芳酸及其醛類藥物分析演示文稿

1、芳酸及其醛類藥物分析演示文稿第一頁，共六十八頁。優(yōu)選芳酸及其醛類藥物分析第二頁，共六十八頁。什么是芳酸？苯環(huán)羧基其他取代基分類：苯甲酸類 水楊酸類 其他芳酸及其酯類第三頁，共六十八頁。第一節(jié) 典型藥物分類與理化性質(zhì) （一）典型藥物結(jié)構(gòu)苯甲酸及其鈉鹽一、苯甲酸類酸性（弱堿性）紫外吸收第四頁，共六十八頁。丙磺舒酸性紫外吸收S元素第五頁，共六十八頁。甲芬那酸第六頁，共六十八頁。（二）主要理化性質(zhì) 1. 溶解性: 固體，有一定熔點。 除鈉鹽溶于水，其余不溶。 2. UV和IR光譜特性： 3.分解反應(yīng)特性：苯甲酸鈉分解為苯甲酸 丙磺舒分解為SO2 4. 酸性：游離的羧基 第七頁，共六十八頁。 二、水楊酸

2、類 （一）典型藥物結(jié)構(gòu)水楊酸（salycylic acid，SA）結(jié)構(gòu)羧基酚OH性質(zhì)酸性FeCl3反應(yīng)應(yīng)用含量測定鑒別第八頁，共六十八頁。阿司匹林（Aspirin,ASA）結(jié)構(gòu)： 羧基酯鍵性質(zhì)： 酸性水解應(yīng)用： 含量測定 （酸堿中和）鑒別、檢查第九頁，共六十八頁。對氨基水楊酸鈉（sodium aminosalicylate，PAS-Na)結(jié)構(gòu)： 芳伯氨基酚OH性質(zhì)：重氮化偶合應(yīng)用： 含量測定FeCl3反應(yīng)鑒別第十頁，共六十八頁。雙水楊酯（salsalate)第十一頁，共六十八頁。貝諾酯（benorilate)第十二頁，共六十八頁。 1.酸性：具-COOH。酸性受苯環(huán)、COOH和其 它取代基的相

3、互影響。 取代基為吸e基，如X，NO2，OH時， 酸性; 為供e基，如CH3,NH2時，酸性 取代基位置：鄰位OH取代酸性強，能與鄰 位COOH形成分子內(nèi)氫鍵（二）主要理化性質(zhì)水楊酸 阿司匹林 苯甲酸 HCl 芳酸 H2CO3 苯酚第十三頁，共六十八頁。2. 溶解性: 均為固體，有一定熔點。除鈉鹽溶于水，其余不溶。3. UV和IR光譜特性：分子結(jié)構(gòu)中具有苯環(huán),有UV和IR特征吸收。4. 芳伯氨基和酚羥基特性：5. 水解特性：ASA、雙水楊酯及其制劑應(yīng)檢查水楊酸,對氨基水楊酸鈉和貝諾酯檢查間氨基酚和對氨基酚。第十四頁，共六十八頁。三、其他芳酸類 (一)典型藥物結(jié)構(gòu)布洛芬（ibuprofen）第十

4、五頁，共六十八頁。氯貝丁酯（clofibrate）第十六頁，共六十八頁。 (二)主要理化性質(zhì) 1.溶解性：氯貝丁酯為液體；布洛芬為固體， 有一定熔點；水中不溶，有機溶劑中易溶 2.UV和IR特征吸收光譜：苯環(huán) 3.水解：氯貝丁酯具酯鍵 4.酸性：布洛芬第十七頁，共六十八頁。 一、與鐵鹽反應(yīng) 1. 含有酚羥基藥物可與FeCl3反應(yīng)；能與FeCl3反應(yīng) 不一定含酚羥基. 第二節(jié) 鑒別試驗Ar-OH + FeCl3紫堇色配位化合物pH46第十八頁，共六十八頁。SAAspirin 水解SAFeCl3紫堇色 PAS-NaFeCl3紫紅色中性或弱酸性紫堇色FeCl3第十九頁，共六十八頁。赭色3.丙磺舒2.

