬因子血清0 多價A-F 群或Vi凝集而不與志賀菌屬因子血清凝集。四防治原則人工主動免疫用于預(yù)防目前尚不抱負(fù)，治療細(xì)菌性痢疾一般首選氟喹諾

14、酮類抗生素。四、沙門菌屬一生物學(xué)特性形態(tài)與染色：本屬菌為0.71.5m2.05.0m，無芽胞，無莢膜的革蘭陰性直桿菌。除雞沙門菌外都有周身鞭毛，能運動，多數(shù)有菌毛。培育特性：養(yǎng)分要求不高，在一般瓊脂培育上即能生長，在液體培育基中呈均勻混濁。在SS 瓊脂和麥康凱瓊脂培育基上 3537 24h 可形成直徑約 24mm 的透亮或半透亮菌落，對膽鹽耐受。產(chǎn)H S 者2在 SS 瓊脂上形成黑色中心。生化反響：除亞利桑那菌外均不能發(fā)酵乳糖，大多數(shù)IMViC 試驗為-+-+，KIA：KA、產(chǎn)氣+-、H S+-，MIU：動力+、吲哚-、脲酶+。2抗原構(gòu)造：主要由 0 抗原和H 抗原組成，局部菌株有類似大腸桿菌

15、K 抗原的外表抗原，與細(xì)菌的毒力有關(guān)，故稱Vi 抗原。10 抗原：即菌體抗原。沙門菌屬的菌體抗原有58 種，以阿拉伯?dāng)?shù)字依次標(biāo)記：依據(jù)沙門菌有共同的 O 抗原這一特點，分類學(xué)者將有共同抗原的細(xì)菌歸為一組，這就使沙門菌分成42 個群或組。即A、B、CZ 和O16O67 群。每群都有群特異性抗原，如A 群O2、B 群 04、D 群 O9 等。2H 抗原：即鞭毛抗原。H 抗原是定型的依據(jù)。沙門菌Ha、b、c1、2、3表示。外表抗原：已證明沙門菌屬有Vi、M 和 5 抗原三種。Vi 抗原加熱 6030min 或經(jīng)石炭酸處理被破0 抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集。變異性SR 變異，菌落光滑型經(jīng)人工培育傳代后漸漸

16、變成粗糙型。此時菌體外表的特異多糖抗原喪失，在生理鹽水中可消滅自凝。HO 變異，指有鞭毛的沙門菌失去鞭毛的變異。相位變異，具有雙相H 抗原第相為特異相，第相為非特異相的沙門菌變成只有其中某一相 HVW 變異，失去全部Vi 抗原的變異。二致病性致病因素有侵襲力、內(nèi)毒素和腸毒素 3 種。臨床上可引起胃腸炎、腸熱癥、菌血癥或敗血癥等。其中腸熱癥屬法定傳染病。腸熱癥：即傷寒與副傷寒病。由傷寒與副傷寒沙門菌所引起的慢性發(fā)熱病癥。為法定傳染病之一。食物中毒：引起食物中毒的沙門菌以鼠傷寒、腸炎、湯卜遜、豬霍亂、乙型及丙型副傷寒沙門菌為常見。慢性腸炎：沙門菌可引起老人和兒童的慢性腸炎。敗血癥：多由豬霍亂沙門菌

17、引起。沙門菌的局部感染如頸部、腰部等。有鼠傷寒沙門菌引起兒童的醫(yī)院感染報道。三微生物學(xué)檢查標(biāo)本采集：腸熱癥的第一、二周采血液，其次、三周采糞便與尿液。整個病程中骨髓分別細(xì)菌陽性率較高。食物中毒采集食物與糞便。檢查方法及鑒定分別培育糞便：一般將糞便或肛拭直接接種于SS 和麥康凱平板上，用兩種培育基的目的是為提高標(biāo)本的陽性檢出率。血液和骨髓：抽取患者血液 5ml 或骨髓 0.5ml，馬上接種于含 0.5%膽鹽肉湯或葡萄糖肉湯 5ml 試管中48h對723ml亦可將尿液離心沉淀物分別培育。局部感染的膿液。鑒定：沙門菌屬的鑒定與志賀菌屬一樣，須依據(jù)生化反響和血清學(xué)鑒定兩方面進展。 1KIA 和 MIU

