腦脈通對(duì)骨髓干細(xì)胞動(dòng)員保護(hù)大鼠腦缺血損傷的影響

1、腦脈通對(duì)骨髓干細(xì)胞發(fā)動(dòng)保護(hù)大鼠腦缺血損傷的影響1材料與方法1.1材料1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物1.1.2藥物與試劑1.1.3主要儀器1.2方法1.2.1實(shí)驗(yàn)分組大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為假手術(shù)組、模型組、腦脈通組、發(fā)動(dòng)組、腦脈通+發(fā)動(dòng)組(結(jié)合組)。假手術(shù)組10只大鼠，其余4組均為48只；后4組根據(jù)取材時(shí)間又分為2、3、7、14d組，每組大鼠12只。1.2.2用藥方案1.2.3模型制備參照改進(jìn)的Lnga法用線(xiàn)栓阻塞大鼠大腦中動(dòng)脈制備局灶性腦缺血?jiǎng)游锬Ｐ?A)6。10水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，待完全麻醉后，仰臥位固定大鼠，行頸前正中切口，左側(cè)鈍性別離頸總動(dòng)脈(A)；別離頸內(nèi)外動(dòng)脈，穿線(xiàn)備用，結(jié)扎翼顎動(dòng)脈，于頸

2、外動(dòng)脈近動(dòng)脈分叉處剪口，栓線(xiàn)穿入頸內(nèi)動(dòng)脈，緩慢推進(jìn)，直至感覺(jué)有阻力為止，穿線(xiàn)成功后縫合皮膚。假手術(shù)組除不穿入栓線(xiàn)外，其余操作一樣。手術(shù)過(guò)程中保持大鼠肛溫(37.00.5)，保持室溫(261)。術(shù)后注射青霉素鈉(1萬(wàn)U100g-1d-1)，以防感染。1.2.4取材與標(biāo)本處理1.3測(cè)定指標(biāo)1.3.1大鼠死亡率對(duì)術(shù)后清醒至取材時(shí)死亡和存活大鼠進(jìn)展計(jì)數(shù)，計(jì)算各組(包括2、3、7、14d4個(gè)時(shí)間點(diǎn))死亡大鼠只數(shù)與總體(造模后死亡與存活大鼠總只數(shù))的比率。大鼠死亡率=(死亡只數(shù)/死亡與存活只數(shù)總和)100%。1.3.2大鼠體重變化率分別于術(shù)后2d至取材時(shí)間在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)大鼠稱(chēng)重，采集數(shù)據(jù)的時(shí)間點(diǎn)數(shù)分別為2d

3、組(1個(gè))、3d(2個(gè))、7d(3個(gè))、14d(4個(gè))，計(jì)算公式為：體重下降率=(術(shù)前體重-術(shù)后體重)/術(shù)前體重100%，體重增長(zhǎng)率=(術(shù)后體重-術(shù)前體重)/術(shù)前體重100%。1.3.3外周血B計(jì)數(shù)抗凝血液20l用B稀釋液稀釋20倍，取20l入血細(xì)胞計(jì)數(shù)盤(pán)的計(jì)數(shù)室，靜置3in，待B下沉，在低倍鏡下計(jì)四角四個(gè)大方格的有核細(xì)胞，4格總和乘以50那么為每立方毫米的有核細(xì)胞計(jì)數(shù)。1.3.4外周血D34+細(xì)胞計(jì)數(shù)1.3.5腦組織D34表達(dá)測(cè)定神經(jīng)功能評(píng)測(cè)方法按文獻(xiàn)7從自發(fā)運(yùn)動(dòng)、輕癱實(shí)驗(yàn)、前肢運(yùn)動(dòng)功能檢測(cè)、加強(qiáng)運(yùn)動(dòng)功能檢測(cè)、痛覺(jué)、位置覺(jué)6個(gè)方面進(jìn)展，總分為18分，病癥越重，得分越少。神經(jīng)功能定量評(píng)測(cè)時(shí)間在