5、苯甲酸（中性或堿性水溶液） FeCl3NaOH鈉鹽FeCl3米黃色4.氯貝丁酯堿水解鹽酸羥胺羥肟酸鹽羥肟酸鐵弱酸條件紫色FeCl3第二十頁，共六十八頁。 二、重氮化-偶合反應(yīng) 含有芳伯胺基或潛在芳伯胺基的藥物均可反應(yīng)。-萘酚橙黃猩紅 1. 直接反應(yīng) 對氨基水楊酸鈉 2. 水解后反應(yīng) 貝諾酯具有潛在芳伯氨基 第二十一頁，共六十八頁。三、水解反應(yīng)1.AspirinNa2CO3SA -NaCH3COONaHSACH3COOHmp:1561612.雙水楊酯堿水解酸化SAmp：158溶于醋酸銨試液第二十二頁，共六十八頁。 1. 苯甲酸鹽加熱分解生成苯甲酸升華物 2. 丙磺舒與NaOH熔融分解成Na2SO

6、3, 經(jīng)硝酸氧化成Na2SO4 3. 丙磺舒高溫加熱分解，生成SO2氣體，有臭味四、分解產(chǎn)物反應(yīng)(SO42-的反應(yīng)）第二十三頁，共六十八頁。 1. 測定max ；min 例：布洛芬用0.4%NaOH溶液制備0.25mg/ml； max 265nm, 273nm; min245nm, 271nm。 2. 在max 處測定一定濃度供試液的吸收度A 例：羥苯乙酯，5g/ml max =295nm; A=0.48 五、紫外吸收光譜法第二十四頁，共六十八頁。 3. 在max 處測定供試液的百分吸收系數(shù)。 例：貝諾酯在max=240nm; = 730760 4. 在規(guī)定的波長測定吸收度比值 例：二氟尼柳

7、20g/ml; A251/A315 = 4.24.6 第二十五頁，共六十八頁。六、紅外吸收光譜法水楊酸的紅外吸收圖譜37002900cm-1N-H、 O-H1660cm-1C=O1610,15701480,1440C=C775cm-1Ar-H第二十六頁，共六十八頁。37002900cm-1N-H、 O-H1640cm-1N-H1580cm-11500cm-1C=C1300cm-1C-N1188cm-1C-O對氨基水楊酸鈉的紅外吸收圖譜第二十七頁，共六十八頁。第三節(jié) 特殊雜質(zhì)檢查一、 Aspirin中特殊雜質(zhì)的檢查 1.溶液的澄清度：主要檢查Na2CO3中不溶物 雜質(zhì)：有苯酚、醋酸苯酯、水楊酸苯

8、酯等Aspirin可溶于Na2CO3 ，而雜質(zhì)不溶由一定量的Aspirin在碳酸鈉試液中應(yīng)溶解澄清來加以控制酸性：芳酸 碳酸 酚第二十八頁，共六十八頁。游離水楊酸檢查： SA：具酚-OH， 可與Fe3+呈色 Aspirin：無酚-OH，不與Fe3+呈色 比色法適用：原料藥、片劑、腸溶片 HPLC適用：膠囊、泡騰片、栓劑3. 易炭化物檢查：檢查Aspirin中能被硫酸炭化顯色的低分子有機雜質(zhì)。采用與標(biāo)準(zhǔn)比色液比色的方法檢查。比色法第二十九頁，共六十八頁。二、對氨基水楊酸鈉中特殊雜質(zhì)的檢查方法 主要檢查成品藥物中可能殘留的間氨基酚。間氨基 酚易氧化呈色，而且有毒性，因此要嚴(yán)格控制。 雙相滴定法：利

9、用間氨基酚溶于乙醚，呈堿 性，樣品用乙醚提取, HCl 滴 定,V0.3ml HPLC （USP）：內(nèi)標(biāo)法，以磺胺作內(nèi)標(biāo)第三十頁，共六十八頁。三、氯貝丁酯中特殊雜質(zhì)的檢查主要檢查成品藥物中殘留的對氯酚原料和揮發(fā)性雜質(zhì)GCHPLC：以4-乙氧基酚作內(nèi)標(biāo)揮發(fā)性雜質(zhì)的檢查方法 ：GC 色譜條件同對氯酚的檢查1. 對氯酚檢查第三十一頁，共六十八頁。 一、酸堿滴定法（以Aspirin為例） 原理：藥物具-COOH；可用堿直接滴定第四節(jié) 含量測定（一）直接滴定法 ChP（2005版）1 ： 1第三十二頁，共六十八頁。條件：在中性乙醇中 以酚酞作指示劑 所含SA超過限量時，不宜直接滴定 3. 應(yīng)用：多國藥典

10、用于阿司匹林、雙水楊酯、苯甲酸、丙磺舒、布洛芬測定；USP和BP還用于甲芬那酸的測定。第三十三頁，共六十八頁。（二）水解后剩余滴定法 USP（29版）1.原理：2.方法：供試品1.5g0.5mol/LNaOH50.0ml煮沸10放冷酚酞0.25mol/LH2SO4(V)空白 (V0)定、過量剩余第三十四頁，共六十八頁。3.討論：空白試驗的目的 SA超過限量時也不適用4.計算：T的計算 含量的計算第三十五頁，共六十八頁。I 份NaOH 供試品I 份NaOH 空白VVOVo-V相當(dāng)于Asipirin消耗NaOH的ml數(shù)剩余第三十六頁，共六十八頁。（三）兩步滴定法用于：阿司匹林片/腸溶片的含量測定1