18、 上。并作生化反響。以沙門菌多價診斷血清作玻片凝集試驗。凡符合 KIA：KA、產(chǎn)氣+-、H2S+-、MIU：動力+、吲哚-、脲酶+，氧化酶-，觸酶+，硝酸鹽還第6頁第 第 9頁原+，以沙門菌多價血清作玻片凝集試驗陽性，鑒定為沙門菌屬。2O 抗原多價血清與OHVi 抗原的單價因子血清。甲型副傷寒沙門菌、鼠傷寒沙門菌和傷寒沙門菌分別屬于A、B、D 血清群。血清學(xué)診斷：肥達(dá)試驗：用的傷寒沙門菌 0、H 抗原，甲乙丙副傷寒沙門菌H 抗原稀釋后與被檢血清作定量凝集試驗，以檢測患者血清中抗體的含量，來推斷機體是否受沙門菌感染而導(dǎo)致腸熱癥并 判別沙門菌的種類。四防治原則加強飲食衛(wèi)生，防止污染食品及水源經(jīng)口感

19、染，攜帶者的樂觀治療，皮下注射死菌苗或口服減毒活菌苗是預(yù)防沙門菌屬細(xì)菌傳染的幾個主要措施。臨床治療是依據(jù)體外藥敏試驗結(jié)果選用適宜抗生素，保持水 及電解質(zhì)的平衡，對并發(fā)癥樂觀處理，如腸出血、腸穿孔、膽囊炎、心肌炎等。對于傷寒沙門菌感染，可 選擇的抗生素有氯霉素、氟喹諾酮類、氨芐西林、復(fù)方諾明、三代頭孢等。五、變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬及摩根菌屬變形桿菌屬包括四個種，即一般變形桿菌、奇異變形桿菌、產(chǎn)粘變形桿菌和潘氏變性桿菌。普羅威登 P.rustigianii。摩根菌屬只 有一個種，即摩根摩根菌。這三個屬的細(xì)菌為腸道借居的正常菌群，在肯定條件下能引起各種感染，也是醫(yī)源性感染的重要條件致病菌。一生物

20、學(xué)特性形態(tài)與染色： 30以上培育條件下不形成鞭毛，無芽孢，無莢膜。培育：需氧或兼性厭氧，對養(yǎng)分無特別要求，生長溫度1043。在養(yǎng)分瓊脂和血瓊脂平板上一般變形桿菌和奇異變形桿菌的大多數(shù)菌株呈遷徙集中生長現(xiàn)象，即快速形成波浪狀薄膜而布滿整個平板培育 基外表。普羅威登斯菌和摩根菌無遷徙生長現(xiàn)象。在含有膽鹽的培育基外表菌落呈扁平、圓形、半透亮。 在含有鐵或鉛離子的培育基中產(chǎn)硫化氫菌株的菌落中心呈黑色。SS 培育基上有與沙門菌、志賀菌相像的菌落特征。在液體培育基中快速生長，早期培育物呈混濁，可有局部沉淀。生化反響：三屬菌共同特點是氧化酶陰性，苯丙氨酸脫氨酶陽性的革蘭陰性桿菌。三屬菌的區(qū)分：見下表。變形桿

21、菌屬普羅威登斯菌屬摩根菌屬遷徙生長+-硫化氫產(chǎn)生+-液化明膠+-酯酶+-鳥氨酸脫羧酶-+枸櫞酸鹽利用-+-變形桿菌屬的種鑒別：一般變形桿菌靛基質(zhì)和麥芽糖均陽性，鳥氨酸脫羧酶陰性；奇異變形桿菌靛基質(zhì)和麥芽糖均陰性，鳥氨酸脫羧酶陽性；產(chǎn)粘變形桿菌靛基質(zhì)和鳥氨酸脫羧酶均陰性，麥芽糖陽性。普羅威登斯菌屬的種鑒別：產(chǎn)堿普羅威登斯菌尿素和蕈糖均陰性，側(cè)金盞花醇陽性；斯氏普羅威登斯菌尿素可陰性可陽性，蕈糖陽性，側(cè)金盞花醇陰性；雷氏普羅威登斯菌尿素和側(cè)金盞花醇均陽性，蕈糖陰 性。二致病性變形桿菌屬：引起的尿路感染僅次于大腸埃希菌。一般變形桿菌還可引起多種感染及食物中毒；奇異變形桿菌還可引起嬰幼兒腸炎。本菌屬細(xì)

