鞭毛染色法及活菌活動性觀察一

1、鞭毛染色法及活菌活動性觀察第一頁，共十頁。一、實驗目的及要求 了解細菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色的方法；學習用壓滴法觀察細菌的運動性。第二頁，共十頁。二、實驗原理細菌的鞭毛極纖細，直徑一般為0.10.2um，只有用電子顯微鏡才能觀察到。但是，如采用特殊的染色法，則在普通光學顯微鏡下也能看到它。鞭毛染色的基本原理是：即在染色前先用媒染劑處理，讓它沉積在鞭毛上，使鞭毛直徑加粗，然后再進行染色。常用的媒染劑由丹寧酸和氯化高鐵或鉀明礬等配制而成。 第三頁，共十頁。采用鞭毛染色法雖能觀察到鞭毛的形態(tài)、著生位置和數(shù)目，但此法既費時又麻煩。如果僅須了解某菌是否有鞭毛，可采用懸滴法或壓滴法直接在光學顯微鏡下

2、檢查活細菌是否具有運動能力，以此來判斷細菌是否有鞭毛。此法較快速、簡便。懸滴法就是將菌液滴加在潔凈的蓋玻片中央，在其周邊涂上凡士林，然后將它倒蓋在有凹槽的載玻片中央，即可放置在普通光學顯微鏡下觀察。壓滴法是將菌液滴在普通的載玻片上，然后蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。第四頁，共十頁。三、實驗器材1.菌種：蘇云金芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單細胞菌2.染色液和試劑：硝酸銀染色液、香柏油、二甲苯、0.01美蘭水溶液。3.儀器、材料：載玻片、擦鏡紙、吸水紙、記號筆、鑷子、接種環(huán)，顯微鏡。第五頁，共十頁。四、實驗方法（一）硝酸銀染色法1.清洗玻片 選擇光滑無裂痕的玻片，置洗衣粉過濾液中（洗衣粉煮沸后用濾

3、紙過濾，以除去粗顆粒），煮沸20min。取出用清水沖洗，瀝干水后，置95%乙醇中浸泡，用時取出在火焰上燒去酒精。2.菌液的制備：菌齡較老的細菌容易失落鞭毛，所以在染色前應將待染細菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基斜面上連續(xù)移接3-5代，以增強細菌的運動力。最后一代菌種放恒溫箱中培養(yǎng)1216h。然后，用接種環(huán)挑取斜面與冷凝水交接處的菌液數(shù)環(huán)，移至盛有12mL無菌水的試管中，使菌液呈輕度混濁。將該試管放在37恒溫箱中靜置10min（放置時間不宜太長，否則鞭毛會脫落），讓幼齡菌的鞭毛松展開。第六頁，共十頁。3.制片：吸取少量菌液滴在潔凈玻片的一端，立即將玻片傾斜，使菌液緩慢地流向另一端，用吸水紙吸去多余

4、的菌液。涂片放空氣中自然干燥。4.染色滴加A液，染3-5min；用蒸餾水充分洗凈A液；用B液沖去殘水，再加B液于玻片上覆蓋染色數(shù)秒至1min，必要時在酒精燈微火加熱直至顯褐色，立即用蒸餾水洗，自然干燥。5.鏡檢：先低倍，再高倍，最后用油鏡檢查。 菌體呈深褐色，鞭毛呈淺褐色。 第七頁，共十頁。（二）壓滴法1.制備菌液：從幼齡菌斜面上，挑數(shù)環(huán)菌放在裝有12mL無菌水的試管中，制成輕度混濁的菌懸液。2.取23環(huán)稀釋菌液于潔凈載玻片中央，再加入一環(huán)0.01%的美藍水溶液，混勻。3.用鑷子夾一潔凈的蓋玻片，先使其一邊接觸菌液，然后慢慢地放下蓋玻片，防止產(chǎn)生氣泡。4.鏡檢：將光線適當調(diào)暗，先用低倍鏡找到觀察部位，再用高倍鏡觀察。要區(qū)分細菌鞭毛運動和布朗運動，后者只是在原處左右擺動，細菌細胞間有明顯位移者，才能判定為有運動性。第八頁，共十頁。五、實驗報告繪圖表示鞭毛細菌的形態(tài)特征，并用箭頭表示其運動方向。六、思考題1.鞭毛染色法準確鑒定細菌是否具有鞭毛要注意的細節(jié)。2.壓滴法中，發(fā)現(xiàn)視野內(nèi)大量的細菌朝一個方向運動，原因何在？第九頁，共十頁。內(nèi)容總結(jié)鞭毛染色法及活菌活動性觀察。細菌的鞭毛極纖細，直徑一般為0.10.2um，只有用電子顯微鏡才能觀察到。壓滴法是將菌液滴在普通的載玻片上，然后蓋上蓋玻片，置顯微鏡下觀察。取出用清水沖洗，瀝干水后，置95%乙醇中浸泡，用時取出在