《臨床微生物檢驗(yàn)問與答》系列之一

1、臨床微生物檢驗(yàn)問與答系列第一篇 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的管理第一章 臨床微生物 實(shí)驗(yàn)室的一般管理第一節(jié) 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本建設(shè)一臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的功能和設(shè)計(jì)(一) 當(dāng)代臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的功能是什么？答：當(dāng)代臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的功能不應(yīng)該僅僅是檢驗(yàn)的場(chǎng)所而是應(yīng)與臨床感染性疾病的流行病史密切結(jié)合，建立分離、鑒定樣品中病原微生物的方法學(xué)，并進(jìn)行藥物敏感試驗(yàn)。開展本單位的耐藥監(jiān)測(cè)，為臨床醫(yī)生經(jīng)驗(yàn)用藥和目標(biāo)用藥提供參考依據(jù)。結(jié)合臨床需要開展科學(xué)研究，不斷建立滿足臨床工作所需的現(xiàn)行有效的檢驗(yàn)項(xiàng)目，淘汰陳舊的、無用或錯(cuò)誤的微生物檢驗(yàn)項(xiàng)目。追溯傳染源，降低醫(yī)院感染率。(二)、 是否每個(gè)醫(yī)院必須建立臨床微

2、生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室？微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)歸屬哪一 部分更合理？答：根據(jù)衛(wèi)生部2004年285號(hào)文件提示，“對(duì)二級(jí)或二級(jí)以下的醫(yī)院也應(yīng)建立臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行病原微生物的分離、藥敏試驗(yàn)和質(zhì)量控制?！彼越⑽⑸飳W(xué)實(shí)驗(yàn)室是醫(yī)院的必須，根據(jù)所在醫(yī)療機(jī) 構(gòu)級(jí)別建立相應(yīng)生物安全防護(hù)級(jí)別的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，開展?jié)M足臨床需要的檢驗(yàn)項(xiàng)目；無明確的官方文件，根據(jù)目前中國(guó)已有的實(shí)驗(yàn)室格局，微生物室歸屬于檢驗(yàn)科。在美國(guó)、日本等國(guó)家臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室歸屬于病理科，從有利于生物安全管理角度考慮，臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室與病理實(shí)驗(yàn)室、寄生蟲實(shí)驗(yàn)室可同屬一個(gè)部門或獨(dú)立成立一部門較合理。(三)、? 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的建筑材料有什么特殊

3、要求？答：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的桌面應(yīng)由無化學(xué)、無生物毒性，易消毒、易清洗，抗腐蝕、抗吸污、防水的光滑材料制成。放置承重設(shè)備的桌子強(qiáng)調(diào)其足夠的牢固性。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)不能鋪設(shè)地毯，地面材料應(yīng)具有耐清洗、耐消毒，防滑的性能；墻面也應(yīng)符合便于清洗、消毒、不易吸附、光潔的原則。(四)、? 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的基本設(shè)施有什么特殊要求？答：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)有足夠的空間，根據(jù)菌毒種劃分不同區(qū)域，結(jié)核菌檢測(cè)、絲狀真菌檢測(cè)應(yīng)與普通細(xì)菌檢測(cè)分開；微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室至少應(yīng)有兩個(gè)洗手水池，其中一個(gè)作為染色或工作之用。另一個(gè)作為操作人員離開實(shí)驗(yàn)室前洗手之用。該洗手池應(yīng)設(shè)在近門口，采用感應(yīng)式或腳踏控制的龍頭；用洗手液而不是肥皂作手的清潔。實(shí)

4、驗(yàn)室內(nèi)的無菌室，用于傾倒培養(yǎng)基或其他無菌操作。無菌室內(nèi)要有兩道緩沖區(qū)，并設(shè)門。無條件設(shè)置無菌室的，可用超凈工作臺(tái)代替；微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的每一個(gè)工作區(qū)都應(yīng)安裝紫外燈，合理的高度應(yīng)距離桌面1m；微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室必須配備相應(yīng)級(jí)別的生物安全柜，用于接種樣品，分離細(xì)菌、藥敏試驗(yàn)等產(chǎn)生氣溶膠的實(shí)驗(yàn)活動(dòng)；微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的工作臺(tái)應(yīng)裝臺(tái)燈，用于顯微鏡使用，肉眼觀看細(xì)菌溶血現(xiàn)象，玻片凝集反應(yīng)，紙片法藥敏試驗(yàn)的抑菌環(huán)等。(五)、? 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的耐火材料應(yīng)用哪一級(jí)？答：應(yīng)用二級(jí)耐火材料。二微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的布局要求(一)、? 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的布局有什么特殊要求？答：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的布局應(yīng)符合保護(hù)工作人員的健康，防止交叉