11、.原理：片劑中加穩(wěn)定劑：酒石酸/枸櫞酸 Aspirin SA+HAc水解酸性有干擾，所以采用兩步滴定法第一步中和Aspirin + NaOH鈉鹽 + H2O水解產(chǎn)物SA + NaOHSA-Na + H2O酸性穩(wěn)定劑+ NaOH中性鹽第二步水 解與測定第三十七頁，共六十八頁。2.方法第一步： 中和供試品片粉適量中性乙醇20ml酚酞NaOH（0.1mol/L)滴定至粉紅色第二步：水解與測定中和后的供試液0.1mol/LNaOH40ml水浴150.05mol/L H2SO4（V）空白（V0）第三十八頁，共六十八頁。3.討論 適用于阿司匹林片、腸溶片 SA超過限量時也適用4.計算第三十九頁，共六十八頁

12、。 第一步：中和酸性雜質(zhì)（四） 氯貝丁酯含量測定第二步：水解與測定第四十頁，共六十八頁。二、亞硝酸鈉滴定法原理：對氨基水楊酸鈉具芳伯氨基,在HCl中與 NaNO2發(fā)生重氮化反應(yīng)Ar-NH2 + NaNO2 + 2HClAr-N2Cl + NaCl + 2H2O此法在下章重點討論第四十一頁，共六十八頁。三、雙相滴定法如苯甲酸鈉的含量測定：不溶于水，終點pH突躍不明顯，不易觀察。易溶于有機溶劑易溶于水堿性在水相和有機相中滴定1.原理第四十二頁，共六十八頁。2.方法溶劑：水乙醚指示劑：甲基橙滴定液：0.5mol/L HCl 水相 乙醚相滴定前： 苯甲酸鈉甲基橙黃色滴定中：苯甲酸鈉甲基橙NaCl苯甲酸

13、黃色終點：甲基橙稍過量HClNaCl苯甲酸橙紅色第四十三頁，共六十八頁。分取乙醚層，5ml 水洗滌，洗液并入水層，加乙醚20ml，繼續(xù)用HCl滴定至水層顯持續(xù)的橙紅色原因：將溶于乙醚中的少量苯甲酸鈉提取至水中第四十四頁，共六十八頁。 （一）直接紫外分光光度法 貝諾酯的測定：四、紫外分光光度法原料藥：對照品比較法片 劑：吸收系數(shù)法第四十五頁，共六十八頁。（二）離子交換-紫外分光光度法 方法：可采用強堿性陰離子交換樹脂吸附酸性雜 質(zhì)后，在甲醇溶液中，226nm波長處，采 用對照品比較法測定含量。氯貝丁酯的測定原理：氯貝丁酯為酯結(jié)構(gòu)，不能電離 對-氯酚、對-氯苯氧異丁酸等可酸性解離酸性雜質(zhì)對-氯酚等

14、也有吸收，干擾測定。第四十六頁，共六十八頁。（三）柱分配色譜-紫外分光光度法USP(29)采用此法同時測定Aspirin膠囊中 Aspirin和SASA的限量測定 色譜柱的制備硅藻土-磷酸 玻璃棉硅藻土，F(xiàn)eCl3-尿素第四十七頁，共六十八頁。供試液：CHCl3洗脫液1：CHCl3硅藻土，F(xiàn)eCl3-尿素 玻璃棉1:Aspirin先洗脫2:SA后洗脫硅藻土-磷酸洗脫液2：冰HAc-乙醚SA的限量測定洗脫液3： CHCl3第四十八頁，共六十八頁。討論：SA與FeCl3-尿素生成紫色水楊酸鐵配位化合物，保留于硅藻土色譜柱上用CHCl3洗脫時，高濃度尿素使配位化合物移動較慢，Asipirin先洗脫出

15、以冰醋酸的乙醚溶液洗脫時，紫色配位化合物解離，SA游離出來，繼而被CHCl3洗脫 max=306nm ， A供A標(biāo)第四十九頁，共六十八頁。 玻璃棉供試品液：CHCl3-HCl洗脫液1： CHCl3 中/堿性雜質(zhì)先洗脫max=280nm，Aspirin(mg)=C(Au/As)硅藻土-NaHCO3洗脫液2：冰HAc-CHCl3 10ml洗脫液3：冰HAc-CHCl3 85ml2.Aspirin的含量測定Aspirin后洗脫第五十頁，共六十八頁。在硅藻土-NaHCO3色譜柱中，Aspirin及SA成鈉鹽保留于柱上，先用CHCl3除去中性或堿性雜質(zhì)，再用醋酸酸化，使Aspirin游離，以CHCl3洗