22、菌具O 抗原及H 抗原，一般變形桿菌OX 、OX 、OX的菌體抗原與某些立克次體有共同抗192k原，這就是外-斐Well-Felix反響，是用以診斷某些立克次體病的依據(jù)。普羅威登斯菌屬：本屬菌可引起燒傷、創(chuàng)傷與尿道感染。摩根菌屬：本屬細(xì)菌為醫(yī)源性感染的重要病原菌之一?？芍旅谀虻栏腥竞蛡诟腥尽Ｈ⑸飳W(xué)檢驗標(biāo)本采集：依據(jù)病情采集尿液、膿汁、傷口分泌物及嬰兒糞便等。檢驗方法及鑒定直接涂片：尿液、腦脊液、胸腹水等離心沉淀后，取沉淀物涂片；膿液和分泌液可直接涂片，行革蘭染色后，觀看形態(tài)及染色性。分別培育：將各類標(biāo)本分別接種于血瓊脂平板和麥康凱或伊紅美藍(lán)EMB瓊脂平板；或 SS 瓊脂和麥康凱或EMB3

23、5371824h于血瓊脂中參加石碳酸或苯乙醇，使其最終濃度為1gL 和 0.25%，這并不影響其他細(xì)菌的分別。變形桿菌屬在血瓊脂上呈遷徙生長，在腸道菌選擇培育基上形成不發(fā)酵乳糖菌落，在SS 瓊脂上常為有黑色中心的菌落。鑒定：接種前述生化培育基，并作氧化酶試驗，進展此三個屬和屬、種鑒定。六、耶爾森菌屬耶爾森菌屬包括 11 個種，其中鼠疫耶爾森菌、假結(jié)核耶爾森菌和小腸結(jié)腸炎耶爾森菌確定與人類致病有關(guān)。一鼠疫耶爾森菌鼠疫耶爾森菌俗稱鼠疫桿菌，是烈性傳染病鼠疫的病原菌。鼠疫是自然疫源性傳染病，通過直接接觸染疫動物或節(jié)肢動物叮咬而感染。臨床常見腺鼠疫、敗血型鼠疫和肺鼠疫。生物學(xué)特征兩極濃染，大小為1.0

24、 2.0m0.50.7m。有莢膜，無鞭毛，無芽孢。陳舊培育物或3%氯化鈉瓊脂培育基上呈明顯多形性。最適生長溫度是 2830。培育基最適pH為 6.97.1。培育 1618h，用顯微鏡觀看可見一層外形不一，淺灰色小菌落，這是鼠疫耶爾森菌培育初期的菌落特征，這對本菌的鑒定有肯定意義。在培育2448h 后可形成直徑 0.10.2mm，圓形。中心突出，透亮的淺灰色小菌落。72h 后菌落直徑可達(dá) 4mm。在液體培育基中生長良好，開頭渾濁生長，24h 后為沉淀生長，48h。不活潑， ，MIU培育基無動力，不產(chǎn)生靛基質(zhì)，尿素酶試驗陰性。微生物學(xué)檢驗標(biāo)本采集：主要采集血液、痰和淋巴結(jié)穿刺液。檢驗方法及鑒定：鼠

25、疫耶爾森菌為甲類病原菌，傳染性極強，故應(yīng)嚴(yán)格遵守檢驗操作規(guī)程，要求試驗室有隔離設(shè)施，防鼠、防蚤和嚴(yán)密的個人防護措施；用過的試驗器材及物品隨時消毒處理。直接涂片檢查：一般制片兩張，分別用于革蘭染色和美藍(lán)染色，可見革蘭陰性球桿菌，形似芝麻， 兩端濃染。分別培育：鼠疫耶爾森菌學(xué)檢驗中分別培育步驟格外重要，分別培育時未污染標(biāo)本可直接接種血平板，污染標(biāo)本則需接種選擇性培育基，如龍膽紫亞硫酸鈉瓊脂。經(jīng)2830培育 2448h 后，選擇菌落作鑒定。鑒定：依據(jù)菌落特征，細(xì)菌形態(tài)和肉湯中呈“鐘乳石”狀發(fā)育KIA不產(chǎn)H2S，MIU 均為陰性反響。為作最終鑒定應(yīng)補充以下試驗方法：噬菌體裂解試驗；動物試驗；免疫學(xué)方法

