益母草中益母草堿的HPLC檢測

1、益母草中益母草堿的HPLC檢測【關(guān)鍵詞】益母草；益母草堿；高效液相色譜法益母草為唇形科植物益母草(LenurusheterphyllusSeet)的枯燥地上局部，以花蕾期的地上局部的干品或鮮品入藥，性味苦、辛、微寒，歸肝、心包經(jīng)，具有活血調(diào)經(jīng)、化瘀生新、收縮子宮之成效，主治月經(jīng)不調(diào)、胎漏難產(chǎn)、行經(jīng)腹痛及產(chǎn)后淤阻等證，素有“血家圣藥、“經(jīng)產(chǎn)良藥之稱。益母草中主要含有生物堿類、二萜類、甾醇、黃酮類、有機酸、脂肪酸類等成分。益母草中生物堿以益母草堿和水蘇堿為主1。藥理作用研究證明，益母草中的主要有效成分益母草堿(lenurine)具有顯著的直接擴張外周血管、增加血流量、抗血小板聚集活性等作用2，可有

2、效的降低血液黏度和進步紅細胞的變形才能，還可調(diào)經(jīng)止血，保護心肌缺血再灌注損傷。在?中國藥典?3及各級別標準中，益母草藥材和益母草制劑的質(zhì)量控制均是以總生物堿為指標，文獻4，5那么采用雷氏鹽剩余比色法測定益母草中鹽酸水蘇堿。而對于益母草堿的含量卻沒有要求，這樣不能保證益母草及其制劑的平安、有效。以益母草為原料的多種制劑，如益母草膠囊、益母草沖劑、益母草口服液、益母草浸膏、益母草片等都是臨床上的常用品,除個別品種在?中國藥典?2022年版增加了含量測定工程外,多數(shù)品種無統(tǒng)一標準,有的品種那么無含量測定要求,使市售的產(chǎn)品質(zhì)量得不到保證。所以建立一個以益母草堿為指標直接檢測益母草藥材及其制劑的統(tǒng)一的質(zhì)

3、量標準是很有意義的。本文嘗試建立益母草堿的高效液相色譜直接檢測方法。1儀器與材料高效液相色譜儀LabAlliane，LabAlliane紫外檢測器del5000，Phenenex18柱(4.6250，5),Anastar色譜工作站；紫外分光光度計，SHIADZU公司，UV2401P。甲醇為一級色譜純；益母草堿對照品購于安徽省新星藥物開發(fā)有限責任公司，純度為99；益母草購于天津市南開區(qū)協(xié)和藥店，經(jīng)我校中藥學院中藥鑒定教研室張麗娟副教授鑒定。2方法與結(jié)果2.1紫外光譜最大吸收測定在200400n之間進展全波長掃描，掃描圖如圖1所示，益母草堿在215n和277n處均有吸收峰，最大吸收277n，應選用

4、277n作為高效液相測定的波長。圖1全波長掃描圖略Fig.1avelengthsanningftherrtalkalids圖2對照品HPL分析圖略Fig.2HPLhratgrafreferenesubstane2.4樣品溶液的制備精細稱取益母草提取物粗品2.2g，溶于10L流動相中，搖勻即得。2.5樣品溶液的測定取樣品溶液用微孔濾膜濾過后，按“2.2.1項下的色譜條件進樣測定，測得溶液的峰面積為1099398，計算質(zhì)量分數(shù)為10.82，在原藥材中的質(zhì)量分數(shù)為0.015。轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.2.6精細度試驗取同一樣品溶液，按“2.2.1項色譜條件下重復進樣6次，測得峰面積分別為1106469、

5、1110843、1099260、1106190、1103044、1112296，平均峰面積為1106350.3，計算得RSD=0.98%。說明儀器精細度符合要求。2.7穩(wěn)定性試驗取同一樣品溶液于室溫下在配制后的0、2、4、6、8、10、12h，按“2.2.1項下的色譜條件進樣測定，測得峰面積分別為1108469、1099351、1120020、1123215、1110362、1109472、1137277，平均峰面積為1115452.3，結(jié)果RSD1.11，可見供試品溶液在室溫條件下12h內(nèi)穩(wěn)定。2.9加樣回收率試驗取益母草堿粗制品3.6g,用流動相溶解后，精細參加益母草堿對照品0.4g，溶液

6、適量，置于25L容量瓶中，以流動相定容至刻度，搖勻。再按樣品測定方法操作測定，測得6次的峰面積分別為790165、786492、807343、810706、799324、813338，平均峰面積為801228，結(jié)果計算回收率為100.08，RSD1.54。3討論3.1波長確實定在200400n之間進展全波長掃描，發(fā)現(xiàn)有兩個吸收峰，215n和277n，但是215n有可能受到甲醇吸收的影響，而且在277n處沒有其他成分的干擾，所以選擇最大吸收波長277n作為檢測波長。3.3本文是在完成了別離益母草堿和水蘇堿的根底上實現(xiàn)了益母草堿的高效液相色譜的直接檢測方法，為益母草藥材的質(zhì)量控制及其他益母草制劑的質(zhì)量控制提供了根據(jù)。該方法簡便易行，結(jié)果準確可靠?！緟⒖嘉墨I】1鄭虎占,董澤宏,佘靖.中藥現(xiàn)代研究與應用.北京:學苑出版社,1998:3803.2丁伯平，熊鶯，徐朝陽，等.益母草堿對急性血瘀證大鼠血液流變學的影響J.中國中醫(yī)藥科技,2022，11(1):36.3國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：一部S.北京：化學工業(yè)出版社，2022：203