5、感染，有利于樣品送檢和保證工作質(zhì)量的要求。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)劃分為三大區(qū)域，包括清潔區(qū)，操作區(qū)和無菌區(qū)。清潔區(qū)包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基制備室和試劑儲(chǔ)藏。操作區(qū)也是微生物室的污染區(qū)，用于樣品接種、分離、鑒定、藥敏試驗(yàn)。無菌區(qū)是指無菌室，主要用于滅菌后物品的分裝、培養(yǎng)基的傾注等活動(dòng)，實(shí)驗(yàn)室空間不足的可用超凈臺(tái)代替無菌室。(二)、? 如何合理分配微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室操作區(qū)的布局？答：操作區(qū)布局應(yīng)根據(jù)操作流程次序按單一方向布局，如樣本接收、樣品接種、培養(yǎng)、分離鑒定、藥物敏感試驗(yàn)、結(jié)果報(bào)告等；根據(jù)上述的程序，可合理設(shè)置生物安全柜或洗手池的所在位置。(三)、? 如何安排結(jié)核菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的布局？答：結(jié)核菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)

6、室應(yīng)與普通細(xì)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室分開，實(shí)驗(yàn)室的面積不應(yīng)小于10平方米，按功能分為操作區(qū)和相對(duì)潔凈區(qū)。操作區(qū)用于痰涂片制備、染色，相對(duì)潔凈區(qū)用于顯微鏡檢查和登記。結(jié)核菌實(shí)驗(yàn)室必須有放置生物安全柜和保存必要涂片、病人資料的空間便于感染源的調(diào)查和資料的保存。第二節(jié) 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全管理一臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的消毒滅菌(一)、? 消毒和滅菌有什么不同？答：消毒是指殺死物體上的致病性微生物。滅菌是指將物體上所有微生物全部殺死。(二)、? 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室用紫外線作為空氣消毒有何要求？答：應(yīng)選擇紫外線波長(zhǎng)在250-265nm的燈管；由于紫外線的消毒僅限于物體直射表面，所以紫外燈應(yīng)安裝在距桌面1-2.5m

7、處比較合理;為了保持紫外線的消毒效果在進(jìn)行紫外線消毒的工作室應(yīng)少灰塵,保持相對(duì)濕度不超過50%;定期測(cè)試紫外線燈輻照效果和空氣消毒效果,檢測(cè)結(jié)果超標(biāo)的應(yīng)定期更換紫外燈管。(三)、? 如何選擇微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室使用的化學(xué)消毒劑?答：應(yīng)根據(jù)使用目的不同選擇消毒劑，如，對(duì)實(shí)驗(yàn)室的地面和桌面消毒可用含氯消毒劑；用于結(jié)核菌檢驗(yàn)操作的桌面和地面的消毒可用醇類劑；用于操作人員皮膚消毒可使用70%酒精；不能高壓的器械可用戊二醛消毒等。(四)、? 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物廢棄物品應(yīng)如何處置？答：凡被微生物污染的一切物品包括接種后的樣本、培養(yǎng)物等均應(yīng)用高壓蒸汽滅菌；凡被微生物污染的動(dòng)物或動(dòng)物尸體應(yīng)用焚燒爐焚燒；污染的移液

8、器材、玻片等應(yīng)先用消毒液浸泡一定時(shí)間然后高壓滅菌處置。(五)、? 如何保證消毒劑的有效性？答：為了保證消毒劑的有效性，首先應(yīng)知道所使用的消毒劑原液濃度，有效消毒濃度和有效使用時(shí)間；如含氯消毒劑，其有效成分是次氯酸鈣，常用的漂白粉含有效氯25-32%。優(yōu)氯凈（二氯異氰尿酸鈉，含有效氯60%。在知道原液濃度的基礎(chǔ)上根據(jù)使用的目的不同，配制不同的應(yīng)用濃度；又如過氧乙酸一般原濃度在20%，應(yīng)用濃度是0.2-0.4%,但在細(xì)菌芽孢消毒時(shí)應(yīng)用1%的濃度。并應(yīng)和醫(yī)院感染部門合作定期對(duì)消毒劑效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)。(六)、? 結(jié)核菌實(shí)驗(yàn)室消毒的要求是什么？答 檢測(cè)后的痰樣品、被污染的一次性用品和實(shí)驗(yàn)室垃圾均應(yīng)經(jīng)高壓滅菌

9、后丟棄，或使用專用的焚燒爐或固定的垃圾坑進(jìn)行焚燒；每次完成檢查后，操作臺(tái)和實(shí)驗(yàn)區(qū)域內(nèi)要用紫外線近距離照射消毒2h以上；實(shí)驗(yàn)過程中，如樣品泄漏污染操作臺(tái)和地面，應(yīng)用大于污染面積的紗布、或衛(wèi)生紙吸滿5%的苯酚溶液或70%酒精，覆蓋污染區(qū)，30分鐘后移去，再用紫外線近距離照射。二生物安全管理基本準(zhǔn)則(一)、臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理官方有哪些文件？答：臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全管理的文件主要有2002年12月衛(wèi)生部頒布的（WS233）行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)“微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則”，2004年4月中華人民共和國(guó)質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局頒布的（GB19489-2004）國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)“實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要

