蝦青素分析測定方法的研究

1、蝦青素剖析測定方法的研究科學(xué)技術(shù)與應(yīng)用羅玉芳約3713字【綱要】選擇分光光度法及高效液相色譜法對(duì)測定蝦青素的剖析條件進(jìn)行研究進(jìn)而得出最正確的測定條件。用分光光度法和高效液相色譜法測定蝦青素標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程的R2都超出了0.99。用分光光度法測定蝦青素回收率范圍為99.3-101相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差RSD值為用液相色譜法測定蝦青素回收率范圍為100-102相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差RSD為。這些值都在定量分析所要求的閾值范圍內(nèi)能夠用于定量剖析?！局攸c(diǎn)詞】分光光度法高效液相色譜法蝦青素AbstractChoicetwobasedonthespectrophotometryandhighperformanceliqui

2、dchromatographyHPLCweredevelopedfordeterminationtheastaxanthin.Andtheoptimumconditionswasinvestigatedindetail.Thetotalamountofastaxanthinwasmeasuredbyspectrophotometrytherecoverieswereintherangeof99.3-101andRSDweredeterminedbyHPLCandtherecoverieswereintherangeof100-102RSDwereintherangeof0.62-1.4.All

3、thesevalueswerewithintherangeofpermissivethresholdvalueonquantitativeanalysiswhichshowedthatitsfeasibleformeasuringthecontentofastaxanthinbythesetwomethods.Keywords:spectrophotometryHPLCastaxanthin從動(dòng)植物及菌類中提取蝦青素當(dāng)前還處于實(shí)驗(yàn)研究的基礎(chǔ)階段要實(shí)現(xiàn)家產(chǎn)化生產(chǎn)蝦青素還一定對(duì)其提取工藝進(jìn)行寬泛深入的研究。要展開這方面的研究一定成立起迅速、高效、簡易的蝦青素剖析方法。蝦青素是一種類胡蘿卜素1分光光

4、度法和高效液相色譜法是常用的兩種類胡蘿卜素剖析方法23這兩種方法各有特點(diǎn)類胡蘿卜素分子因其分子構(gòu)造中的共軛雙鍵系統(tǒng)及離域化的電子在可見光區(qū)表現(xiàn)出強(qiáng)汲取帶且每種類胡蘿卜素分子的最大汲取峰地點(diǎn)與紫外可見光光譜的精美構(gòu)造都是擁有特色性的。因?yàn)轭惡}卜素分子的這類光汲取性質(zhì)溶液中的類胡蘿卜素一般聽從Beer-Lambert定律因此經(jīng)過分光光度法可實(shí)現(xiàn)對(duì)其精準(zhǔn)的定量剖析4高效液相色譜法擁有分離速度快在線檢測如UV檢測器敏捷度高等長處是美國NFIA美國飼料協(xié)會(huì)規(guī)定的測定方法。本工作旨在經(jīng)過對(duì)分光光度法和液相色譜法測定蝦青素的研究進(jìn)而成立迅速、有效、準(zhǔn)確的測定蝦殼中蝦青素的方法。一、資料和方法一資料1儀器7

5、21型分光光度計(jì)上海精科食品廠高效液相色譜儀日本島津企業(yè)18色譜柱250mm4.6mm迪馬企業(yè)恒溫箱202-1型上海市上?？h試驗(yàn)儀器廠JA2003上皿電子天平上海天平儀器廠2試劑蝦青素標(biāo)準(zhǔn)品剖析純美國sigma企業(yè)乙腈色譜純甲醇、無水乙醇、二氯甲烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚等均為剖析純。二實(shí)驗(yàn)方法1分光光度法正確稱取必定量的蝦青素純樣品多份分別用乙醇有機(jī)溶劑溶解后各自配制成1.0g/mL、2.0g/mL、3.0g/mL、4.0g/mL、5.0g/mL、6.0g/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液用721型分光光度計(jì)測定不一樣波長下的吸光度。在最大波長下以試劑空白調(diào)零測其吸光度。以蝦青素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)對(duì)應(yīng)的吸

6、光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2高效液相色譜法1.色譜工作條件色譜柱C18250mm4.6mm。流動(dòng)相乙醇甲醇二氯甲烷751510V/V流速為1.0mL/min。柱溫室溫。檢測波長為480nm進(jìn)樣量20L。2.標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制稱取必定量的蝦青素標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇配制濃度分別為1.0g/mL、2.0g/mL、4.0g/mL、6.0g/mL、8.0g/mL、10.0g/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液分別取20L進(jìn)樣依據(jù)峰面積與相應(yīng)的濃度進(jìn)行線性回歸繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。二、結(jié)果與剖析一分光光度法剖析蝦青素1蝦青素標(biāo)準(zhǔn)樣品在乙醇溶劑中的最大汲取波長我們將蝦青素標(biāo)準(zhǔn)樣品溶解在乙醇溶劑中在400nm至700nm范圍內(nèi)測其吸光度結(jié)果如