4、術(shù)后48h以及術(shù)后每周進(jìn)展。選擇術(shù)后48h神經(jīng)功能缺失在12分以下者可進(jìn)入下一階段觀察，12分以上者剔除。1.3.7腦組織含水量對(duì)切取的腦組織迅速用電子天平稱(chēng)重(準(zhǔn)確度為0.1g)，之后放入100枯燥箱中枯燥24h，再次稱(chēng)重。腦組織含水量=(腦濕重-腦干重)/腦濕重100，以%表示。1.3.8腦梗死面積切取的腦組織用2%TT染色，數(shù)碼相機(jī)拍照，應(yīng)用計(jì)算機(jī)圖像分析系統(tǒng)測(cè)定和計(jì)算腦組織梗死面積。以梗死面積占總腦片面積(%)的百分比表示。1.3.9腦組織病理觀察常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片，HE染色，200倍光鏡下觀察半暗帶、缺血中心區(qū)等神經(jīng)細(xì)胞病理變化。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、處理采用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件，對(duì)數(shù)據(jù)資料進(jìn)展正態(tài)分布檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布者采用單因素方差分析，不符合正態(tài)分布者進(jìn)展數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)化后比擬，結(jié)果以xs表示。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2結(jié)果2.1術(shù)后大鼠生存狀況觀察2.1.1一般狀況術(shù)中大鼠呼吸、體溫維持在正常生理范圍，無(wú)明顯活動(dòng)性出血。術(shù)后大鼠死亡出現(xiàn)兩個(gè)頂峰，于術(shù)后23d和7d；術(shù)后7d大鼠體重下降明顯，714d大鼠進(jìn)食、飲水、活動(dòng)及毛色光澤等明顯好轉(zhuǎn)，體重增加。2.1.2大鼠死亡率模型組大鼠死亡率(34.40%)較假手術(shù)組(10%)明顯增高(0.05)；與模型組比擬，發(fā)動(dòng)組死亡率(30.24%)無(wú)顯著升高；結(jié)合組大鼠死亡率(25.71%)較模型組和發(fā)

6、動(dòng)組及腦脈通組(28.57%)有下降趨勢(shì)，但無(wú)顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.05)。2.1.3大鼠體重變化率與假手術(shù)組比擬，模型組2、3和7d大鼠體重下降顯著，14d增長(zhǎng)減少(0.01)；與模型組比擬，腦脈通組和發(fā)動(dòng)組7d、結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)大鼠的體重下降減少，各組14d的增加顯著(P0.05，0.01)；結(jié)合組3和7d較腦脈通組體重下降減少，14d體重增加顯著(P0.01)，結(jié)合組7d的大鼠體重下降也較發(fā)動(dòng)組減少(P0.05，0.01)；模型組、發(fā)動(dòng)組7d大鼠體重下降率分別較其2和3d組明顯(P0.05，0.01)，見(jiàn)表1。表1各組大鼠體重變化率比擬(略)2.2各組大鼠外周血B計(jì)數(shù)的變化模型2、3d組大

7、鼠外周血B較假手術(shù)組顯著增多(P0.01)。與模型組比擬，腦脈通組、發(fā)動(dòng)組和結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)的B計(jì)數(shù)均顯著增多(P0.05，P0.01)。發(fā)動(dòng)組各時(shí)間點(diǎn)外周血B計(jì)數(shù)均較腦脈通組增加(P0.05，P0.01)。結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)較腦脈通組、2d和3d發(fā)動(dòng)組外周血B計(jì)數(shù)明顯增加(P0.05，P0.01)。模型組、發(fā)動(dòng)組和結(jié)合組3d的外周血B計(jì)數(shù)分別較其2d組增加，7d和14d較2d組減少明顯(P0.05，P0.01)；各組大鼠7d和14d的B計(jì)數(shù)均較其3d組減少明顯(P0.05)，表2。表2大鼠外周血B計(jì)數(shù)(109/L)及血液D34+細(xì)胞計(jì)數(shù)(略)2.3大鼠外周血D34+細(xì)胞計(jì)數(shù)變化假手術(shù)組大鼠血液中有

8、少量D34+細(xì)胞。模型2、3d組大鼠外周血D34+計(jì)數(shù)均較假手術(shù)組顯著增加(P0.05)；與模型組比擬，發(fā)動(dòng)組2、3和7d，結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)的大鼠外周血D34+細(xì)胞計(jì)數(shù)顯著增加(P0.05，P0.01)，以3d組的增加尤為顯著(P0.01)。發(fā)動(dòng)組各時(shí)間點(diǎn)外周血B計(jì)數(shù)均較腦脈通組增加(P0.05，P0.01)。結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)較腦脈通組、3和7及14d較發(fā)動(dòng)組外周血B計(jì)數(shù)明顯增加(P0.05，P0.01)。各組3d較其2d組增加，14d較其2d組減少，發(fā)動(dòng)組7d的外周血B計(jì)數(shù)也較其2d組減少(P0.05，P0.01)；各實(shí)驗(yàn)組7d較其3d組減少明顯(P0.05，P0.01)；與7d組比擬，發(fā)動(dòng)組和