10、求”，2004年11月12日國(guó)務(wù)院頒布424號(hào)文件病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例。2005年12月28日衛(wèi)生部發(fā)布的第45號(hào)令“可感染人類的高致病性病原微生物菌毒種或樣品運(yùn)輸管理規(guī)定”，2006年1月11日衛(wèi)生部印發(fā)的“人間傳染的病原微生物名錄”，2006年中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)制定的CNAS-CL05實(shí)驗(yàn)室生物安全認(rèn)可原則等。(二)、普通臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)屬于哪一級(jí)別的生物安全防護(hù)實(shí)驗(yàn)室？答：按照管理?xiàng)l例，根據(jù)病原微生物的傳播方式，可能發(fā)生的感染類型和嚴(yán)重程度及實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備的防御措施可將實(shí)驗(yàn)室分為4個(gè)生物安全防護(hù)級(jí)別，分別為BLS-1BLS-4。普通臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)達(dá)到BLS-2

11、標(biāo)準(zhǔn)。(三)臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備哪些必要的規(guī)章制度保證工作人員的生物安全？答：任何微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室都必須建立實(shí)驗(yàn)室生物安全管理制度；制度中應(yīng)規(guī)定工作人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室應(yīng)穿工作服、戴工作帽、乳膠手套、必要時(shí)還應(yīng)戴防護(hù)眼鏡；必須在二級(jí)生物安全柜中進(jìn)行感染樣品的操作；操作區(qū)應(yīng)配備洗眼器，必要時(shí)配備緊急噴淋裝置；在生物安全實(shí)驗(yàn)室的入口都應(yīng)貼生物安全防護(hù)級(jí)別的標(biāo)志；在盛有傳染性物質(zhì)的容器明顯部位貼生物危險(xiǎn)標(biāo)志；用特殊的耐扎容器裝尖銳器具并放在固定處，防止意外刺傷造成實(shí)驗(yàn)室感染。(四臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采納什么措施預(yù)防微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室對(duì)外界環(huán)境的污染？答：嚴(yán)禁實(shí)驗(yàn)室工作人員隨意將生物樣品、菌株或生物廢棄物帶出

12、實(shí)驗(yàn)室；實(shí)驗(yàn)室工作人員離開實(shí)驗(yàn)室前必須按規(guī)定在流水下洗手，用烘干或自然干燥或使用一次性擦手紙的方式吸干水分。實(shí)驗(yàn)室的廢棄物要進(jìn)行分類，污染的廢棄物必須放置在專用的并有生物危害標(biāo)志的垃圾袋盛放；使用后的銳器直接放于利器盒中，嚴(yán)禁把用過的針頭重新放入套管內(nèi)；接種后的樣本、培養(yǎng)物或其他生物廢物必須經(jīng)高壓滅菌后廢棄；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物必須經(jīng)焚燒后廢棄；負(fù)責(zé)廢棄物的工作人員必須誠(chéng)實(shí)、認(rèn)真、并具有高度的責(zé)任感應(yīng)經(jīng)過有關(guān)部門正規(guī)培訓(xùn)第三節(jié) 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的人力資源管理一人力資源檔案和對(duì)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人的要求(一)、臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室人力資源信息中應(yīng)包括哪些必須的內(nèi)容？答：人力資源信息應(yīng)包括：相關(guān)人員最終學(xué)歷、能力指標(biāo)

13、如英語水平、計(jì)算機(jī)應(yīng)用或設(shè)計(jì)能力、當(dāng)前所具備的證書和執(zhí)照，如對(duì)使用高壓消毒蒸鍋的人員必須有上崗證等；該人員以前的工作資料；職務(wù)說明；繼續(xù)教育和業(yè)績(jī)記錄；年度能力的評(píng)估；對(duì)不利事件或事故報(bào)告的特別規(guī)定；人員的健康、免疫及職業(yè)暴露狀況的記錄。?(二)、?臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的負(fù)責(zé)人的人力資源管理職責(zé)是什么？答：實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人應(yīng)有計(jì)劃地安排對(duì)實(shí)驗(yàn)室在職人員進(jìn)行基礎(chǔ)教育、研究生教育、繼續(xù)教育和實(shí)驗(yàn)室特殊的培訓(xùn)項(xiàng)目，不斷提高工作人員的業(yè)務(wù)水平；對(duì)國(guó)家必須有上崗證書才能上崗的崗位，負(fù)責(zé)人必須安排好相應(yīng)人員，接受培訓(xùn)并通過考核方能上崗；每年度要對(duì)工作人員的業(yè)績(jī)和不足進(jìn)行評(píng)估，并作出相應(yīng)處理；負(fù)責(zé)人應(yīng)量才用人，對(duì)

