超高壓水射流對(duì)黃柏提取液中鹽酸小檗堿含量影響的研究

1、超高壓水射流對(duì)黃柏提取液中鹽酸小檗堿含量影響的研究【摘要】目的研究超高壓水射流對(duì)黃柏提取液中鹽酸小檗堿的影響。方法通過(guò)超高壓150350Pa水射流處理黃柏醇提液，采用薄層色譜法定性鑒別和高效液相色譜法測(cè)定黃柏提取液中鹽酸小檗堿及含量變化。結(jié)果不同超高壓水射流處理黃柏提取液后，黃柏的薄層圖譜中斑點(diǎn)個(gè)數(shù)、大小及Rf值無(wú)顯著差異;高效液相色譜中峰個(gè)數(shù)及形狀亦無(wú)明顯差異，且經(jīng)超高壓150350Pa水射流處理后，黃柏中鹽酸小檗堿的含量較黃柏原液均有不同程度的升高。結(jié)論該研究可為超高壓水射流對(duì)中藥有效成分的影響提供根據(jù)，為研究中藥新的加工處理方法進(jìn)展有益的討論?！娟P(guān)鍵詞】超高壓水射流;高效液相色譜法;薄層

2、色譜法;黃柏;鹽酸小檗堿超高壓水射流技術(shù)是近幾十年開(kāi)展起來(lái)的一項(xiàng)新技術(shù)，它是指普通水經(jīng)過(guò)超高壓加壓器，將水加壓至100400Pa，然后通過(guò)一個(gè)直徑約為0.2左右的細(xì)小寶石噴嘴，產(chǎn)生6001000/s的水箭，可用來(lái)切割各種材料，也可對(duì)各種物體外表進(jìn)展清洗，甚至用來(lái)食品滅菌，以到達(dá)食品保鮮的目的1。黃柏(rterPhelldendrihinensis)為蕓香科植物黃皮樹(shù)PhelldendrnhinenseShnEid.的枯燥樹(shù)皮，習(xí)稱(chēng)“川黃柏，始載于?神農(nóng)本草經(jīng)?，列為上品，具有清熱燥濕、瀉火解毒、退虛熱之成效2，現(xiàn)代藥理學(xué)研究說(shuō)明黃柏具有抗病原微生物、抗?jié)?、降壓、抗心律失常等作?，臨床應(yīng)用非

3、常廣泛。鹽酸小檗堿為黃柏的主要有效成分之一，與抗菌消炎作用親密相關(guān)4，可作為檢測(cè)產(chǎn)品質(zhì)量的主要指標(biāo)之一，但小檗堿對(duì)熱很不穩(wěn)定，受熱易破壞5，為討論中藥新的加工處理方法，進(jìn)步中藥的有效成分含量，本文用HPL法測(cè)定黃柏醇提液經(jīng)超高壓水射流處理前后鹽酸小檗堿的含量。現(xiàn)報(bào)道如下。1儀器、試劑與材料L-20AT高效液相色譜儀，包括L-20AT泵、SPD-20A紫外檢測(cè)器、AT-330柱溫箱、lass-VP數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)、7725i進(jìn)樣閥(日本島津公司);DPSB-3040型超高壓水射流系統(tǒng)(南京大地水刀股份)。黃柏為市售，經(jīng)本院王盛民教授鑒定為蕓香科植物黃皮樹(shù)PhelldendrnhinenseShnEI

4、d.的枯燥樹(shù)皮;鹽酸小檗堿對(duì)照品(購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：110713-200208);乙腈為HPL級(jí)(美國(guó)Fisher公司);所用水為超純水;其余試劑均為分析純。2方法與結(jié)果2.1供試品溶液的制備稱(chēng)取黃柏藥材粗粉約500g，精細(xì)稱(chēng)定，8倍量75%的乙醇回流提取3次，2h/次，合并提取液，過(guò)濾，減壓濃縮，回收乙醇至無(wú)醇味，溶液定容至1500l。量取黃柏提取液200l，用超純水稀釋至25L，分別在150，200，250，300和350Pa壓力條件下，經(jīng)超高壓水射流處理，將各溶液搖勻、靜置，分別取未經(jīng)處理和各處理液的上清液過(guò)0.45微孔濾膜，分別標(biāo)號(hào)為0，1，2，3，4，5號(hào)，作為供試品

5、溶液。2.2對(duì)照品溶液的制備精細(xì)稱(chēng)取在100枯燥5h的鹽酸小檗堿對(duì)照品12.0g，置25l容量瓶中，加流動(dòng)相溶解，稀釋至刻度，搖勻;精細(xì)量取2l，置10l容量瓶中，加流動(dòng)相至刻度，搖勻，即得(每毫升含鹽酸小檗堿0.096g)。2.3丹參的薄層色譜鑒別照薄層色譜法實(shí)驗(yàn)，吸勸2.1和“2.2項(xiàng)制備的供試品溶液和對(duì)照品溶液各10l，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10611)為展開(kāi)劑，置氨蒸氣預(yù)飽和的展開(kāi)缸內(nèi)展開(kāi)，取出晾干，置紫外燈(365n)下檢視。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯一樣顏色的熒光斑點(diǎn)。斑點(diǎn)較為圓整，別離效果好，各供試品斑點(diǎn)大小及Rf值無(wú)顯著差異。

