第十周生化實驗 影響酶活性的因素

1、第十周生化實驗 影響酶活性的因素第1頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一一、實驗目的觀察淀粉在水解過程中遇碘后溶液顏色的變化。觀察唾液淀粉酶在不同底物、溫度、pH、和激活劑、抑制劑存在下活性的變化情況。第2頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一二、實驗原理淀粉在唾液淀粉酶（含淀粉酶和少量麥芽糖酶）的作用下被逐步水解成單糖，水解的中間產(chǎn)物遇碘呈現(xiàn)不同的顏色：淀粉不同大小分子的糊精麥芽糖、葡萄糖藍色 紫色暗褐色紅色 不變色根據(jù)水解液和碘反應的顏色，可以判斷水解是否已完全，觀察底物、溫度、pH及激活劑與抑制劑對唾液淀粉酶活性的影響。第3頁，共15頁，2022年，

2、5月20日，19點1分，星期一三、試劑和器材 1. 試劑 新鮮唾液稀釋液、1%蔗糖溶液、Benedict試劑、 0.5%淀粉、0.5%淀粉溶液（含0.3%NaCl）、 1氯化鈉溶液、1硫酸銅溶液、碘液、 0.2 mol/L磷酸氫二鈉溶液、0.1 mol/L檸檬酸溶液 2. 器材 恒溫水浴鍋、4冰箱、電磁爐(沸水鍋) 紙杯、試管、試管架、錐形瓶，pH試紙第4頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一一、酶的特異性實驗目的：了解酶的特異性并掌握酶特異性的檢測方法和原理。實驗原理： 酶的特異性是指一種酶只能對一種或一類化合物（此類化合物通常具有相同的化學鍵）起作用，而不能對別的化合物起

3、作用。 本實驗以唾液淀粉酶對淀粉的作用為例，說明酶的特異性，淀粉酶只能催化淀粉水解，對蔗糖的水解無催化作用。淀粉和蔗糖都無還原性，但淀粉水解產(chǎn)物為葡萄糖，蔗糖水解產(chǎn)物為果糖和葡萄糖，均為還原性糖，糖類的醛基或酮基能與Benedict試劑反應，生成磚紅色的氧化亞銅沉淀。第5頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一 試管編號 試劑處理 #1 #2含0.3NaCl的淀粉溶液（mL）3 2% 蔗糖溶液（mL）3Benedict試劑（mL）22搖勻，沸水浴煮沸3min記錄觀察結(jié)果2、檢查試劑（取2只試管，按下表操作）1、唾液淀粉酶液的準備 實驗者用蒸餾水嗽口，除去食物殘渣。然后含一口蒸餾

4、水于口中，輕嗽一分鐘，吐入小燒杯中。將其稀釋一倍。操作步驟第6頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一3. 淀粉酶的專一性實驗 試管編號試劑處理#1 #2已稀釋的唾液溶液（mL）11含0.3NaCl的0.5%淀粉溶液（mL）3 2%蔗糖溶液（mL）3搖勻，置37水浴保溫15minBenedict試劑（mL）22搖勻，沸水浴煮沸2min記錄觀察結(jié)果（取2只試管，按下表操作）第7頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一二、pH對淀粉酶活性的影響實驗目的 了解pH對酶活性的影響及最適pH的定義。實驗原理 酶的催化活性與環(huán)境pH有密切關(guān)系，通常各種酶只在一定pH范圍內(nèi)才

5、具有活性，酶活性最高時的pH，稱為酶的最適pH，高于或低于此pH時酶的活性都逐漸降低。不同酶的最適pH不同。酶的最適pH不是一個特征性的物理常數(shù)，對于一個酶，其最適pH因緩沖液和底物的性質(zhì)不同而有差異。第8頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一操作步驟1. 取3個錐形瓶，按下表比例移取磷酸氫二鈉溶液和檸檬酸鈉溶液，制備pH為5.0、6.8、8.0的三種緩沖溶液。錐形瓶號0.2M磷酸氫二鈉（mL）0.1M檸檬酸（mL）緩沖液pH1235.157.729.724.852.280.285.06.88.0第9頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一2、另取3只干凈試管

6、，按下表操作。試管編號試劑處理#1#2#3pH5.0緩沖溶液（mL）2-pH6.8緩沖溶液（mL）-2-pH8.0緩沖溶液（mL）-2含0.3%NaCl的0.5%淀粉溶液（mL）111置37 水浴, 每隔1min逐管加入唾液稀釋液1 mL，充分搖勻保溫10min，到達保溫時間后，每隔1min依次取出立即加碘化鉀碘溶液/滴222記錄觀察結(jié)果第10頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一三、溫度對淀粉酶活性的影響實驗目的了解溫度對酶活性的影響及最適溫度的定義。實驗原理 對溫度敏感是酶的一個重要特性，酶作為生物催化劑也有溫度效應，提高溫度可以提高酶促反應速度，但另一方面又會加速酶蛋白

7、的變性速度，所以在較低的溫度范圍內(nèi)，酶反應速度隨溫度升高而增大，但是超過一定溫度后，反應速度反而下降。酶反應速度達到最大時的溫度稱為酶的最適溫度。酶的最適溫度不是一個常數(shù)，它與作用時間的長短有關(guān)系。第11頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一操作步驟1. 取3支試管，各加2mL 含0.3氯化鈉的0.5淀粉溶液。2. 另取3支試管，各加1mL淀粉酶液。3. 將此6支試管分為3組，每組中盛淀粉溶液與淀粉酶液的試管各 1支。4. 三組試管分別置入0、37與100的水浴中。5. 等5min后，將各組中的淀粉溶液倒入淀粉酶液中，繼續(xù)維持原溫度條件5min后，立即滴加2滴碘液，觀察溶液顏

8、色的變化。第12頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一四、激活劑與抑制劑對酶的影響實驗目的 了解激活劑和抑制劑對酶活力的影響。實驗原理 酶的活性受某些物質(zhì)的影響，能使酶活性增加的稱為激活劑，能使酶活性降低的稱為抑制劑。很少量的激活劑和抑制劑就會影響酶的活性，而且常具有特異性，但激活劑和抑制劑不是絕對的，濃度的改變可能使激活劑變成抑制劑。第13頁，共15頁，2022年，5月20日，19點1分，星期一試管編號試劑處理 #1#2#31 % NaCl溶液（mL）1_0.1%CuSO4溶液（mL）_1_蒸餾水（mL）_10.5%淀粉溶液（mL）333稀釋的唾液（mL）111 搖勻，放入37恒溫水浴保溫10min，取出，冷卻。 KI-I2溶液（mL）2滴2滴2滴記錄觀察結(jié)果（取3支試管，按下表加入各種試劑）操作步驟從1號試管中用玻棒取出1滴溶液，置于白磁板上用碘液檢查淀粉的水解程度。待1號試管內(nèi)的溶液遇碘不再變色后，立即取出