14、每一員工的業(yè)務(wù)發(fā)展作出安排并創(chuàng)造條件努力實(shí)現(xiàn)。(三)、臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室管理人員應(yīng)具備哪些能力？答：能組織實(shí)驗(yàn)室人員合理的選擇對(duì)臨床服務(wù)的試驗(yàn)，對(duì)異常實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的解釋；有能力參與臨床感染性疾病的會(huì)診，為臨床醫(yī)生提供感染性疾病診斷和治療的建議；應(yīng)具備良好的溝通能力，開展對(duì)患者或相關(guān)部門的聯(lián)絡(luò)；建立完整的質(zhì)量管理體系，開展室內(nèi)和室間質(zhì)量控制活動(dòng)，保證實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)的可靠性；根據(jù)國(guó)家或衛(wèi)生部要求建立嚴(yán)格的生物安全制度；制定并指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)室的發(fā)展規(guī)劃； 對(duì)在職員工提供繼續(xù)教育的計(jì)劃；建立嚴(yán)密規(guī)章制度，確保在職員工保持良好的職業(yè)道德。二繼續(xù)教育和考核(一)、本科檢驗(yàn)系畢業(yè)生或研究生進(jìn)入微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室是否需要崗前培

15、訓(xùn)？答：無論本科檢驗(yàn)系畢業(yè)生或研究生進(jìn)入微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室同樣需要進(jìn)行崗前培訓(xùn)，他們與中?；虼髮Ｉ膮^(qū)別是基礎(chǔ)知識(shí)和理論掌握的程度不同。對(duì)于他們，可能掌握的時(shí)間會(huì)比大中專的新員工快、理解好，但崗前培訓(xùn)的目的是包括書本理論與實(shí)踐的結(jié)合、新的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)的學(xué)習(xí)、新的生物安全的法規(guī)、實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)如何用于臨床診斷和治療等，所以本科大學(xué)生和研究生同樣需要崗前培訓(xùn)；在職人員的崗前培訓(xùn)是保證人力資源質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。(二)、對(duì)不同基礎(chǔ)的新員工如何進(jìn)行繼續(xù)教育？答：鼓勵(lì)員工利用業(yè)余時(shí)間進(jìn)行繼續(xù)教育，完成學(xué)歷，不斷提高自身素質(zhì)。由于工作需要行政應(yīng)安排進(jìn)行繼續(xù)教育如電腦技術(shù)，專業(yè)學(xué)習(xí)、某些特殊工種的上崗證獲得等。實(shí)驗(yàn)室

16、主任根據(jù)其本人的表現(xiàn)制定對(duì)每個(gè)員工的培訓(xùn)規(guī)劃，發(fā)展目標(biāo)，對(duì)已接受中等教育的人員，要求他們通過繼續(xù)教育獲得高一級(jí)的學(xué)歷業(yè)務(wù)技術(shù)，并不斷培養(yǎng)科研班子；有目標(biāo)地培養(yǎng)人才，發(fā)現(xiàn)有能力的有事業(yè)性的員工提拔到管理崗位或?qū)W術(shù)帶頭人的崗位充分發(fā)揮每個(gè)人的學(xué)習(xí)和工作熱情。?(三)、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對(duì)受雇或簽約的工作人員如何建立其工作檔案？答：實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人對(duì)與檢測(cè)相關(guān)的技術(shù)和關(guān)鍵技術(shù)人員都應(yīng)建立技術(shù)檔案，在檔案中不僅需包括該人員持有何種證書和執(zhí)照，如對(duì)使用高壓消毒蒸鍋的人員必須有上崗證等；該人員以前的工作資料；職務(wù)說明；繼續(xù)教育和業(yè)績(jī)記錄；能力的評(píng)估；對(duì)不利事件或事故報(bào)告的特別規(guī)定；人員的健康狀況、免疫及職業(yè)

17、暴露狀況的記錄，同時(shí)應(yīng)保留對(duì)當(dāng)前工作的描述，如從事檢測(cè)和校正方面工作的責(zé)任、對(duì)檢測(cè)結(jié)果的評(píng)價(jià)能力、在工作中受過的獎(jiǎng)勵(lì)或懲罰和管理能力等。(四)、實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人如何從組織上保證微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的工作質(zhì)量？答：保證實(shí)驗(yàn)室開展室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量評(píng)價(jià)所需的經(jīng)費(fèi)；保證微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室完成各項(xiàng)工作應(yīng)具備的必要設(shè)備、試劑、材料等；保證承擔(dān)相應(yīng)工作的技術(shù)人員參加必要的學(xué)術(shù)活動(dòng)獲得新進(jìn)展信息的機(jī)會(huì)；跟蹤衛(wèi)生部和相關(guān)機(jī)構(gòu)對(duì)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的有關(guān)要求并爭(zhēng)取上級(jí)領(lǐng)導(dǎo)的支持和理解，及時(shí)完成硬件和人員培訓(xùn)方面的準(zhǔn)備工作。第二章 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的專業(yè)管理第一節(jié) 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的作業(yè)指導(dǎo)書編寫一標(biāo)準(zhǔn)操作程序的編寫(一)、SO