9、結(jié)合組14d的B計(jì)數(shù)減少(P0.05)，見(jiàn)表2。2.4大鼠腦組織D34+表達(dá)變化假手術(shù)組腦組織中未檢測(cè)到D34+細(xì)胞表達(dá)。模型組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織D34+表達(dá)均較假手術(shù)組顯著升高(P0.01)。與模型組比擬，腦脈通、發(fā)動(dòng)組和結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織D34+表達(dá)均顯著增強(qiáng)(P0.01)。各發(fā)動(dòng)組大鼠腦組織表達(dá)均較腦脈通組顯著增強(qiáng)(P0.01)。各結(jié)合組大鼠腦組織D34+表達(dá)分別較腦脈通組和發(fā)動(dòng)組增強(qiáng)(P0.05，P0.01)。各實(shí)驗(yàn)組大鼠7d的腦組織D34+表達(dá)分別較其2和3d組增強(qiáng)，14d組較其2和3d組減弱(P0.05，P0.01)；各組14d的表達(dá)均較其7d組減弱(P0.01)，見(jiàn)表3。表

10、3各組大鼠腦組織D34+細(xì)胞表達(dá)比擬(略)2.5大鼠神經(jīng)功能評(píng)分變化各模型組大鼠神經(jīng)功能評(píng)分均較假手術(shù)組顯著降低，以7d組尤為顯著(P0.01)。與模型組比擬，腦脈通和結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)大鼠的神經(jīng)功能評(píng)分均明顯增高，發(fā)動(dòng)組7和14d的評(píng)分增加(P0.05，P0.01)。與腦脈通組比擬，發(fā)動(dòng)組2和3d大鼠神經(jīng)功能評(píng)分降低(P0.05)。結(jié)合組7和14d大鼠神經(jīng)功能評(píng)分分別較腦脈通組和發(fā)動(dòng)組增高，以14d組的增高尤為明顯(P0.05，P0.01)。各實(shí)驗(yàn)組大鼠7和14d的神經(jīng)功能評(píng)分分別較其2和3d組增加，腦脈通組和結(jié)合組3d也較其2d組增高(P0.05，P0.01)；各實(shí)驗(yàn)組14d大鼠較其7d組的神

11、經(jīng)評(píng)分增加顯著(P0.01)，見(jiàn)表3。2.6大鼠腦組織含水量變化各模型組大鼠腦組織含水量均較假手術(shù)組顯著升高(P0.01)。與模型組比擬，腦脈通和結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦組織含水量降低，發(fā)動(dòng)組7d、14d的腦含水量明顯降低(P0.05，P0.01)。發(fā)動(dòng)組3d的腦含水量較腦脈通組增多(P0.05)。結(jié)合組14d大鼠腦組織含水量較腦脈通組和發(fā)動(dòng)組均明顯降低(P0.01)。各實(shí)驗(yàn)組大鼠7d腦含水量分別較其2d和3d組增加(P0.01)、14d組較7d組的降低顯著(P0.01)，見(jiàn)表4。表4各組大鼠腦組織含水量和腦梗死面積變化比擬(略)2.7大鼠腦梗死面積變化各模型組大鼠腦梗死面積均較假手術(shù)組顯著增大(P0.01)；與模型組比擬，腦脈通組和結(jié)合組各時(shí)間點(diǎn)的腦梗死面積減小，發(fā)動(dòng)7d和14d組減小明顯(P0.05，P0.01)。發(fā)動(dòng)組和腦脈通組比擬無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)合組7d和14d大鼠鬧梗死面積較腦脈通組和發(fā)動(dòng)組減小(P0.05，P0.01)。模型組和腦脈通組7d的腦梗死面積分別較其2d和3d組增大(P0.01)，結(jié)合組14d較其2d和3d組減小(P0.01)；模型組、發(fā)動(dòng)組和結(jié)合組14d的腦梗死面積分別較其7d減小(P0.05，P0.01)，見(jiàn)表4。2.8大鼠腦組織病理觀察HE染色光鏡觀察，各模