16、脫后測定其含量。第五十一頁，共六十八頁。 ChP(2005)：阿司匹林腸溶膠囊、泡騰片、栓劑等含量測定采用此法 USP（29）ASA片、對氨基水楊酸鈉、甲芬那酸、布洛芬、丙磺舒等及其制劑，采用此法五、HPLC第五十二頁，共六十八頁。阿司匹林腸溶膠囊的含量測定色譜條件：色譜柱C18；流動相為1冰醋酸-甲醇 (50:50);檢測波長280nm系統(tǒng)適用性試驗：n1500; Aspirin與水楊酸鈉 的R 1.5計算：第五十三頁，共六十八頁。 一、血清中Aspirin和SA的HPLC 色譜條件：色譜柱為ODS-C18(150mm 4.6mm, 5m)流動相為甲醇-水-正丁醇-磷酸(300 :200 :

17、10：0.05)檢測波長為237nm；內(nèi)標(biāo)物為苯甲酸 血清樣品預(yù)處理 血清100l + HClO450l + 不同濃度Aspirin和SA + 內(nèi)標(biāo)液 渦旋混合2min 離心5min 取上清液20 l進(jìn)樣。第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析第五十四頁，共六十八頁。 回歸方程：以峰高比（H標(biāo)/H內(nèi)）對濃度回歸 Aspirin的回歸方程：Y =5.810-3 +5.2910-2X r= 0.9996 SA的回歸方程：Y = 6.010-3 + 8.3310-2X r = 0.9981 Aspirin和SA的線性范圍分別為：120g/ml; 230g/ml 回收率：空白血清 + 五種不同濃度測定， Aspirin

18、為96.0%106.0%; SA為92.0%119.5%;（五種不同濃度均應(yīng)在線性范圍內(nèi)）第五十五頁，共六十八頁。色譜條件：色譜柱為LiChrospher100RP(125mm4mm, 5m) 流動相為25%乙腈溶液-醋酸緩沖溶液梯度洗脫。 檢測波長為254nm；內(nèi)標(biāo)物為依他尼酸。尿樣品預(yù)處理：C8固相萃取柱，100mg填料/ml用甲醇1.0ml,然后 用0.5ml蒸餾水活化。 2.0ml尿樣 + 內(nèi)標(biāo)300l(10g/ml) 上柱 1.0ml水洗 脫生物雜質(zhì) 再用甲醇0.5ml洗脫保留在柱上的丙磺舒和內(nèi) 標(biāo)。洗脫液0.45m浸濾膜濾過，取5l直接進(jìn)樣分析。 二、尿中丙磺舒的固相萃取凈化-HP

19、LC (運動員違禁藥物)第五十六頁，共六十八頁。線性關(guān)系和回收率：取空白尿樣2.0ml +不同濃度丙磺舒+內(nèi)標(biāo)液，按上述方法分析(濃度范圍為0.1g/ml100g/ml) A丙/A內(nèi)對C丙回歸。回收率：丙磺舒為100%3%(n=14)；內(nèi)標(biāo)為101%3%(n=12)；人尿樣測定：丙磺舒(單劑量500mg)尿排泄藥-時 曲線(見P154)第五十七頁，共六十八頁。 三、HPLC測定人血漿中布洛芬含量 色譜條件： 色譜柱為Shim-packCLC-ODS(150mm6mm, 10m) 預(yù)柱為YWG-C18；流動相為甲醇-20mol/L磷酸二氫鉀緩 沖溶液(70:30, pH=4.0); 流速為1.0

20、ml/min; 檢測波長為221nm；內(nèi)標(biāo)物為肉桂酸。 樣品預(yù)處理：取肝素抗凝血漿0。24ml+內(nèi)標(biāo)液+甲醇0.5ml,振蕩混勻，離心(1000r/min)15min,取上清液10 l直接進(jìn)樣分析。布洛芬和肉桂酸t(yī)R為5.15和2.85min。第五十八頁，共六十八頁?；貧w方程：以對照品與內(nèi)標(biāo)的峰高比對濃度回歸，其回歸方程為：Y = 4.05 10-2C 2.0 10-3, r = 0.9999?；厥章蕼y定：空白血漿 + 布洛芬對照品高、中、低三種濃度，按樣品處理項下測定，測得平均回收率為99.2 1.6%。精密度：日內(nèi)精密度為RSD1.8%；日間精密度為2.8%。第五十九頁，共六十八頁。試驗結(jié)果：1.血漿用甲醇除蛋白后，直接進(jìn)樣，經(jīng)預(yù)柱凈化，再進(jìn)分析柱，回收率高，分析速度快(6min完成)，分離效果好。2.口服一次后Tmax = 30min90min；體內(nèi)維持4h6h。與文獻(xiàn)報道的結(jié)果一致。3.本法可用于臨床治療藥物濃度檢測和藥代動力學(xué)研究。 人血漿樣品測定