18、P的含義是什么？答：SOP是標(biāo)準(zhǔn)操作程序的英文縮寫（Standard Operation Program）。(二)、SOP文件應(yīng)包括哪些主要內(nèi)容？答：SOP文件分為不同的類型，在內(nèi)容上也有所不同，對(duì)某一個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目的SOP應(yīng)包括以下內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)原理或檢驗(yàn)?zāi)康模粯悠返姆N類及采集的要求；使用的試劑；使用的儀器；操作步驟；質(zhì)量控制程序；結(jié)果解釋及臨床價(jià)值；方法的局限性；參考文獻(xiàn)；如是使用設(shè)備的SOP應(yīng)包括：操作的原理和組成；使用的目的和范圍；儀器的校正程序；檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的操作步驟；質(zhì)量控制程序；設(shè)備的功能；軟件設(shè)置；操作過程；注意事項(xiàng)；設(shè)備的保養(yǎng)和維護(hù)；故障及排除等。二作業(yè)指導(dǎo)書(一)、何謂作業(yè)指導(dǎo)書？答：

19、作業(yè)指導(dǎo)書是工作時(shí)的規(guī)程或規(guī)范類的文件，如對(duì)某一檢驗(yàn)方法、校正程序、儀器設(shè)備維護(hù)過程，可用于直接指導(dǎo)操作人員進(jìn)行各種質(zhì)量控制活動(dòng)時(shí)的執(zhí)行性文件。?(二)、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的作業(yè)指導(dǎo)書主要有哪些內(nèi)容?答：主要有不同類細(xì)菌鑒定操作規(guī)程;細(xì)菌紙片法藥敏試驗(yàn)操作規(guī)程;細(xì)菌對(duì)抗菌藥物最低抑菌濃度(MIC)測(cè)定的操作規(guī)程;細(xì)菌鑒定和藥敏試驗(yàn)室內(nèi)質(zhì)量控制的程序;染色方法的操作規(guī)程;培養(yǎng)基制作的操作規(guī)程;所用每一種設(shè)備的操作規(guī)程等(三)、如何設(shè)計(jì)作業(yè)指導(dǎo)書的格式?答：臨床微生物作業(yè)指導(dǎo)書中的一項(xiàng)試驗(yàn)應(yīng)成為一個(gè)獨(dú)立的程序，至少應(yīng)有頁眉，頁眉應(yīng)標(biāo)明指導(dǎo)書的編寫者，負(fù)責(zé)人、編寫日期、儀器或試驗(yàn)的名稱;正文內(nèi)容應(yīng)包括試

20、驗(yàn)或儀器的工作目的;操作的內(nèi)容、步驟、方法、結(jié)果判斷、結(jié)果解釋；質(zhì)量控制的要求；操作注意事項(xiàng)；流程；參考文獻(xiàn)（應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)的來源、版本）。(四)、作業(yè)指導(dǎo)書多長(zhǎng)時(shí)間更新較為合理?更新的程序?答：作業(yè)指導(dǎo)書應(yīng)隨時(shí)更新對(duì)臨床有誤導(dǎo)的試驗(yàn),建議3-5年作一次大的調(diào)整編制。作業(yè)指導(dǎo)書的更改不能由某一操作者任意改動(dòng),首先應(yīng)由臨床醫(yī)生或操作者提出更改或取消該試驗(yàn)的理由，或由于目前的方法引起結(jié)果誤差的實(shí)例，實(shí)驗(yàn)室主任與相關(guān)人員定期對(duì)存在的問題進(jìn)行討論，決定某一試驗(yàn)或方法是否繼續(xù)采用或用新的替代方法。(五)、作業(yè)指導(dǎo)書和SOP文件有什么區(qū)別?答：作業(yè)指導(dǎo)書是一種規(guī)范類的執(zhí)行性的文件,指導(dǎo)操作人員進(jìn)行各種業(yè)務(wù)活動(dòng)。

21、從功能上講SOP文件與作業(yè)指導(dǎo)書有非常多的相似性，但SOP文件需要按一定的要求、內(nèi)容、格式、標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行編寫，SOP文件的編寫的內(nèi)容更具操作性和實(shí)用性。如關(guān)于檢驗(yàn)項(xiàng)目操作程序ISO15189：或ISO17025 文件的相關(guān)部分對(duì)檢驗(yàn)規(guī)程的編寫均有一定的要求，而且要求其內(nèi)容必須與當(dāng)前的檢驗(yàn)方法和操作步驟完全相一致。(六)、如何編寫細(xì)菌鑒定的SOP文件?答：細(xì)菌鑒定的SOP可以按細(xì)菌類別為基礎(chǔ)，寫出每一類細(xì)菌鑒定的程序和主要鑒定試驗(yàn)的SOP文件，包括細(xì)菌鑒定的染色反應(yīng)、初步鑒定試驗(yàn)如觸酶試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)等，鑒定細(xì)菌的主要生化反應(yīng)、血清學(xué)反應(yīng)、動(dòng)物試驗(yàn)直到鑒定完成。如按不同的樣品類型作為主干線編寫，在編