6、2.4HPL色譜條件SyetryR18(4.6250，5)色譜柱(美國(guó)aters);流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液-十二烷基(5050)(每100l加十二烷基磺酸鈉0.1g);檢測(cè)波長(zhǎng)265n;流速1.0lin-1;柱溫30;進(jìn)樣量10l。在該色譜條件下，理論塔板數(shù)按鹽酸小檗堿峰計(jì)算不低于5000，且樣品中鹽酸小檗堿與其他組分別離效果良好，對(duì)照品及樣品的色譜圖見(jiàn)圖1。a-鹽酸小檗堿對(duì)照品b-黃柏樣品.鹽酸小檗堿峰轉(zhuǎn)貼于論文聯(lián)盟.ll.圖1對(duì)照品及黃柏樣品HPL圖2.5線性關(guān)系考察分別精細(xì)吸勸2.2項(xiàng)下制備的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液2，4，6，8，10l進(jìn)樣測(cè)定，記錄各峰面積。以鹽酸小檗堿進(jìn)樣量(g

7、)為橫坐標(biāo)X，峰面積為縱坐標(biāo)Y，得回歸方程Y=982667.66X-2575.19，r=0.9999(n=5)。結(jié)果說(shuō)明鹽酸小檗堿在0.1920.960g范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系。2.6精細(xì)度實(shí)驗(yàn)精細(xì)汲取鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液10l，重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積，得RSD為0.73%。2.7穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)勸2.1項(xiàng)未經(jīng)超高壓水射流處理的供試品溶液，同法分別于2，4，6，8，24h測(cè)定，進(jìn)樣10l/次，結(jié)果RSD為1.82%，說(shuō)明樣品在24h內(nèi)穩(wěn)定。2.8重復(fù)性實(shí)驗(yàn)取同一批樣品粉末，按樣品含量測(cè)定法同法測(cè)定5次，RSD為3.46%，說(shuō)明該測(cè)定方法重復(fù)性比擬好。2.9加樣回收實(shí)驗(yàn)采用加樣回收法，稱(chēng)取含

8、量的黃柏藥材5份，精細(xì)稱(chēng)定，再分別精細(xì)參加鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液(0.40gl-1)20l，按“2.1項(xiàng)下方法制備供試品溶液，在上述色譜條件下進(jìn)樣10l，記錄色譜圖，結(jié)果鹽酸小檗堿平均回收率為95.1%，RSD為1.15%(n=5)。結(jié)果見(jiàn)表1。表1鹽酸小檗堿回收率實(shí)驗(yàn)2.10樣品的測(cè)定精細(xì)吸勸2.1項(xiàng)和“2.2項(xiàng)下制備的供試品溶液和對(duì)照品溶液各10l分別進(jìn)樣5次，按上述色譜條件測(cè)定鹽酸小檗堿含量。結(jié)果見(jiàn)表2。表2樣品測(cè)定結(jié)果3討論黃柏為常用中藥，鹽酸小檗堿為主要有效成分之一，其含量與黃柏的質(zhì)量親密相關(guān)。小檗堿含量的測(cè)定方法有薄層掃描法6、紫外分光光度法7和高效液相色譜法8等。本文選用離子對(duì)高效

9、液相色譜法測(cè)定鹽酸小檗堿的含量，0.1%的十二烷基磺酸鈉為反離子，能對(duì)待測(cè)成分起到改仁慈好的別離效果。本實(shí)驗(yàn)以鹽酸小檗堿為指標(biāo)，測(cè)定經(jīng)150350Pa不同壓力水射流處理后的黃柏醇提取液。結(jié)果說(shuō)明：黃柏提取液經(jīng)超高壓水射流處理后，鹽酸小檗堿的含量均有不同程度的增加，以原液中鹽酸小檗堿含量36.7gg-1為100%計(jì)算，經(jīng)150，200，250，300Pa和350Pa超高壓力處理后的溶液中，鹽酸小檗堿含量分別增加了2.30%，5.29%，6.39%，8.43%和0.58%。在150300Pa超高壓范圍內(nèi)，隨著壓力上升，鹽酸小檗堿的含量依次升高，其原因可能是超高壓力破壞了與小檗堿結(jié)合的非共價(jià)鍵(氫鍵、離子鍵、疏水鍵等)9，小檗堿游離出來(lái)，且隨著壓力的增加，破壞程度增大，游離的小檗堿也就增多，因此測(cè)得的鹽酸小檗堿含量依次升高;也可能是與鹽酸小檗堿構(gòu)造相近的成分轉(zhuǎn)化而來(lái)。在350pa超高壓條件下，超高壓處理前后鹽酸小檗堿的含量無(wú)顯著性差異，原因可能是在350pa超高壓處理后，處理液的溫度迅速上升，由于游離態(tài)的小檗堿