7、圖1。從圖中能夠看出蝦青素標(biāo)準(zhǔn)樣品在乙醇溶劑中的最大汲取波長為474nm。圖片2蝦青素標(biāo)準(zhǔn)樣品在乙醇有機(jī)溶劑中的標(biāo)準(zhǔn)曲線正確稱取必定量的蝦青素純樣品多份分別用乙醇有機(jī)溶劑溶解后以試劑空白調(diào)零用721型分光光度計(jì)測其吸光度。以蝦青素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為橫坐標(biāo)對(duì)應(yīng)的吸光值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果見圖2。條件測定波長474nm圖片從圖2中能夠看出在乙醇溶劑中蝦青素濃度與其吸光度擁有優(yōu)秀的線性關(guān)系有關(guān)系數(shù)R2大于0.999經(jīng)過測得的吸光度按其線性回歸方程可計(jì)算蝦青素的濃度。3回收率和精美度試驗(yàn)精美稱取蝦青素10.00mg置100mL容量瓶中分別加入濃度為100g/mL蝦青素標(biāo)準(zhǔn)貯備液2mL、3mL、4m

8、L用乙醇溶解并稀釋至刻度。用新成立的方法對(duì)其進(jìn)行剖析計(jì)算回收率及精美度值實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示。圖片條件同圖2從表1能夠看出蝦青素的回收率范圍為99.3-101相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差RSD值為。二液相色譜法剖析蝦青素1檢測波長的選擇因?yàn)镠PLC的檢測器是紫外檢測器綜合考慮乙醇有機(jī)提取溶劑的最大吸收值及敏捷度最后選擇紫外檢測波長為480nm。2色譜柱種類的選擇利用高效液相色譜法測定色素的國家標(biāo)準(zhǔn)大部分都是使用C8或C18為填料的反相液相色譜法依據(jù)本實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有條件采納了填料為C18的色譜柱來進(jìn)行蝦青素的液相色譜測定試驗(yàn)。3流動(dòng)相及其余色譜條件的選擇甲醇、乙腈、四氫呋喃、水、甲醇、二氯甲烷、丙酮等是高效液相色譜法

9、中最常用的流動(dòng)相。在反相色譜中極性大的組分因K值較小先流優(yōu)秀譜柱極性較小的組分后流出。流動(dòng)相中有機(jī)溶劑的比率增添流動(dòng)相極性減小洗脫力加強(qiáng)。用水-甲醇作為流動(dòng)相明顯比較經(jīng)濟(jì)但我們?cè)囼?yàn)的結(jié)果是出峰時(shí)間較后且峰形較胖因此本實(shí)驗(yàn)最后采納乙腈甲醇二氯甲烷751510體積比作為流動(dòng)相超聲波脫氣進(jìn)樣前樣品用0.45m微孔濾膜過濾。流速1mL/min檢測波長為480nm進(jìn)樣量20L柱溫為室溫。4標(biāo)準(zhǔn)工作曲線及色譜圖圖片如上配制系列標(biāo)準(zhǔn)溶液按給定色譜條件試驗(yàn)以峰面積y對(duì)各組分濃度x求回歸方程并繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線實(shí)驗(yàn)結(jié)果見圖3。由圖3可知蝦青素濃度在g/mL時(shí)其濃度與峰面積成一直線關(guān)系。在此濃度范圍內(nèi)其標(biāo)準(zhǔn)曲線的回

10、歸方程為y139580 x3470此中y表示HPLC峰面積x表示游離蝦青素濃度g/mL。有關(guān)系數(shù)R0.9999線性有關(guān)性很好。圖4為蝦青素標(biāo)準(zhǔn)樣品的高效液相色譜圖。由圖中可知出峰時(shí)間為7.432min左右的峰為游離蝦青素。圖片5回收率和精美度測定精美稱取蝦青素10.00mg置100mL容量瓶中分別加入濃度為100g/mL蝦青素標(biāo)準(zhǔn)貯備液5mL、6mL用流動(dòng)相溶解并稀釋至刻度。用新成立的方法對(duì)其進(jìn)行定量剖析每個(gè)樣品平行做3個(gè)計(jì)算回收率及精美度值實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2所示。圖片條件同圖4.從表2中能夠看出蝦青素的回收率為100-102蝦青素測定的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差RSD為。三、結(jié)論利用蝦青素不溶于水易溶于有機(jī)溶

11、劑的特色將蝦青素標(biāo)準(zhǔn)樣品經(jīng)有機(jī)溶劑辦理后利用分光光度法和高效液相色譜法對(duì)其蝦青素含量進(jìn)行測定其標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程的R2都超出了0.999線性優(yōu)秀能用于定量剖析測定。用分光光度法測定蝦青素回收率范圍為99.3-101相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差RSD值為用液相色譜法測定蝦青素回收率范圍為100-102相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤差RSD為。這些值都在定量分析所同意的閾值范圍內(nèi)5說明用分光光度法和高效液相色譜法均可用來正確地測定蝦青素。參照文件1李浩明高藍(lán)蝦青素的構(gòu)造、功能與應(yīng)用精美化工2003200135-402應(yīng)國清王曉艷沈寅初高效液相色譜法剖析檢測蝦青素食品與發(fā)酵工業(yè)2001271143-443J.J.ScdmakD.K.WeerasingheS.fromPhaffiarhodozyma.BioteehnolTech19904:107-112.惠伯棣類胡蘿卜素化學(xué)及生物化學(xué)北京中