22、寫上述內(nèi)容前應(yīng)包括細(xì)菌分離程序的SOP文件。(七)、如何編寫痰及下呼吸道樣品分離鑒定的SOP文件？答：應(yīng)包括以下內(nèi)容：?概況：正常人體的下呼吸道是無菌的,上呼吸道有正常菌群棲居。下呼吸道的分泌物在經(jīng)上呼吸道排出時(shí),常受口腔正常菌群污染。當(dāng)病人出現(xiàn)咳嗽、咳痰、呼吸困難、咯血等癥狀時(shí)應(yīng)采樣檢查，采集抗生素使用前樣品。檢樣首先作顯微鏡檢查，細(xì)菌培養(yǎng)。對(duì)分離的病原體應(yīng)盡力鑒定到種并按CLSI抗微生物藥敏試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作，為醫(yī)生選擇抗生素提供參考。?檢驗(yàn)材料與設(shè)備:要標(biāo)明該材料來源如抗酸染色液：購(gòu)自生物梅里埃診斷產(chǎn)品（上海）有限公司。要列出材料、設(shè)備的名稱和來源。?樣品檢驗(yàn)步驟：從樣品的采集、前處理、接種分

23、離、初步鑒定、種的鑒定、藥敏試驗(yàn)以及檢驗(yàn)結(jié)果報(bào)告方式均應(yīng)按規(guī)范編寫，提供給操作者遵循。?臨床意義：判斷痰培養(yǎng)分離的細(xì)菌是致病菌或條件致病菌十分重要，某些國(guó)家的指南提示：在涂片和培養(yǎng)見到同樣的細(xì)菌并有細(xì)胞吞嗜現(xiàn)象或細(xì)菌涂片中每一油鏡視野菌數(shù)大于20個(gè)或占所有細(xì)菌的50%以上的優(yōu)勢(shì)菌有最大可能是致病菌。類似的提示應(yīng)在SOP文件中體現(xiàn)。?操作注意事項(xiàng)：采集樣品以清晨為佳，為減少口腔正常菌群污染樣品，采集前應(yīng)先用漱口液充分漱口，并漱口后立即留痰；樣品采集后應(yīng)立即送檢，以防某些細(xì)菌在外環(huán)境中死亡。做結(jié)核分枝桿菌和真菌培養(yǎng)的樣品不能及時(shí)送檢時(shí)，放4C保存，以免雜菌生長(zhǎng)等。?痰液及下呼吸道分泌物樣品細(xì)菌檢驗(yàn)

24、操作流程圖：略。?參考文獻(xiàn)(八、如何編寫細(xì)菌對(duì)藥物的敏感試驗(yàn)的SOP文件？答：對(duì)于細(xì)菌藥敏試驗(yàn)的SOP文件的編寫應(yīng)包括紙片擴(kuò)散方法和最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定；每一種方法都應(yīng)包括常規(guī)藥敏試驗(yàn)藥物種類的選擇;試驗(yàn)原理;藥敏試驗(yàn)的指征;該方法適用的范圍;所需要的材料和設(shè)備;不同類細(xì)菌的藥敏方法和步驟和用培養(yǎng)基的差異;質(zhì)量控制的方法;培養(yǎng)基的配制及用途;標(biāo)準(zhǔn)比濁管的配制;目前使用標(biāo)準(zhǔn)的版本及參考文獻(xiàn)等。(九)、常用培養(yǎng)基或染色液質(zhì)量鑒定文件應(yīng)包括哪些內(nèi)容？答；無論是商品購(gòu)買或自制的實(shí)驗(yàn)材料，都應(yīng)有質(zhì)量鑒定的過程。質(zhì)量鑒定的文件內(nèi)容應(yīng)包括該項(xiàng)目的概述、適用范圍、所需的材料、操作步驟、結(jié)果解釋、報(bào)告方式

