中文cba實驗步驟

1、CBATM(多重液相蛋白定量技術)操作流程以Th1/Th2/Th17 細胞因子檢測試劑盒(貨號:560484)為例試劑盒組分試驗流程總覽配套試劑除 BD CBA 人 Th1/Th2/Th17 細胞因子檢測試劑盒提供的試劑外，還需要以下 CBATM(多重液相蛋白定量技術)操作流程以Th1/Th2/Th17 細胞因子檢測試劑盒(貨號:560484)為例試劑盒組分試驗流程總覽配套試劑除 BD CBA 人 Th1/Th2/Th17 細胞因子檢測試劑盒提供的試劑外，還需要以下 步描所需時1Th1/Th2/Th17 細胞因子標15分2混合 Th1/Th2/Th17 細胞因子捕10分3捕獲微球、樣本、檢測抗

2、體混合后共3小4明詳見15分5捕獲微球/樣本/檢測抗體復合15分630s/樣7數據分析（FCAP 10分標試容1瓶0.81瓶0.81瓶0.8 1瓶0.8HumanTNFCapture1瓶0.81瓶0.81瓶0.8BHuman Th1/Th2/Th17 PE Detection 1瓶4.0C標準Human Th1/Th2/Th17 Cytokine 2 瓶, 0.2 mL 凍D儀器調校微Cytometer Setup 1瓶1.5itiveControl1管0.51管0.5F洗Wash1G稀釋Assay1H增強Serum Enhancement 1及大于 680 nm 發(fā)射光的流式細胞儀。下表列舉

3、了部分可用于 CBA 檢測的流式1275 mm BD FalconTM流式上樣管或同類產15 及大于 680 nm 發(fā)射光的流式細胞儀。下表列舉了部分可用于 CBA 檢測的流式1275 mm BD FalconTM流式上樣管或同類產15 ml：FCAP (PC機版本：641488 / MacBD CalibriteTM 3色微球（BD CalibriteTM APC 微球（貨號：340487）（雙激光BD FACSCalibur 機器使用實驗操作細胞因子標準將一瓶凍干的細胞因子標準品小球轉移至15ml錐形離心管中， 標記為最高濃度標準品（5000pg/ml；用2ml Assay Diluent

4、 稀釋標準品，室溫平衡至少15分鐘取9支12x75mm流式管，分別標記梯度稀釋倍數每管加入300l Assay 從最高濃度標準品開始逐個加入300l倍比稀釋液，梯度稀釋標準品，如下圖所示：（從最高度標準品管取300l溶液至1：2管，吹打混勻，隨后從1：2管取300l溶液至1：4管吹打混儀器型參分群參BDFACSVerseflowCBABDAccuriC6flowBD FACSArrayTM BDFACSCantoIIflowBDLSRFortessaflowBDFACSAriaIIIcellBD FACSCalibur flow cytometer（單激光BD FACSCalibur flow

5、 cytometer（雙激光此類推，直至1：256管最后取1支12x75mm流式上樣管中加入300l Assay Diluent指控管（0pg此類推，直至1：256管最后取1支12x75mm流式上樣管中加入300l Assay Diluent指控管（0pg/ml2. 混合細胞因子捕獲混合微確定實驗樣本數（含所有標準品對照，共計18管對照及檢測樣本，如8個待測樣本，9個標準品，1混合前每種捕獲微球需vertex充分渦旋5-15秒（足，建議每吸取一種微球之前充分混勻此微球溶液按照10l/樣本吸取適量的捕獲微球，如樣本數為18，則每種細胞因子捕獲微球的量為將所有微球混合于一支流式管中，標記為“混合微

6、球”充分渦旋混勻重懸微或血漿，必須做此步驟。其他類型樣本，此步驟可選將混合好的捕獲微球室溫200g，離心5分鐘吸取上清，加入與步驟1）中“混合微球”相同增強液，渦旋混勻室溫避光孵育30分鐘（隨后直接作為“混合微球”與樣本共孵育3. 樣本孵充分渦旋重懸好的“混合微球”，每個實驗管加入標準品管中每管加入50l樣本管中每管加入50l待測樣所有實驗管中加入50l PE室溫避光孵育3小時4. 上機檢每管加入1ml3. 樣本孵充分渦旋重懸好的“混合微球”，每個實驗管加入標準品管中每管加入50l樣本管中每管加入50l待測樣所有實驗管中加入50l PE室溫避光孵育3小時4. 上機檢每管加入1ml 吸去或輕柔倒掉上清液，每管加入300