26、。二小腸結(jié)腸炎耶爾森菌1.生物學(xué)特性形態(tài)與染色：菌體大小為1.02.0m0.51.0m，25培育時形成周鞭毛，呈翻滾旋轉(zhuǎn)狀運動，37培育無動力，無芽胞，無莢膜的革蘭陰性球桿菌。培育：需氧或兼性厭氧，440均能生長，最適生長溫度為 2028。一般養(yǎng)分瓊脂上生長良好，在血瓊脂平板上，形成直徑為12mm，圓形光滑，凸起的菌落。能在選擇培育基如麥康凱培育基 上生長，形成不發(fā)酵乳糖的無色、透亮或半透亮、扁平、較小的菌落。在SS 瓊脂板上生長不良。液體培育基中呈渾濁生長，液體外表可形成白色菌膜或有沉淀生成。生化反響：分解葡萄糖和蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，絕大多數(shù)菌株不發(fā)酵乳糖，硫化氫陰性，脲酶陽性， 靛基質(zhì)不定。V

27、P 試驗 25陽性，37陰性，鳥氨酸脫羧酶陽性。致病性致病因素：侵襲力和腸毒素。腸道感染性疾病。依據(jù)感染后定居部位不同，可分為小腸結(jié)腸炎、末端回腸炎、胃腸炎、闌尾炎和腸系膜淋巴結(jié)炎。除腸道感染外尚 可發(fā)生敗血癥，結(jié)節(jié)性紅斑及關(guān)節(jié)炎等。微生物學(xué)檢驗標(biāo)本采集：標(biāo)原來自被檢者糞便、血液、尿液、食物或臟器組織等。檢驗方法及鑒定。NyE耶爾森選擇性瓊脂或SS 瓊脂，亦可將標(biāo)本接種于 5ml、pH7.4，15mmolL 磷酸緩沖液PBS中，如為食物標(biāo)本在研碎后加10 倍量的上述PBS，置4冰箱，分別于 7、14、21 天取上述含菌PBS0.1ml 接種于腸道菌選擇瓊脂平板，置25培育 2448h 后，選擇

28、可疑小腸結(jié)腸炎耶爾森菌菌落進一步鑒定。鑒定：依據(jù)菌落形態(tài)，革蘭染色的典型形態(tài)特點，氧化酶試驗陰性，30以下培育液暗視野觀看， 其動力呈翻滾狀態(tài)，KIA 只利用葡萄糖，MIU 試驗 22動力陽性，37無動力，脲酶試驗陽性，即可作出初步鑒定。血清學(xué)鑒定：用小腸結(jié)腸炎耶爾森菌0 因子血清與待檢菌作玻片凝集試驗。三假結(jié)核耶爾森菌假結(jié)核耶爾森菌是鼠疫耶爾森菌的近緣菌，可使嚙齒動物家畜和禽類致病，并通過污染食物導(dǎo)致人類感染。人類感染少見，偶見腸道感染及腸系膜淋巴結(jié)炎。菌體呈球形或短桿形，兩端濃染。25培育有周鞭毛，有動力，37培育無動力。兼性厭氧，最適生長溫度 30，pH6.08.0。一般養(yǎng)分瓊脂上易生長，發(fā)育較快，3724h 形成圓形，中心凸起，呈顆粒狀，灰黃色，半透亮的菌落，血瓊脂平板上不溶血，SS 瓊脂上不生長，能在含膽鹽培育基或麥康凱培育基上生長。在液體培育基中呈均勻渾濁生長者為光滑型菌株，沉淀生長為粗糙型菌株。本章練習(xí)題：不能用O:H 血清分型的細(xì)菌為A.腸產(chǎn)毒型大腸埃希