25、和參考文獻(xiàn)等。幾乎包括全部日常所用的材料，如革蘭染色液或抗酸染色液質(zhì)量控制程序，染色液質(zhì)控品使用程序；各種培養(yǎng)基質(zhì)量鑒定操作程序等。(十)、培養(yǎng)基的質(zhì)量鑒定操作規(guī)程應(yīng)包含哪些內(nèi)容？答： 以血瓊脂為例， 1.概述：闡明血瓊脂的運(yùn)用目的、質(zhì)控方法、結(jié)果判斷。2.適用范圍，3.材料，4.檢測(cè)方法，5.結(jié)果解釋，6.報(bào)告方式，7.參考文獻(xiàn)。通過對(duì)其一般性狀（厚度、硬度、PH值、表面平整度、濕度）的判別和無菌試驗(yàn)；通過金葡菌、肺炎鏈球菌、溶血鏈球菌標(biāo)準(zhǔn)株在血平板上生長(zhǎng)情況的觀察，判斷血瓊脂培養(yǎng)基質(zhì)量是否合格。(十一)、臨床微生物室應(yīng)用設(shè)備的SOP文件應(yīng)包括哪些項(xiàng)目？項(xiàng)目書寫應(yīng)包含的內(nèi)容?答：臨床微生物室

26、的設(shè)備的SOP文件應(yīng)包括所有的設(shè)備，如分析天平、顯微鏡、麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)管、冰箱、普通培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、二氧化碳培養(yǎng)箱、生物安全柜、自動(dòng)、半自動(dòng)或全自動(dòng)細(xì)菌鑒定系統(tǒng)等。由于不同的設(shè)備功能和使用范圍不同書寫的項(xiàng)目會(huì)稍有不同，但總的內(nèi)容基本相同。每一個(gè)文件中應(yīng)包括該設(shè)備的產(chǎn)品名稱、型號(hào)；原理及檢測(cè)范圍；參數(shù)的設(shè)置及標(biāo)準(zhǔn)；開機(jī)與關(guān)機(jī)程序；操作程序；設(shè)備的保養(yǎng)和維護(hù)；常見故障的處理；基本技術(shù)性能；運(yùn)行環(huán)境要求（電源、溫度、濕度、場(chǎng)地大小等）；操作流程圖等。第二節(jié) 臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量保證管理一室內(nèi)質(zhì)量控制（一）、質(zhì)控菌株1 在標(biāo)準(zhǔn)菌株的來源中，英文縮寫ATCC和NCTC代表什么？答：ATCC代表美國(guó)

27、典型菌株保藏中心；NCTC代表英國(guó)國(guó)家典型菌株保藏中心。2 作為質(zhì)控菌株應(yīng)具備什么特征？答： 作為質(zhì)控菌株首要的條件是能敏感的反應(yīng)質(zhì)量差異的，如反映營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基質(zhì)量的質(zhì)控菌株，一定是對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求高，不容易生長(zhǎng)的苛養(yǎng)菌株；如作為藥敏試驗(yàn)的質(zhì)控菌株，對(duì)抗生素最具敏感；如測(cè)定最低抑菌濃度，那么結(jié)果應(yīng)最處于折點(diǎn)附近的；對(duì)于測(cè)試生化試驗(yàn)培養(yǎng)基的質(zhì)控菌株，應(yīng)具備穩(wěn)定的生物特征，反應(yīng)終點(diǎn)明顯的特征。3 常規(guī)微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制應(yīng)使用哪些標(biāo)準(zhǔn)菌株？答：常規(guī)紙片法藥敏試驗(yàn)的質(zhì)量控制菌株：ATCC 25922 大腸埃希菌、ATCC25923 金黃色葡萄球菌、ATCC 27853 銅綠假單孢菌、ATCC

28、29212 糞腸球菌、ATCC 35218 大腸埃希菌、ATCC 49247 流感嗜血桿菌、ATCC 49766流感嗜血桿菌、ATCC 49226 淋病奈瑟菌、ATCC 49619 肺炎鏈球菌。最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株：ATCC 29213 金黃色葡萄球菌、ATCC 29212 糞腸球菌、ATCC 27853 銅綠假單孢菌、ATCC 25922大腸埃希菌、ATCC 49247 流感嗜血桿菌、ATCC 49766流感嗜血桿菌、ATCC 49226 淋病奈瑟菌、ATCC 49619 肺炎鏈球菌。4? 測(cè)試5%羊血瓊脂和巧克力瓊脂平板質(zhì)量應(yīng)選擇什么標(biāo)準(zhǔn)菌株？答：評(píng)估培養(yǎng)基質(zhì)量應(yīng)執(zhí)行我國(guó)衛(wèi)

29、生部行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（WS232/T2002）測(cè)試5%羊血瓊脂質(zhì)量應(yīng)選擇金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、化膿性鏈球菌（ATCC 19615），肺炎鏈球菌（ATCC 6305）、奇異變形桿菌（ATCC 12453），經(jīng)24h培養(yǎng)可見到有的菌生長(zhǎng)，有的部分抑制以及溶血現(xiàn)象。如化膿性鏈球菌呈小的、溶血的菌落。巧克力瓊脂可選擇流感嗜血桿菌，經(jīng)35C 24h培養(yǎng)生長(zhǎng)良好。5? 對(duì)伊紅美蘭、麥康凱和沙門志賀氏瓊脂（SS）如何選擇標(biāo)準(zhǔn)菌株？合格的指標(biāo)是什么？答：伊紅美蘭培養(yǎng)基要選擇大腸埃希菌（ATCC 25922）、鼠傷寒沙門菌（ATCC 14028）和糞腸球菌（ATCC 29212），經(jīng)24h培養(yǎng)，大腸埃

30、希菌呈蘭黑色菌落；鼠傷寒沙門菌呈無色菌落；糞腸球菌部分抑制。麥康凱瓊脂可選擇大腸埃希菌（ATCC 25922）、鼠傷寒沙門菌（ATCC 14028）、糞腸球菌（ATCC 29212）和奇異變形桿菌（ATCC 12453）。經(jīng)24h培養(yǎng)，大腸埃希菌呈粉紅色菌落；奇異變形桿菌和鼠傷寒沙門菌呈無色菌落；糞腸球菌部分被抑制。測(cè)試SS瓊脂可采用鼠傷寒沙門菌（ATCC 14028）、糞腸球菌（ATCC 29212）、大腸埃希菌（ATCC 25922）、福氏志賀菌（ATCC 12022）。 經(jīng)24h培養(yǎng)，鼠傷寒沙門菌呈無色菌落，有或無黑心；福氏志賀菌生長(zhǎng)，呈無色菌落；大腸埃希菌被部分抑制，呈粉紅色菌落；糞腸

31、球菌被完全抑制。6 怎樣選擇生化反應(yīng)質(zhì)控菌株？答：作為生化反應(yīng)的質(zhì)控菌株，每一個(gè)生化反應(yīng)都應(yīng)選擇2株菌株，其中一株是陰性反應(yīng)，一株陽性反應(yīng)。菌株應(yīng)對(duì)生化反應(yīng)非常穩(wěn)定，最好用標(biāo)準(zhǔn)菌株。7 微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)準(zhǔn)備哪些標(biāo)準(zhǔn)菌株用于生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)控？答：大腸埃希菌、遲緩愛德華菌、肺炎克雷伯菌、陰溝腸桿菌、粘質(zhì)沙雷菌、雷極普魯威登斯菌。上述菌株可對(duì)靛基質(zhì)、甲基紅、伏譜、枸緣酸鹽利用、氨基酸分解、硫化氫產(chǎn)生、苯丙氨酸脫氨酶、尿素酶、葡萄糖產(chǎn)氣等諸多生化反應(yīng)給出明確的測(cè)試結(jié)果。（二）、室內(nèi)質(zhì)控監(jiān)測(cè)項(xiàng)目1如何做染色液的質(zhì)量控制？答：微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室主要的染色液有革蘭染色和抗酸染色。在每次新配制或新購(gòu)入時(shí)必須做

32、質(zhì)控，并記錄日期；革蘭染色液應(yīng)在每天染色前用金黃色葡萄球菌、大腸埃希菌同步染色。抗酸染色每周用非典型分支桿菌同步測(cè)試1次。為了生物安全也可將細(xì)菌制備成濃菌懸液高壓滅菌后冰箱保存作為染色的質(zhì)控菌株。金黃色葡萄球菌染成革蘭陽性（紫色），大腸埃希菌染成陰性（紅色），背景無沉渣和其他細(xì)菌或真菌污染。非典型分支桿菌應(yīng)染成抗酸陽性（紅色）?2如何保證高壓滅菌器的滅菌效果？答：高壓滅菌器的滅菌效果應(yīng)隨物品作每次測(cè)試。可采用3M公司的變色膠條，另外每月至少有一次，用嗜熱脂肪芽孢桿菌測(cè)試其滅菌的效果，并作好記錄。3如何保證培養(yǎng)箱、冰箱和CO2培養(yǎng)箱的正常運(yùn)轉(zhuǎn)？答：實(shí)驗(yàn)室要制定嚴(yán)格的質(zhì)量控制制度，分工包干，專項(xiàng)專人負(fù)責(zé)，每天工作開始第一個(gè)開培養(yǎng)箱、冰箱和CO2培養(yǎng)箱的工作人員和下班前最后離開的工作人員要負(fù)責(zé)記錄培養(yǎng)箱、冰箱和CO2培養(yǎng)箱的溫度和CO2的含量,及時(shí)發(fā)現(xiàn)問題和故障,及時(shí)處理,使對(duì)工作質(zhì)量的影響減低到最小。4分離培養(yǎng)基如何進(jìn)行質(zhì)量控制？答：干粉培養(yǎng)基要根據(jù)有效期的長(zhǎng)短酌量購(gòu)入，新購(gòu)入時(shí)必須用相應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)菌株測(cè)試并記錄。干燥培養(yǎng)基應(yīng)在質(zhì)控記錄中提示開始使用的日期，以便在發(fā)生質(zhì)量差異時(shí)尋找原因。新傾